工具酶與基因工程-powerpoint演示文稿(編輯修改稿)
2025-02-06 01:13 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。 4． 兩種片段同樣大小 （ A1 A2 A3… E1 E2 E3… ） 。 幾次實(shí)驗(yàn)后 ， 大小不一 致以 虛線表示不肯定 。 八 ． DNA切接反應(yīng)的影響因素 1． 限制性內(nèi)切酶的切割反應(yīng) 1050mmol/L TrisHCl (), 10mmol/L MgCl2, 1mmol/L DTT (二硫蘇糖醇 ) 只是鹽濃度不同 ， 分低鹽 ， 中鹽 ， 高鹽組 , 1） 需兩種酶切同一分子 ， 酶對鹽濃度相同 ， 可同時(shí)反應(yīng) 。 2）需兩種酶切同一分子，酶對鹽濃度要求差別不大，中，高 鹽，可同時(shí)反應(yīng)。利于酶較貴重的鹽濃度緩沖液。 3） 兩種酶切同一分子 ， 酶對鹽濃度要求差別大 ， 低 ， 高鹽 ， 不可 同時(shí)反應(yīng) 。 a) 低鹽組先切 ， 加熱滅活后 ， 補(bǔ)加鹽濃度再切 。 b) 沉淀后重新加入另一種鹽濃度緩沖液 c） 兩種酶不能同時(shí)反應(yīng) ， 有先有后 。 圖 316 2． 酶量 標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng) 37度反應(yīng) 1小時(shí)完全水解 1微克所需的酶量 。 — DNA 5微升 10倍緩沖液 2微升 酶 1微升 （ 10倍過量 ） 無菌水 12微升 總體積 20微升 酶加入量不超過總體積十分之一 . 九 ． 酶切位點(diǎn)的確定 line DNA W=N+1 ccc DNA W=N 1. 片段大小 2450 line DNA W=N+1 ccc DNA W=N 2. 兩單酶切成三個片段 ,說明各有兩個切點(diǎn) p p 750 500 1200 3 .Pst1, 1200, 750不見 , 說明 : (1) 另外兩個酶的切點(diǎn)在其中 xppx Xbo1 500 (2) 兩個 Pst1酶的切點(diǎn)相距 500 500 1200 4. 1200300+900(被 Xbo1) xpp x 300 900 Pst1距 Xbo1為 300 750 5. 750— 150+600 xppx 150 600 Pst1距 Xbo1為 600
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