基因工程常用的工具酶(編輯修改稿)
2025-02-02 02:26 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 構(gòu)： 酶緩沖液組成： 甘油濃度： MgCl2： NaCl/KCl： TrisHCl： β巰基乙醇 /二硫蘇糖醇（ DTT）： 牛血清白蛋白（ BSA） ： 第二節(jié) DNA連接酶 DNA連接酶：能夠催化雙鏈 DNA片段相鄰的 3‘羥基與 5’磷酸基形成磷酸二酯鍵的酶 作用特點 只能連接雙螺旋 DNA分子，不能連接單鏈 DNA分子； DNA鏈上必須具有游離的 3’OH和 5‘P； 只能封閉 DNA鏈上磷酸二酯鍵切口，不能封閉多個核酸分子缺失形成 的裂口； 需要吸能： ATP/NAD+ 連接方式 缺口 DNA: 平齊末端 DNA： 粘性末端 DNA： 5’ 5’ 3’ 3’ OH P 5’ 5’ 3’ 3’ OH P P OH 5’ 5’ 3’ 3’ 基因工程中常用的連接酶 T4噬菌體 DNA連接酶 （ T4連接酶） 大腸桿菌 DNA連接酶 熱穩(wěn)定性 DNA連接酶 第三節(jié) DNA聚合酶 DNA聚合酶：能夠催化 DNA復(fù)制和修復(fù) DNA分子損傷的一類酶 ?作用特點 能夠把脫氧核苷酸分子連續(xù)的加到 DNA分子引物鏈 的 3’OH末端 ，催化核苷酸的聚合 ?作用條件 ?脫氧核苷酸原料：四種脫氧核苷三磷酸 dNTP（ dATP、 dTTP、 dCTP、 dGTP） ?引物鏈：帶有 3’OH游離基團(tuán) ?模板：單鏈或雙鏈 DNA模板 ? Mg2+： 一、大腸桿菌 DNA聚合酶 Ι （ DNA pol I ） ?酶特性： ? 5’→ 3’聚合酶活性 ? 5’→ 3’核酸外切酶活性 ? 3’ → 5’核酸外切酶活性 3‘ … GCTCAGCTGGAGA… 5’ dNTP Mg2+ DNA pol I 3‘ … GCTCAGCTGGAGA… 5’ 5‘ … CGAGTCGACCOH 5‘ … CGAGTOH 切口平移反應(yīng) （ Nick translation） ?用途： 制備 32P標(biāo)記的 DNA探針 5’→3’ 核酸外切酶活性 5’ → 3’ 核酸聚合酶活性 5‘ … GCTCAGCTGGAGT… 3’ 3‘ … CGAGTCGACCTCA… 5‘ 5‘ … GCTC AGCTGGAGT… 3’ 3‘ … CGAGTCGACCTCA… 5‘ 5‘ … GCTCAGCTGGAGT… 3’ 3‘ … CGAGTCGACCTCA… 5‘ DNase I
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