【文章內(nèi)容簡介】 著與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因(tra)，調(diào)控Ti質(zhì)粒在根癌農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。冠癭堿能激活tra基因，誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移。因此，該區(qū)被稱為接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū)。 (4) Ori區(qū)(origin of replication)。該區(qū)段上的基因調(diào)控了質(zhì)粒的自我復(fù)制，因此，被稱為復(fù)制起始區(qū)。,?,植物基因工程中幾種載體的定義 (1) 中間克隆載體(intermediate cloning vector)。這是指插入了根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒TDNA片段、目的基因、標(biāo)記基因等的大腸桿菌質(zhì)粒載體。它是構(gòu)建中間表達(dá)載體的基礎(chǔ)質(zhì)粒。 (2) 中間表達(dá)載體(intermediate expression vector)。這是指含有可使外源基因在植物細(xì)胞中表達(dá)的特異啟動(dòng)子的中間克隆載體。它是構(gòu)建植物表達(dá)載體的基礎(chǔ)質(zhì)粒。 (3) 卸甲載體(disarmed vector)。卸甲載體多指去除了編碼致瘤作用基因、經(jīng)改造的根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒載體。其是構(gòu)建植物表達(dá)載體的受體質(zhì)粒。 (4) 植物表達(dá)載體(plant expression vector)。這是指最后將目的基因?qū)酥参锛?xì)胞表達(dá)的載體。它由中間表達(dá)載體和卸甲載體構(gòu)建而成。,?,植物表達(dá)載體 (1) 植物表達(dá)載體(中間表達(dá)載體)中常用的啟動(dòng)子。 (2) 一元載體系統(tǒng) ① 共整合載體(cointegrated vector) ② 拼接末端載體(splitend vector，SEV) (3) 雙元載體系統(tǒng) ① 雙元載體系統(tǒng)的構(gòu)建原理 ② 雙元載體的構(gòu)建,?,(四) 動(dòng)物載體 DNA病毒是外源DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的理想載體。其中，常用的載體由野生型猿猴空泡病毒40(SV40)基因組DNA等改建而成。 SV40病毒 ： 猿猴空泡病毒40(simian vacuolating virus 40)，即SV40病毒，是一種小型20面體的顆粒，外殼由VPl、VP2和VP3三種病毒蛋白構(gòu)成，中間包裝著長5.2kb的環(huán)狀基因組DNA。 SV40基因組DNA分為早期和晚期兩大區(qū)域。早期區(qū)在溶原生長中一直表達(dá)，而晚期區(qū)僅在DNA復(fù)制后的一段時(shí)間中表達(dá)，產(chǎn)生病毒外殼結(jié)構(gòu)蛋白。早期區(qū)與晚期區(qū)之間則為復(fù)制起點(diǎn)。,?,四、基因工程中的一些主要分子生物學(xué)方法 (一) 核酸分子探針的標(biāo)記 探針(probe)是指在化學(xué)及生物學(xué)意義上能與特定的靶分子發(fā)生特異性相互作用，并可被特殊的方法所測定的分子。 核酸分子探針是指能與互補(bǔ)核酸序列復(fù)性雜交的特定已知核酸片段。 ． 根據(jù)來源性質(zhì)，一般可將核酸分子探針分為基因組DNA探針、cDNA探針、RNA探針、化學(xué)合成的寡核苷酸探針等。 根據(jù)標(biāo)記的方式，可將核酸分子探針的標(biāo)記法分為體內(nèi)標(biāo)記法和體外標(biāo)記法。 ，,?,第二章 基因工程及其在食品科學(xué)中的應(yīng)用,第一節(jié) 基因工程基礎(chǔ),(三) 植物載體 Ti質(zhì)粒的基本性質(zhì) Ti質(zhì)粒是根癌農(nóng)桿菌染色體外的遺傳物質(zhì)，為共價(jià)閉合環(huán)狀的雙鏈DNA分子。其分子量為1.2X108，長約185kb，相當(dāng)于細(xì)菌染色體的3％一5％。 根據(jù)植物冠癭瘤中所合成的冠癭堿的種類，一般可以將Ti質(zhì)粒分為以下類型：章魚堿型(octopine)、胭脂堿型(nopaline)、農(nóng)桿堿型(agropine)等。,?,Ti質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu) 一般可將Ti質(zhì)粒分為四個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)域：TDNA區(qū)、Vir區(qū)、Con區(qū)和Ori區(qū)。 (1) TDNA區(qū)(transferredDNA region)。TDNA是從Ti質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞內(nèi)的一段DNA，因此，被稱為轉(zhuǎn)移DNA。該DNA片段上的基因與腫瘤的形成有關(guān)。 (2) Vir區(qū)(virulence region)。該區(qū)段上的基因能夠激活TDNA轉(zhuǎn)移，使根癌農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性，因此，被稱為毒性區(qū)。 (3) Con區(qū)(region encoding conjugation)。該區(qū)段上存在著與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因(tra)，調(diào)控Ti質(zhì)粒在根癌農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。冠癭堿能激活tra基因，誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移。因此，該區(qū)被稱為接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū)。 (4) Ori區(qū)(origin of replication)。該區(qū)段上的基因調(diào)控了質(zhì)粒的自我復(fù)制，因此，被稱為復(fù)制起始區(qū)。,?,植物基因工程中幾種載體的定義 (1) 中間克隆載體(intermediate cloning vector)。這是指插入了根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒TDNA片段、目的基因、標(biāo)記基因等的大腸桿菌質(zhì)粒載體。它是構(gòu)建中間表達(dá)載體的基礎(chǔ)質(zhì)粒。 (2) 中間表達(dá)載體(intermediate expression vector)。這是指含有可使外源基因在植物細(xì)胞中表達(dá)的特異啟動(dòng)子的中間克隆載體。它是構(gòu)建植物表達(dá)載體的基礎(chǔ)質(zhì)粒。 (3) 卸甲載體(disarmed vector)。卸甲載體多指去除了編碼致瘤作用基因、經(jīng)改造的根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒載體。其是構(gòu)建植物表達(dá)載體的受體質(zhì)粒。 (4) 植物表達(dá)載體(plant expression vector)。這是指最后將目的基因?qū)酥参锛?xì)胞表達(dá)的載體。它由中間表達(dá)載體和卸甲載體構(gòu)建而成。,?,植物表達(dá)載體 (1) 植物表達(dá)載體(中間表達(dá)載體)中常用的啟動(dòng)子。 (2) 一元載體系統(tǒng) ① 共整合載體(cointegrated vector) ② 拼接末端載體(splitend vector，SEV) (3) 雙元載體系統(tǒng) ① 雙元載體系統(tǒng)的構(gòu)建原理 ② 雙元載體的構(gòu)建,?,(四) 動(dòng)物載體 DNA病毒是外源DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的理想載體。其中，常用的載體由野生型猿猴空泡病毒40(SV40)基因組DNA等改建而成。 SV40病毒 ： 猿猴空泡病毒40(simian vacuolating virus 40)，即SV40病毒，是一種小型20面體的顆粒，外殼由VPl、VP2和VP3三種病毒蛋白構(gòu)成，中間包裝著長5.2kb的環(huán)狀基因組DNA。 SV40基因組DNA分為早期和晚期兩大區(qū)域。早期區(qū)在溶原生長中一直表達(dá)，而晚期區(qū)僅在DNA復(fù)制后的一段時(shí)間中表達(dá)，產(chǎn)生病毒外殼結(jié)構(gòu)蛋白。早期