【文章內(nèi)容簡介】 著與細菌間接合轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因(tra)，調(diào)控Ti質(zhì)粒在根癌農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。冠癭堿能激活tra基因，誘導Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移。因此，該區(qū)被稱為接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū)。 (4) Ori區(qū)(origin of replication)。該區(qū)段上的基因調(diào)控了質(zhì)粒的自我復制，因此，被稱為復制起始區(qū)。,?,植物基因工程中幾種載體的定義 (1) 中間克隆載體(intermediate cloning vector)。這是指插入了根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒TDNA片段、目的基因、標記基因等的大腸桿菌質(zhì)粒載體。它是構(gòu)建中間表達載體的基礎質(zhì)粒。 (2) 中間表達載體(intermediate expression vector)。這是指含有可使外源基因在植物細胞中表達的特異啟動子的中間克隆載體。它是構(gòu)建植物表達載體的基礎質(zhì)粒。 (3) 卸甲載體(disarmed vector)。卸甲載體多指去除了編碼致瘤作用基因、經(jīng)改造的根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒載體。其是構(gòu)建植物表達載體的受體質(zhì)粒。 (4) 植物表達載體(plant expression vector)。這是指最后將目的基因?qū)酥参锛毎磉_的載體。它由中間表達載體和卸甲載體構(gòu)建而成。,?,植物表達載體 (1) 植物表達載體(中間表達載體)中常用的啟動子。 (2) 一元載體系統(tǒng) ① 共整合載體(cointegrated vector) ② 拼接末端載體(splitend vector，SEV) (3) 雙元載體系統(tǒng) ① 雙元載體系統(tǒng)的構(gòu)建原理 ② 雙元載體的構(gòu)建,?,(四) 動物載體 DNA病毒是外源DNA導入哺乳動物細胞的理想載體。其中，常用的載體由野生型猿猴空泡病毒40(SV40)基因組DNA等改建而成。 SV40病毒 ： 猿猴空泡病毒40(simian vacuolating virus 40)，即SV40病毒，是一種小型20面體的顆粒，外殼由VPl、VP2和VP3三種病毒蛋白構(gòu)成，中間包裝著長5.2kb的環(huán)狀基因組DNA。 SV40基因組DNA分為早期和晚期兩大區(qū)域。早期區(qū)在溶原生長中一直表達，而晚期區(qū)僅在DNA復制后的一段時間中表達，產(chǎn)生病毒外殼結(jié)構(gòu)蛋白。早期區(qū)與晚期區(qū)之間則為復制起點。,?,四、基因工程中的一些主要分子生物學方法 (一) 核酸分子探針的標記 探針(probe)是指在化學及生物學意義上能與特定的靶分子發(fā)生特異性相互作用，并可被特殊的方法所測定的分子。 核酸分子探針是指能與互補核酸序列復性雜交的特定已知核酸片段。 ． 根據(jù)來源性質(zhì)，一般可將核酸分子探針分為基因組DNA探針、cDNA探針、RNA探針、化學合成的寡核苷酸探針等。 根據(jù)標記的方式，可將核酸分子探針的標記法分為體內(nèi)標記法和體外標記法。 ，,?,第二章 基因工程及其在食品科學中的應用,第一節(jié) 基因工程基礎,(三) 植物載體 Ti質(zhì)粒的基本性質(zhì) Ti質(zhì)粒是根癌農(nóng)桿菌染色體外的遺傳物質(zhì)，為共價閉合環(huán)狀的雙鏈DNA分子。其分子量為1.2X108，長約185kb，相當于細菌染色體的3％一5％。 根據(jù)植物冠癭瘤中所合成的冠癭堿的種類，一般可以將Ti質(zhì)粒分為以下類型：章魚堿型(octopine)、胭脂堿型(nopaline)、農(nóng)桿堿型(agropine)等。,?,Ti質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu) 一般可將Ti質(zhì)粒分為四個結(jié)構(gòu)區(qū)域：TDNA區(qū)、Vir區(qū)、Con區(qū)和Ori區(qū)。 (1) TDNA區(qū)(transferredDNA region)。TDNA是從Ti質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移到植物細胞內(nèi)的一段DNA，因此，被稱為轉(zhuǎn)移DNA。該DNA片段上的基因與腫瘤的形成有關(guān)。 (2) Vir區(qū)(virulence region)。該區(qū)段上的基因能夠激活TDNA轉(zhuǎn)移，使根癌農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性，因此，被稱為毒性區(qū)。 (3) Con區(qū)(region encoding conjugation)。該區(qū)段上存在著與細菌間接合轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因(tra)，調(diào)控Ti質(zhì)粒在根癌農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。冠癭堿能激活tra基因，誘導Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移。因此，該區(qū)被稱為接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū)。 (4) Ori區(qū)(origin of replication)。該區(qū)段上的基因調(diào)控了質(zhì)粒的自我復制，因此，被稱為復制起始區(qū)。,?,植物基因工程中幾種載體的定義 (1) 中間克隆載體(intermediate cloning vector)。這是指插入了根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒TDNA片段、目的基因、標記基因等的大腸桿菌質(zhì)粒載體。它是構(gòu)建中間表達載體的基礎質(zhì)粒。 (2) 中間表達載體(intermediate expression vector)。這是指含有可使外源基因在植物細胞中表達的特異啟動子的中間克隆載體。它是構(gòu)建植物表達載體的基礎質(zhì)粒。 (3) 卸甲載體(disarmed vector)。卸甲載體多指去除了編碼致瘤作用基因、經(jīng)改造的根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒載體。其是構(gòu)建植物表達載體的受體質(zhì)粒。 (4) 植物表達載體(plant expression vector)。這是指最后將目的基因?qū)酥参锛毎磉_的載體。它由中間表達載體和卸甲載體構(gòu)建而成。,?,植物表達載體 (1) 植物表達載體(中間表達載體)中常用的啟動子。 (2) 一元載體系統(tǒng) ① 共整合載體(cointegrated vector) ② 拼接末端載體(splitend vector，SEV) (3) 雙元載體系統(tǒng) ① 雙元載體系統(tǒng)的構(gòu)建原理 ② 雙元載體的構(gòu)建,?,(四) 動物載體 DNA病毒是外源DNA導入哺乳動物細胞的理想載體。其中，常用的載體由野生型猿猴空泡病毒40(SV40)基因組DNA等改建而成。 SV40病毒 ： 猿猴空泡病毒40(simian vacuolating virus 40)，即SV40病毒，是一種小型20面體的顆粒，外殼由VPl、VP2和VP3三種病毒蛋白構(gòu)成，中間包裝著長5.2kb的環(huán)狀基因組DNA。 SV40基因組DNA分為早期和晚期兩大區(qū)域。早期區(qū)在溶原生長中一直表達，而晚期區(qū)僅在DNA復制后的一段時間中表達，產(chǎn)生病毒外殼結(jié)構(gòu)蛋白。早期