專題一基因工程選修三dna重組技術的基本工具,基因工程的基本操作程序,基因工程的應用,蛋白質(zhì)工程的崛起(編輯修改稿)
2025-02-04 12:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的基因的起始段互補核苷酸序列 一段已知目的基因的核苷酸序列 ： 變性 （ 90℃ 95℃ ）：目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈； 復性 （ 55℃ 65℃ ）：引物與單鏈相應互補序列結合； 延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補的 DNA鏈； 約 2n PCR技術擴增與 DNA復制的比較 PCR技術 DNA復制 相同點 原料 條件 不同點 解旋方式 場所 酶 結果 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復制 主要細胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結構基因的核苷酸序列 目的基因 推測 推測 化學合成 例：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： （三）化學方法人工合成的目的基因 適用：基因比較小，核苷酸序列已知 ： 使目的基因 在受體細胞中穩(wěn)定存在 ，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因 能夠表達和發(fā)揮作用 。 二、基因表達載體的構建 ： 啟動子 +目的基因 +終止子 +標記基因 （一）轉(zhuǎn)化： （二）方法 目的基因進入 _________內(nèi)，并且在 受體細胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程。 受體細胞 穩(wěn)定 表達 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ǎ? （ 1） 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ①農(nóng)桿菌特點： 易感染 雙子葉植物和裸子植物 ，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。 ② 原理：植物體受損傷時，傷口細胞會分泌 酚類化合物 ，吸引農(nóng)桿菌，農(nóng)桿菌的 Ti質(zhì)粒上的TDNA可以轉(zhuǎn)移到受體細胞，并整合到受體細胞染色體的 DNA上 。 ③ 過程： ④ 優(yōu)點： 經(jīng)濟有效 （ 2） 基因槍法 （ 3） 花粉管通道法 缺點：成本較高 受體細胞 (單子葉植物 ) 我國科學家獨創(chuàng)，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 將目的基因?qū)雱游锛毎? ① 方法： 顯微注射法 ② 程序： ③常用的動物受體細胞： 受精卵和卵細胞 將目的基因?qū)胛⑸锛毎? ① 原核生物特點：繁殖快、單細胞、遺傳物質(zhì)少 ② 方法： 用 Ca2+處理細胞 → 感受態(tài)細胞 (吸收環(huán)境中 DNA生理狀態(tài) ) → 表達載體 (緩沖液 )與感受態(tài)細胞混合 → (溫度 )感受態(tài)細胞吸收 DNA分子 （二）方法 將目的基因?qū)? 植物細胞 將目的基因?qū)? 動物細胞 將目的基因?qū)? 微生物細胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細胞法 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 四、目的基因的檢測與鑒定 （一）檢測（分子水平） 檢測轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入了目的基因 ① 提取轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA ② 用含目的基因的 DNA片段用 放射性同位素 等作標記，以此做 探針 ③ 使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ，表明染色體已插入染色體 DNA中 （ 1） 方法 : DNA分子雜交 （ 2）過程 : 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) （ 1）方法 : 分子雜交 方法 : 抗原 抗體雜交 （ 2）過程 : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜
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