基因工程基本操作程序(編輯修改稿)
2025-01-25 17:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 傳 給子代b、同時(shí)使目的基因能 表達(dá)和發(fā)揮作用思考： 作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是 ：（ 1） 生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；（ 2） 通過 cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（ 3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（ 4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（ 5） 有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識(shí)基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了 目的基因、啟動(dòng)子、終止子 三部分結(jié)構(gòu)② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意目的基因與運(yùn)載體結(jié)合所需的條件有 ① 同一種限制酶 ② 具有抗性基因的質(zhì)粒 ③RNA 聚合酶 ④ 目的基因 ⑤DNA 連接酶 ⑥ 四種脫氧核苷酸 ⑦ATP A． ①②③④⑤⑥⑦ B ． ①②④⑤⑥⑦C． ①②③④⑤ D ． ①②④⑤⑦（多選）一個(gè)基因表達(dá)載體的構(gòu)建應(yīng)包括 A．目的基因 B．啟動(dòng)子 C．終止子 D．標(biāo)記基因ABCDD下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是A．啟動(dòng)子是與 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，是起始密碼B．啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的 DNA短片段，對(duì) mRNA的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用C．標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因從而便于篩選D．基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不同而有所差別A? 常用的受體細(xì)胞：常用的受體細(xì)胞：原核生物：大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌原核生物：大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌真核生物：酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞真核生物：酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞v將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化： 目的基因進(jìn)入 _________內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá)方法：① 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞： 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 （雙子葉植物和祼子植物） 基因槍法 （單子葉植物） 花粉管通道法② 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 顯微注射法③ 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞? 感受態(tài)細(xì)胞（ 用 Ca2+處理）；電激或熱激 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法特點(diǎn) :能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對(duì)大多數(shù)單子葉植物無感染能力Ti質(zhì)粒 的 T—DNA 可 轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞并 整合 到其染色體上轉(zhuǎn)化過程:Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入 植物細(xì)胞整合 植物細(xì)胞染色體 DNA表達(dá) 新性狀轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌整合 到染色體上轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞（ 2）基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。常用于單子葉植物的轉(zhuǎn)化方法（ 2）基因槍法 —— 微彈轟擊法特點(diǎn)：成本高適用于適用于 單子葉植單子葉植物物胚珠花藥花絲柱頭花柱子房壁子房雄蕊雌蕊（ 3）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆螅ǚ坌纬傻幕ǚ酃苓€未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加 DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。我國(guó)轉(zhuǎn)我國(guó)轉(zhuǎn)基因抗基因抗蟲棉就蟲棉就是用這是用這種方法種方法獲得獲得 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法:顯微注射技術(shù)操作程序 :提純含目的基因表達(dá)載體 取受精卵 顯微注射移植到子宮早期胚胎新性狀動(dòng)物將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞① 方法：顯微注射法② 程序：目的基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵） 顯微注射 受精卵 新性狀動(dòng)物 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用法 ： Ca2+處理常用菌 ：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快 、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少過程：Ca2+處理大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法顯微注射技術(shù)Ca2+處理小結(jié)植物基因工程動(dòng)物基因工程微生物基因工程常用方法受體細(xì)胞比較目的基因?qū)氩煌?xì)胞的方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法Ca2+處理法體細(xì)胞 受精卵 原核細(xì)胞基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是 A．結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便 B．繁殖速度快 C．遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單 D．性狀穩(wěn)定、變異少基因工程常用的受體細(xì)胞有 ① 大腸桿菌 ② 枯草桿菌 ③ 支原體 ④ 動(dòng)植物細(xì)胞A． ①②③④ B ． ①②③ C． ②③④ D ． ①②④BD基因工程是在 DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 Cv目的基因的表達(dá)和檢測(cè)目的基因的表達(dá)和檢測(cè)抗蟲鑒定 抗病鑒定活性鑒定等抗原－抗體雜交法抗原－抗體雜交法DNARNA分子雜交法分子雜交法DNA分子雜交
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