[理化生]12基因工程基本操作程序(編輯修改稿)
2025-01-30 23:50 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 成目的基因 蛋白質(zhì)氨基酸序列 → mRNA的核苷酸 序列 → 目 的基因序列 → 目的基因 針對(duì)：基因比較小，核苷酸序列又已知 推測(cè) 化學(xué)合成 思考： 不具有，缺少非編碼區(qū) (啟動(dòng)子、終止子）和非編碼序列（如內(nèi)含子），要人工構(gòu)建。 人工合成的目的基因是否具有完整基因結(jié)構(gòu)的基因？ 推測(cè) ： 二 . 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 核心 IMN ： ① 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代 。 ② 同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。 (3)終止子：是使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止 (4)標(biāo)記基因：是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái) (2)啟動(dòng)子：是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位 (1)目的基因 不同受體細(xì)胞，目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法不同，基因表達(dá)載體的構(gòu)建有所差異。 質(zhì)粒 DNA分子 限制酶處理 一個(gè)切口 兩個(gè)黏性末端 兩個(gè)切口 獲得目的基因 DNA連接酶 重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 同一種 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 2022/1/4 22 尋根問(wèn)底： 將生物的所有 DNA直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡(jiǎn)便嗎？如果這么做，結(jié)果會(huì)怎樣？ 有人采用總 DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化：即將一個(gè)生物中的總 DNA提取出來(lái)，通過(guò)注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體細(xì)胞，沒(méi)有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建。 這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣，也無(wú)法確定什么基因?qū)肓耸荏w細(xì)胞。此法目前爭(zhēng)議頗多，嚴(yán)格來(lái)說(shuō)不算基因工程。 資 料 : 科學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)沒(méi)有表達(dá)。 然后在插入抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入抗蟲(chóng)基因 啟動(dòng)子 ，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還是沒(méi)有抗蟲(chóng)能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入抗蟲(chóng)基因 終止子 ，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲(chóng)能力。 資料證明：載體構(gòu)建組成要完整 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ： 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的工程 ： ① 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：雙子葉植物和裸子植物。 （ 1） 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 ③ 基因槍法：?jiǎn)巫尤~植物。 ② 花粉管通道法 （ 3） 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 — 感受態(tài)細(xì)胞法。 （ 2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 —— 顯微注射法。 ①特點(diǎn) : 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法： （ 1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對(duì) 大多數(shù)單子葉植物 沒(méi)有 感染能力 ② 過(guò)程 ： ③ 適用生物： 雙子葉植物 、 祼子植物 。 Hin d限制性酶 ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的 DNA Ti質(zhì)粒 蘇云金桿菌 構(gòu)建表達(dá)載體 Bt毒素蛋白基因 蘇云金桿菌 DNA連接酶 TDNA (可轉(zhuǎn)移 DNA) 知識(shí)拓展 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過(guò)程： 花粉管通道法： 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 ① 操作方法： ② 特點(diǎn)： 在植物花受粉后，花粉形成花粉管還末愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入 DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞 十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì) ③ 例： 轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉 基因槍法： 利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力 ，將包裹在金屬粒表面的表達(dá)載體 DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法 ① 操作方法： ② 金屬粒： 將目的基因?qū)雴巫尤~植物細(xì)胞 鎢粉粒子和金粉粒子，粒子的直徑一般在 ～ 4um 。 ③ 適用：?jiǎn)巫尤~植物 ①細(xì)胞
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