人教版選修三12基因工程的基本操作程序(編輯修改稿)
2025-01-30 17:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列 ,以便根據(jù)這一序列合成引物 。 (3)PCR技術(shù)需要耐高溫的 DNA聚合酶 要點(diǎn)二 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ， 并且可以遺傳給下一代 ， 使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 (1)啟動子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片段，位于基因的首端。它是 RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，可驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。 (2)目的基因：編碼相關(guān)蛋白質(zhì) ， 形成基因工程產(chǎn)品或產(chǎn)生新的生物性狀 。 (3)終止子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA短片段 ,位于基因的尾端 ， 作用是使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止 。 (4)標(biāo)記基因：一般為抗生素抗性基因或熒光基因等，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因 (目的基因是否導(dǎo)入成功 )。 (1)對受體細(xì)胞無害 ， 不影響受體細(xì)胞的正常生理活動； (2)能自我復(fù)制 ， 能通過復(fù)制進(jìn)行基因擴(kuò)增； (3)具有標(biāo)記基因 ， 以便于鑒定目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞； (4)重組 DNA大小應(yīng)適合，以方便操作。 特別提醒 (1)用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的 DNA分子的目的是產(chǎn)生相同的黏性末端 ， 便于兩者完成拼接 。 (2)終止子與終止密碼子的區(qū)別 ① 終止子是 DNA分子上決定轉(zhuǎn)錄停止的一段DNA序列 ， 其組成單位是脫氧核苷酸； ②終止密碼子是指 mRNA分子上決定翻譯停止的三個(gè)相鄰堿基，其組成單位是核糖核苷酸。 (2023南師大附中高二檢測 )如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性核酸內(nèi)切酶 EcoRⅠ 、 BamHⅠ 的酶切位點(diǎn)， ampR為青霉素抗性基因， tetR為四環(huán)素抗性基因 ,P為啟動子， T為終止子， ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別含有包括EcoRⅠ 、 BamHⅠ 在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。 例 2 (1)將含有目的基因的 DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用 EcoR Ⅰ 酶切，酶切產(chǎn)物用 DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè) DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有 ________________、________________、 ________________三種。若要從這些連接物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進(jìn)行______________________ ______________________________________。 (2)用上述 3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中 ， 能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是________。 (3)目的基因表達(dá)時(shí)， RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)是 ________，其合成的產(chǎn)物是________________________________________________________________________。 (4)在上述實(shí)驗(yàn)中 ， 為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接 ,酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是 ________。 【 答案 】 (1)目的基因 — 載體連接物 載體 — 載體連接物 目的基因 — 目的基因連接物 分離純化 (2)載體 — 載體連接物 (3)啟動子 mRNA (4)EcoRⅠ 和 BamHⅠ (只答一種酶不可 ) 【 誤區(qū)警示 】 (1)切割質(zhì)粒和目的基因的限制酶一般是同一種酶 ， 以獲得互補(bǔ)的末端 ，利于重組質(zhì)粒的構(gòu)建 。 (2)目的基因的首端和尾端需加上啟動子和終止子。 要點(diǎn)三 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
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