基因工程的基本操作程序最終(編輯修改稿)
2025-01-25 17:53 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 一項(xiàng)生物 體外復(fù)制 特定 DNA片段的核酸合成 技術(shù) 。通過(guò)此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。 循環(huán) 變性 退火 延伸 ① 概念： PCR全稱(chēng)為 _______________，是一項(xiàng) 在生物 ____復(fù)制 ___________的核酸合成技術(shù) ③ 條件： _______________________ 前提條件 _______________、 ___________ 、 ___________. ② 原理： __________ ④ 方式： 以 _____方式擴(kuò)增，即 ____（ n為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤ 結(jié)果： 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 DNA復(fù)制 一段已知目的基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對(duì)引物 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶） 指數(shù) 2n 使目的基因的片段在 短時(shí)間 內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增 (二 )利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 ⑥ 過(guò)程： a、 DNA變性 （ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， _____斷裂，形成 ___________ b、退火 （ 復(fù)性 55℃ 60℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與 DNA模板結(jié)合，形成局部 ________。 c、延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在 Taq酶的作用下， 合成與模板互補(bǔ)的 ________。 氫鍵 單鏈 DNA 雙鏈 DNA鏈 d、循環(huán) 目的： 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 基因工程的核心 基因表達(dá)載體的組成： 目的基因 +啟動(dòng)子 +終止子 +標(biāo)記基因 +復(fù)制原點(diǎn) 目的基因： 外源 DNA分子的有效片段 啟動(dòng)子： RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA 終止子： 提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào) 標(biāo)記基因： 鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因 復(fù)制原點(diǎn)： DNA復(fù)制的固定起始點(diǎn) 二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 核心 質(zhì)粒 DNA分子 限制酶處理 兩個(gè)切口 獲得目的基因 DNA連接酶 重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 同一種 一個(gè)切口 兩個(gè)黏性末端 復(fù)制原點(diǎn) +啟動(dòng)子 +目的基因 +終止子 +標(biāo)記基因 ① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu) ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種
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