【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 照組動(dòng)物數(shù)：給藥組動(dòng)物數(shù) x劑量組數(shù)的平方根。 試驗(yàn)周期 3個(gè)月之內(nèi)的，嚙齒類宜用 6— 8周齡的大鼠，每組數(shù)量不少于20只；非嚙齒類可用 6— 10月齡的犬，每組數(shù)量 6只；試驗(yàn)周期 3個(gè)月以上的，嚙齒類宜用 6周齡的大鼠，每組數(shù)量應(yīng)增至 3040只。非嚙齒類可用 46月齡的犬，每組數(shù)量 6只。確定每組動(dòng)物數(shù)的原則，主要考慮藥物毒性致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡數(shù)，實(shí)驗(yàn)中處死動(dòng)物的批次和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)及停藥后觀察恢復(fù)狀況所需能用于統(tǒng)計(jì)分析的動(dòng)物數(shù)。 四、飼養(yǎng)條件 (1)通風(fēng)良好：動(dòng)物飼養(yǎng)室的換氣次數(shù)和氣流速度能控制在 10～ 15次／ h和 13—18cm／ s較好，目的是利于動(dòng)物的散熱及排除臭氣、粉塵和微生物，又不明顯影響室內(nèi)的溫、濕度和動(dòng)物的耗能。 (2)光照規(guī)律：因生物節(jié)律對(duì)動(dòng)物的反應(yīng)性有明顯的影響，光照會(huì)影響動(dòng)物的生物節(jié)律從而影響不同批次之間的毒性對(duì)比。大鼠、小鼠應(yīng)為 12h明， 12h暗；倉(cāng)鼠應(yīng)是14h明， l0h暗。 (3)環(huán)境清潔：微生物或寄生蟲感染等，均叫能影響毒性試驗(yàn)的結(jié)果。有條件者應(yīng)盡可能選用清潔級(jí)、 SPF級(jí)試驗(yàn)設(shè)施。 (4)溫、濕度適中且穩(wěn)定：常溫動(dòng)物在 15— 33C下，體溫波動(dòng)在 1. 5C以內(nèi)。濕度是種潛熱，宜控制在 30％ — 70％。溫度、濕度的突然變化，體溫雖然變化不大，但并不意味著動(dòng)物的生理狀況未受影響，同樣可以導(dǎo)致動(dòng)物對(duì)外環(huán)境變化的抵抗力降低，影響毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 (5)室內(nèi)噪聲最好在 50dB以下：雌雄分養(yǎng)，不宜擁擠，必要時(shí) (如摻飼給藥或需精確測(cè)定飲食量時(shí) )單籠飼養(yǎng)，但要注意單養(yǎng)和群養(yǎng)的動(dòng)物劉藥物的反應(yīng)是有差異的。各劑量組和對(duì)照組的飼養(yǎng)條件應(yīng)等同。室內(nèi)飼養(yǎng)另種動(dòng)物，或其他飼養(yǎng)條件的突然改變，均可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)，從而影響毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 (6)食物應(yīng)清潔，無霉變：食物中的脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)成分要符合各種動(dòng)物的生理需求目恒定，因有時(shí)營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)藥物的毒性也有很大的影響。飲水要潔凈，防止病源微生物、重金屬或其他有毒物質(zhì)的污染。 第二節(jié) 受試藥物 一、藥物形式 應(yīng)與臨床試驗(yàn)用制劑完全 — 致 (除可以不含賦形劑外 )。三類以下的中藥新藥復(fù)方制劑，體積較大，以不含賦形劑如中藥浸膏作受試物為宜。固體制劑灌胃給藥，不溶于水的可制成餛懸液?；鞈乙阂鶆颍腆w物先磨成 80目以上的細(xì)粉，再加 1％左右的羧甲基纖維素鈉或 10％左右阿拉伯膠助懸，冰箱放置，臨用前搖勻，短期內(nèi)用完，以免受試物活性下降。 二、給藥途徑和方法 給藥途徑應(yīng)盡量與臨床一致?？诜幬锟晒辔富驌斤暯o藥。灌胃給藥有血藥高峰期：摻飼給藥血藥濃度波動(dòng)較小，維持時(shí)間較長(zhǎng)。靜脈注射或肌內(nèi)注射給藥可以肌內(nèi)注射或皮下注射。腹腔注射時(shí)大部分藥物依然是首先入肝，因此不能完全代替臨床注射給藥途徑。 皮下注射，大鼠每 l00g體重不超過 1ml，小鼠為 0． 1— 0． 3ml／ l0g(體重 )。肌內(nèi)注射，大鼠每腿不超過 0． 5ml，小鼠每腿不超過 0． 3ml。注射給藥應(yīng)嚴(yán)格消毒，并需經(jīng)常變換注射點(diǎn)以減少對(duì)局部的刺激，還應(yīng)考慮藥液的酸堿度和滲透壓。 灌胃容積，大鼠一般每 100g體重 1— 2ml，小鼠為 0． 10. 3ml／ l0g(體重 )。犬等大動(dòng)物常采用口服或摻飼給藥。從營(yíng)養(yǎng)考慮摻飼藥量不宜超過攝食量的 5％。摻飼給藥 (摻入飼料或飲水中給藥 )應(yīng)有保證攝入規(guī)定藥量的措施，還應(yīng)有均勻混合、穩(wěn)定性及質(zhì)量檢杳等措施。對(duì)中藥復(fù)方制劑很難做到這點(diǎn)，必須摻飼，給藥時(shí)，采用現(xiàn)喂現(xiàn)摻的方法較好。 長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)的給藥量應(yīng)根據(jù)動(dòng)物體重的變化不斷調(diào)整，一般每期稱量體重并調(diào)整藥量 1次。各劑量組應(yīng)采用等容量不同濃度給藥。 三、給藥分組 (1)應(yīng)設(shè) 3個(gè)或 9個(gè)以上的劑量組。高劑量組應(yīng)有少數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重毒性反應(yīng)或死亡 (不超過 20％ )，低劑量組應(yīng)相當(dāng)或略高于藥效學(xué)試驗(yàn)的有效劑而不出現(xiàn)毒性反應(yīng)，中劑量組在高低劑量組之可以等比關(guān)系排列。中藥 — 般毒性較低，體積較大。在即使最大限度提高劑量 (技術(shù)上能投給的最高劑量 )仍不能使動(dòng)物中毒死亡的情況下，高劑量組應(yīng)相當(dāng)于臨床用量 50倍以上，雖低不能低于臨床劑量的 30倍 (按千克體重計(jì)算 )，且必須高于藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的高劑量組。 (2)如采用臨床試驗(yàn)用制劑，對(duì)照組應(yīng)給等容量的賦形劑，應(yīng)注意有時(shí)賦形劑或溶劑的種類和用量會(huì)影響藥物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如采用不含賦形劑制劑，對(duì)照組可給等容量的水等溶劑。如賦形劑或溶劑可能產(chǎn)生毒性時(shí)，還需另設(shè)空白對(duì)照組。 四、給藥周期 不應(yīng)少于臨床療程的 1倍。 ≤新藥審批辦法 中藥藥理毒理研究的技術(shù)要求 ≥中規(guī)定：中藥三、四類新藥，處方中各味藥材均符合法定標(biāo)準(zhǔn)，無毒性藥材，無十八反、十九畏等配伍禁忌，又未經(jīng)化學(xué)處理(水、乙醇粗提除外 )，難以測(cè)出 LD50而給藥量大于 20g生藥／ kg(體重 )，臨床用藥期為 1早期以內(nèi)者町免做長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)。 1星期以上者及需反復(fù)應(yīng)用的藥物，可選用大鼠進(jìn)行長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)。對(duì)一、二類新藥以及含有毒藥材、非法定標(biāo)準(zhǔn)藥材或有十八反、十九畏等配伍禁忌的三、四類中藥新藥，長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)應(yīng)用嚙齒類和非嚙齒類兩種動(dòng)物進(jìn)行。給藥周期：嚙齒類一般不超過 6個(gè)月，非嚙齒類不超過9個(gè)月。 第三節(jié) 觀察指標(biāo) 一、檢測(cè)次數(shù) 試驗(yàn)周期在 3個(gè)月以內(nèi)的，末次給藥后 24h，每組活殺部分動(dòng)物 (1／ 2— 2／ 3)，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，余下動(dòng)物停藥繼續(xù)觀察 2— 4星期之后，同樣活殺全面檢測(cè)，以了解可能出現(xiàn)的遲緩性毒忭和毒性反應(yīng)的可逆程度。試驗(yàn)周期在 3個(gè)月以上的，可增加在實(shí)驗(yàn)中期活殺少量動(dòng)物(如高劑量組和對(duì)照組 )檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。 二、檢查項(xiàng)目 (一 )一般檢查 (1)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的癥狀發(fā)生得快慢不 — 。因此，在給藥開始 l星期內(nèi)須嚴(yán)密觀察，以后每日至少觀察一次行為活動(dòng)、外觀體征、糞便性狀等。非嚙齒類動(dòng)物還可以觀察劉刺激的反應(yīng)等更高一層的行為變化。 (2)體重，反映動(dòng)物的生長(zhǎng)和一般健康狀況，也是反映毒性的敏感指標(biāo)，同時(shí)給約量的調(diào)也需根據(jù)體重的變化，因此至少每星期稱量記錄 1次。 (3)攝食量的測(cè)定應(yīng)與體重變化同時(shí)測(cè)定。攝食量 (g)／體重增加 (g)是說明體重變化原因的重要指標(biāo)。 (4)攝水量的測(cè)定有時(shí)是必要的。對(duì)可能影響飲水量、尿量的受試藥物，或摻入飲水紿藥時(shí)，應(yīng)測(cè)定攝水量。 (5)死亡，是中毒最明顯的表現(xiàn)，但須注意與自然死亡或意外死亡的區(qū)別．應(yīng)及時(shí)進(jìn)行剖檢和記錄。對(duì)瀕死動(dòng)物應(yīng)立即處死，剖檢和進(jìn)行血液學(xué)、血液生化及病理組織學(xué)檢查。 (二 )實(shí)驗(yàn)室檢查 1．血液學(xué) 血常規(guī) (纖細(xì)胞和網(wǎng)織纖細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類、血小板計(jì)數(shù) )、出凝血時(shí)間等。反應(yīng)骨髓造血功能，外周各類血細(xì)胞的受損或活動(dòng)情況，凝血機(jī)制的影響程度等。 2．尿液 尿量、尿常規(guī) (尿蛋白、尿糖、尿血紅蛋白等 )檢查，反應(yīng)腎臟功能、心臟和內(nèi)分泌功能。 3 血液生化 血液生化檢測(cè)反應(yīng)動(dòng)物體內(nèi)各系統(tǒng)、各組織器官的功能狀態(tài)或受損情況。若能預(yù)測(cè)毒性作用的靶器官，可以有目的地選擇指標(biāo)，否則原則上應(yīng)盡可能多地進(jìn)行檢測(cè)。嚙齒類受到血液量的限制，非吶齒類雖不受采血量限制，但實(shí)際上不可能無限制地選擇檢測(cè)項(xiàng)目，因此， — 般首先選擇下列指標(biāo)以初步廠解受試藥物對(duì)機(jī)體的毒性概況，為較深入地研究受試藥物的毒性指明方向。 (1)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶：主要反應(yīng)肝臟受損情況，其次為由心臟病變引起的肝臟淤膽或郁血。 (2)總膽紅素：反應(yīng)肝臟解毒功能和膽道排泄?fàn)顩r或溶血等。 (3)堿性磷酸酶 (ALP)：增高反應(yīng)骨骼受到影響或肝臟排泄受阻或甲狀旁腺功能亢進(jìn)。 (4)尿素氮 (BUN)、肌酐 (Crea)：增高反應(yīng)腎臟功能受損或蛋白質(zhì)分解增強(qiáng)或脫水。 (5)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶：主要心臟受損情況。 (6)總蛋白 (TP)：用以求出球蛋白含量。 (7)白蛋白：常見其濃度降低，反應(yīng)肝臟合成功能或胃腸消化吸收受影響后的攝 入不足或腎臟受損丟失過多。其濃度增高見于脫水及血液濃縮。 (8)球蛋白：常見是其濃度增高，反應(yīng)