【正文】 則上應(yīng)盡量廣泛。 (4)病理切片原則亦應(yīng)盡量廣泛。主要考察它們的局部毒性作用和局部用藥后引起的全身毒性作用。 第 — 節(jié) 皮膚黏膜用藥急性毒性試驗(yàn) 皮膚黏膜用藥急性毒性試驗(yàn)?zāi)康氖?，觀察動物皮膚 (完整皮膚和破損皮膚 )或黏膜短時期 (一般為單次，或中藥制劑毒性較低， 24h內(nèi)數(shù)次 )接觸受試物，因吸收作用而使機(jī)體產(chǎn)生毒性反應(yīng)。去毛后 24h檢杳去毛皮膚是否因去毛而受傷，受傷的皮膚不能作完好皮膚的毒性試驗(yàn)。 需設(shè)賦形劑對照組。具體方法可參見本篇“急性毒性試驗(yàn)”。并增加其他給藥途徑的最大給藥量試驗(yàn)。 黏膜用藥，如直腸或陰道或滴鼻或吸入用藥時，可將動物固定；口腔用藥時，可將藥物涂抹在下唇與齦之間 (不能排除動物舔食受試物 )；或提高受試物的黏稠度；或分次數(shù)用藥，目的是要保證受試物與黏膜接觸 4h以上。 3．給藥周期 皮膚黏膜用藥的急性毒性試驗(yàn)時，受試物與皮膚或黏膜接觸不超過 24h。若有死亡動物，應(yīng)及時進(jìn)行尸檢，有肉眼可見的病變應(yīng)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。 二、實(shí)驗(yàn)方法 (一 )皮膚準(zhǔn)備 皮膚長期毒性試驗(yàn)和皮膚急性毒性試驗(yàn)的皮膚準(zhǔn)備相同。具體方法可參見本篇“長期毒性試驗(yàn)”。同時要注意防試驗(yàn)動物舔食受試物。如采用其他方法，應(yīng)說明理由。 三、觀察記錄與檢查 皮膚黏膜用藥的長期毒性試驗(yàn)，觀察項包括血液學(xué)，血液生化和病理學(xué)檢查均同全身給藥的長期毒性試驗(yàn)，只是受試物涂抹的局部皮膚應(yīng)列為檢查劉象。嬰兒用藥應(yīng)用更年輕的動物，如白色家免 1． 5kg左右，白色豚鼠 0． 2kg左右。給藥前 24h，動物背部去毛。 一次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)， 24h后以溫水或無刺激性溶劑洗去殘留受試物和賦形劑，觀察 1h， 24h、 48h、 72h涂抹部位的紅斑和水腫等反應(yīng)。皮膚過敏性試驗(yàn)可以分成兩大類，一類是使用佐劑 (或稱免疫增強(qiáng) )的方法，一類是不用佐劑的方法。 二、陽性對照 對 — 苯二胺， 1— 氯 — 2， 4— 二硝基苯、二鉻化鉀、璜胺新霉素、磺化鎳等。 四、試驗(yàn)方法 給受試物 (致敏或激發(fā) )前 24h，動物頸背部兩側(cè)脫毛， — 側(cè)用于致敏涂敷，另 — 側(cè)用激發(fā)涂敷。6h后，去掉涂敷物，即刻觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，之后于 24h、 48h、 72h再次觀察。 2， Dmize試驗(yàn)法 皮內(nèi)注射受試物致敏， 2星期后皮內(nèi)注射受試物激發(fā)。②在注射部位用注射針呈井字擦傷皮膚，③ 24h，將受試物 (0． 1mI或 0. lg)涂敷破損皮膚上。⑦致敏結(jié)束 2期后，在背部或側(cè)腹脫毛處，敞開式涂敷受試物激發(fā)。③包封式涂敷受試物 (0． 2mi或 0. 2z)致敏，保竹 48h。 4．最佳試驗(yàn)法 (optmnzatmn test) 先用福氏完全佐劑加強(qiáng)，包封式涂敷或皮內(nèi)注射受試物致敏。 一、動物 原則上選樣敏感性高的動物。 三、受試物 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形刑 (如羊毛脂、凡士林、橄欖抽等 )混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。受試物的處理同皮膚過敏性試驗(yàn)。分為單次給藥和多次給藥的黏膜刺激試驗(yàn)。 二、受試物 應(yīng)盡量與臨床用制刑 — 致。如盲腸或陰道或滴鼻或吸入用藥時，可將動物固定；口腔用藥時，可將藥物涂抹在下唇與齒齦之間；或提高受試物的黏稠度；或增加用藥次數(shù)。 單次給藥的黏膜刺激實(shí)驗(yàn)，受試物接觸 4h后，再經(jīng) 1h處死動物，取出相應(yīng)的組織，觀察涂抹部位有無充血和腫脹等反應(yīng)。 第七節(jié) 眼刺激性試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康氖怯^察接觸受試物后動物眼睛產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。需加適量水或其他賦形劑時，也應(yīng)參考臨床使用方法，合理配制。 。紿受試物后，用手將動物眼瞼被動閉合 5～ l0s，記錄給受試物后 6h、 24h、 48h、 72h至 7日的局部反應(yīng)情況。 一、動物 最常用白色家兔 (2kg左右 )，至少 4只。 多次給藥的黏膜刺激實(shí)驗(yàn)，每日 1次，每次接觸 4h，連續(xù) 1星期或以上。 需設(shè)賦形劑對照組。 三、實(shí)驗(yàn)方法 盡量模擬臨床的用藥途徑。雌雄各半。 結(jié)果評價 同皮膚過敏性試驗(yàn)。必要時應(yīng)能陳述所用劑量的理由。每組 10只，或由是否會影響結(jié)果評價決定。 第五節(jié) 皮膚光敏性試驗(yàn) 光敏性反應(yīng)由太剛光線與制劑相作用而產(chǎn)生。⑤貼敷除后 24h、 48h觀察皮膚反應(yīng)。 2 . 最大限度試驗(yàn)法 ①頸背部脫毛區(qū)左右對稱皮內(nèi)注射燕餾水和福氏完全佐劑 (1： 1)乳化劑 (油包水， W／ O)0． 1ml．受試物 0． 1ml，受試物和 FCA乳化劑 0． 1ml。⑤致敏第一日起計算， 1星期后，皮內(nèi)注削部位涂敷 10％月桂醇硫酸鈉的凡士林液。 2星期后涂敷受試物激發(fā)。測試皮膚過敏反應(yīng)的還有其他方法，據(jù)報道認(rèn)為福氏完全佐劑法的敏感忭略高。試驗(yàn)組動物背部 側(cè)脫毛處涂敷受式物，陰性對照組動物背部．脫毛處涂敷賦形劑，陽性對照組動物背部一側(cè)脫毛處涂敷 1％ DNCB(或其他陽性對照藥 )，均持續(xù) 6h動物分籠飼養(yǎng)。 確定劑量應(yīng)考慮受試物的溶解性等性質(zhì)，局部、全身的耐受性等。一般用白色豚鼠， 250— 300g(或 1— 3個月齡 )，雌雄齊半。其他同 1次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)。破損皮膚制造方法、給藥和固定方法等同皮膚毒性試驗(yàn)。粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑時，也應(yīng)參考臨床使用方法，合理配制。分為 1次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)和多次給藥的皮膚刺激試驗(yàn)。 3．給藥周期 皮膚黏膜用藥長期毒性試驗(yàn)時，給藥時間不少于臨床用藥療程的兩倍，具體用藥周期可參照全身用藥的長期毒性試驗(yàn)。目的足要保證受試物與黏膜接觸4h以上。每組家兔 6只或小型豬 4只，如用豚鼠需 10只。 1．劑量設(shè)置 皮膚黏膜用藥的長期毒性試驗(yàn)，一般設(shè)高、低兩個劑量組和一個對照組。 一、動物 常用動物為成年健康的白色家兔 (2kg左右 )、白色豚鼠 (0． 3kg左右 )、白色大鼠 (0． 2kg左右 )或白色小型豬 (7kg左右 )，雌雄各半。給約 24h后，用溫水或無刺激溶劑除去殘留受試物。受試物劑量應(yīng)以同面積不同濃度為宜。 藥物涂抹后應(yīng)以適當(dāng)?shù)姆ü潭?，如用無刺激性紗布、膠布或有孔尼龍繃帶固定；豚鼠或大鼠可用剪去指套的乳膠手套包住整個背部和腹部；如受試物是液體，應(yīng)先覆以聚乙烯薄膜，防止液體揮發(fā)。 (2)如果受試物毒性較小，可只一個劑量組。 (三 )受試藥 原則上盡量與臨床用制劑一致，并保證受試物與皮膚接觸良好。 (二 )黏膜給藥 盡量模擬臨床的用藥途徑。嬰兒用藥用年輕的動物，如白色家兔 (1． 5kg左右 )、白色豚鼠 (o. 2kg左右 )。三、四類外用藥治療局部疾患且方中不含毒性藥材或有毒成分的， — 般可不做長期毒性試驗(yàn)，但需做局部刺激試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)，必要時需做光敏試驗(yàn)。實(shí)際操作中可先對高劑量組動物及尸解發(fā)現(xiàn)異常器官進(jìn)行重點(diǎn)切片檢查，在高劑量組發(fā)現(xiàn)有異常病變時再進(jìn)行詳細(xì)檢查。應(yīng)包括心、肝、脾、肺、腎等重要的實(shí)質(zhì)性器官組織。 (2)進(jìn)行剖檢時，應(yīng)觀察皮膚、口鼻、眼耳等外觀，再剝離皮膚觀察皮下組織，最后剪開腹腔、胸腔及顱腔觀察內(nèi)腔組織器官及注射部位，包括組織器官的正常位置、形狀大小、顏色硬度及剖切面。正確肉眼觀察記錄的同時要保留相應(yīng)的影像、照片等資料。 (9)血糖 (GLU)：增高或降低均上要與內(nèi)分泌系統(tǒng)改變有關(guān)。 (7)白蛋白：常見其濃度降低，反應(yīng)肝臟合成功能或胃腸消化吸收受影響后的攝 入不足或腎臟受損丟失過多。 (3)堿性磷酸酶 (ALP)：增高反應(yīng)骨骼受到影響或肝臟排泄受阻或甲狀旁腺功能亢進(jìn)。若能預(yù)測毒性作用的靶器官，可以有目的地選擇指標(biāo)，否則原則上應(yīng)盡可能多地進(jìn)行檢測。 (二 )實(shí)驗(yàn)室檢查 1．血液學(xué) 血常規(guī) (纖細(xì)胞和網(wǎng)織纖細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白含量、白細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞分類、血小板計數(shù) )、出凝血時間等。 (4)攝水量的測定有時是必要的。非嚙齒類動物還可以觀察劉刺激的反應(yīng)等更高一層的行