【正文】 處方中各味藥材均符合法定標(biāo)準(zhǔn)，無毒性藥材，無十八反、十九畏等配伍禁忌，又未經(jīng)化學(xué)處理(水、乙醇粗提除外 )，難以測出 LD50而給藥量大于 20g生藥／ kg(體重 )，臨床用藥期為 1早期以內(nèi)者町免做長期毒性實(shí)驗(yàn)。非嚙齒類動(dòng)物還可以觀察劉刺激的反應(yīng)等更高一層的行為變化。 (二 )實(shí)驗(yàn)室檢查 1．血液學(xué) 血常規(guī) (纖細(xì)胞和網(wǎng)織纖細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類、血小板計(jì)數(shù) )、出凝血時(shí)間等。 (3)堿性磷酸酶 (ALP)：增高反應(yīng)骨骼受到影響或肝臟排泄受阻或甲狀旁腺功能亢進(jìn)。 (9)血糖 (GLU)：增高或降低均上要與內(nèi)分泌系統(tǒng)改變有關(guān)。 (2)進(jìn)行剖檢時(shí)，應(yīng)觀察皮膚、口鼻、眼耳等外觀，再剝離皮膚觀察皮下組織，最后剪開腹腔、胸腔及顱腔觀察內(nèi)腔組織器官及注射部位，包括組織器官的正常位置、形狀大小、顏色硬度及剖切面。實(shí)際操作中可先對高劑量組動(dòng)物及尸解發(fā)現(xiàn)異常器官進(jìn)行重點(diǎn)切片檢查，在高劑量組發(fā)現(xiàn)有異常病變時(shí)再進(jìn)行詳細(xì)檢查。嬰兒用藥用年輕的動(dòng)物，如白色家兔 (1． 5kg左右 )、白色豚鼠 (o. 2kg左右 )。 (三 )受試藥 原則上盡量與臨床用制劑一致，并保證受試物與皮膚接觸良好。 藥物涂抹后應(yīng)以適當(dāng)?shù)姆ü潭?，如用無刺激性紗布、膠布或有孔尼龍繃帶固定；豚鼠或大鼠可用剪去指套的乳膠手套包住整個(gè)背部和腹部；如受試物是液體，應(yīng)先覆以聚乙烯薄膜，防止液體揮發(fā)。給約 24h后，用溫水或無刺激溶劑除去殘留受試物。 1．劑量設(shè)置 皮膚黏膜用藥的長期毒性試驗(yàn)，一般設(shè)高、低兩個(gè)劑量組和一個(gè)對照組。目的足要保證受試物與黏膜接觸4h以上。分為 1次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)和多次給藥的皮膚刺激試驗(yàn)。破損皮膚制造方法、給藥和固定方法等同皮膚毒性試驗(yàn)。一般用白色豚鼠， 250— 300g(或 1— 3個(gè)月齡 )，雌雄齊半。試驗(yàn)組動(dòng)物背部 側(cè)脫毛處涂敷受式物，陰性對照組動(dòng)物背部．脫毛處涂敷賦形劑，陽性對照組動(dòng)物背部一側(cè)脫毛處涂敷 1％ DNCB(或其他陽性對照藥 )，均持續(xù) 6h動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。 2星期后涂敷受試物激發(fā)。 2 . 最大限度試驗(yàn)法 ①頸背部脫毛區(qū)左右對稱皮內(nèi)注射燕餾水和福氏完全佐劑 (1： 1)乳化劑 (油包水， W／ O)0． 1ml．受試物 0． 1ml，受試物和 FCA乳化劑 0． 1ml。 第五節(jié) 皮膚光敏性試驗(yàn) 光敏性反應(yīng)由太剛光線與制劑相作用而產(chǎn)生。必要時(shí)應(yīng)能陳述所用劑量的理由。雌雄各半。 需設(shè)賦形劑對照組。 一、動(dòng)物 最常用白色家兔 (2kg左右 )，至少 4只。 。 第七節(jié) 眼刺激性試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康氖怯^察接觸受試物后動(dòng)物眼睛產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。如盲腸或陰道或滴鼻或吸入用藥時(shí)，可將動(dòng)物固定；口腔用藥時(shí)，可將藥物涂抹在下唇與齒齦之間；或提高受試物的黏稠度；或增加用藥次數(shù)。分為單次給藥和多次給藥的黏膜刺激試驗(yàn)。 三、受試物 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形刑 (如羊毛脂、凡士林、橄欖抽等 )混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。 4．最佳試驗(yàn)法 (optmnzatmn test) 先用福氏完全佐劑加強(qiáng)，包封式涂敷或皮內(nèi)注射受試物致敏。⑦致敏結(jié)束 2期后，在背部或側(cè)腹脫毛處，敞開式涂敷受試物激發(fā)。 2， Dmize試驗(yàn)法 皮內(nèi)注射受試物致敏， 2星期后皮內(nèi)注射受試物激發(fā)。 四、試驗(yàn)方法 給受試物 (致敏或激發(fā) )前 24h，動(dòng)物頸背部兩側(cè)脫毛， — 側(cè)用于致敏涂敷，另 — 側(cè)用激發(fā)涂敷。皮膚過敏性試驗(yàn)可以分成兩大類，一類是使用佐劑 (或稱免疫增強(qiáng) )的方法，一類是不用佐劑的方法。給藥前 24h，動(dòng)物背部去毛。 三、觀察記錄與檢查 皮膚黏膜用藥的長期毒性試驗(yàn)，觀察項(xiàng)包括血液學(xué)，血液生化和病理學(xué)檢查均同全身給藥的長期毒性試驗(yàn)，只是受試物涂抹的局部皮膚應(yīng)列為檢查劉象。同時(shí)要注意防試驗(yàn)動(dòng)物舔食受試物。 二、實(shí)驗(yàn)方法 (一 )皮膚準(zhǔn)備 皮膚長期毒性試驗(yàn)和皮膚急性毒性試驗(yàn)的皮膚準(zhǔn)備相同。 3．給藥周期 皮膚黏膜用藥的急性毒性試驗(yàn)時(shí)，受試物與皮膚或黏膜接觸不超過 24h。并增加其他給藥途徑的最大給藥量試驗(yàn)。 需設(shè)賦形劑對照組。 第 — 節(jié) 皮膚黏膜用藥急性毒性試驗(yàn) 皮膚黏膜用藥急性毒性試驗(yàn)?zāi)康氖牵^察動(dòng)物皮膚 (完整皮膚和破損皮膚 )或黏膜短時(shí)期 (一般為單次，或中藥制劑毒性較低， 24h內(nèi)數(shù)次 )接觸受試物，因吸收作用而使機(jī)體產(chǎn)生毒性反應(yīng)。 (4)病理切片原則亦應(yīng)盡量廣泛。 (1)處死動(dòng)物時(shí)，要考慮到組織器官免受損傷，也要考慮到動(dòng)物免受痛苦和應(yīng)激反應(yīng)。 (8)球蛋白：常見是其濃度增高，反應(yīng)受到感染或機(jī)體免疫功能亢進(jìn)。 (1)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶：主要反應(yīng)肝臟受損情況，其次為由心臟病變引起的肝臟淤膽或郁血。 (5)死亡，是中毒最明顯的表現(xiàn)，但須注意與自然死亡或意外死亡的區(qū)別．應(yīng)及時(shí)進(jìn)行剖檢和記錄。 二、檢查項(xiàng)目 (一 )一般檢查 (1)長期毒性試驗(yàn)的癥狀發(fā)生得快慢不 — 。 四、給藥周期 不應(yīng)少于臨床療程的 1倍。各劑量組應(yīng)采用等容量不同濃度給藥。肌內(nèi)注射，大鼠每腿不超過 0． 5ml，小鼠每腿不超過 0． 3ml。固體制劑灌胃給藥，不溶于水的可制成餛懸液。溫度、濕度的突然變化，體溫雖然變化不大，但并不意味著動(dòng)物的生理狀況未受影響，同樣可以導(dǎo)致動(dòng)物對外環(huán)境變化的抵抗力降低，影響毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。確定每組動(dòng)物數(shù)的原則，主要考慮藥物毒性致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡數(shù)，實(shí)驗(yàn)中處死動(dòng)物的批次和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)及停藥后觀察恢復(fù)狀況所需能用于統(tǒng)計(jì)分析的動(dòng)物數(shù)。除非有特殊目的，一般不用近親繁殖的動(dòng)物。長期毒性試驗(yàn)贊時(shí)、費(fèi)力，故必須根據(jù)新藥類別、受試物性質(zhì)和用途、療程長短、急性毒性試驗(yàn)和長期毒性預(yù)試驗(yàn)結(jié)果等周密考慮，精心設(shè)計(jì)，以避免難以彌補(bǔ)的缺失。 (5)室內(nèi)噪聲最好在 50dB以下：雌雄分養(yǎng)，不宜擁擠，必要時(shí) (如摻飼給藥或需精確測定飲食量時(shí) )單籠飼養(yǎng)，但要注意單養(yǎng)和群養(yǎng)的動(dòng)物劉藥物的反應(yīng)是有差異的。 四、飼養(yǎng)條件 (1)通風(fēng)良好：動(dòng)物飼養(yǎng)室的換氣次數(shù)和氣流速度能控制在 10～ 15次／ h和 13—18cm／ s較好，目的是利于動(dòng)物的散熱及排除臭氣、粉塵和微生物，又不明顯影響室內(nèi)的溫、濕度和動(dòng)物的耗能。即使如此，還應(yīng)考慮該藥的蓄積作用。總結(jié)報(bào)告中應(yīng)包括摘要、供試品、試驗(yàn)動(dòng)物，試驗(yàn)環(huán)境、給藥方法、觀察方法、毒性反應(yīng)癥狀、體重變化、病理組織學(xué)變化、雄性反應(yīng)和死亡出現(xiàn)的時(shí)間、 LD50和 LD5及其可信限的計(jì)算方法、結(jié)果討論等。其中有的類似LD50的預(yù)試驗(yàn)或霍恩氏法。岡此，采用較簡單的計(jì)算方法完全可以滿足 LD50計(jì)算的準(zhǔn)確性。觀察 7日，記錄死亡動(dòng)物數(shù)。但近代有計(jì)算機(jī)軟件，汁算方法可推薦Bliss法。 四、急毒試驗(yàn)觀察指標(biāo)和致死量的計(jì)算 (一 )觀察指標(biāo) 不能把求得致死劑量看作是急性毒性實(shí)驗(yàn)的唯一要求。 濃度一定適用于某些已經(jīng)固定濃度的制劑，其有利之處是避免了滲透、粘度、溶質(zhì)顆粒的分散狀態(tài)等理化性狀不 — 致對毒性試驗(yàn)結(jié)果的影響，因此，濃度一定也可得到較好的結(jié)果，但由于動(dòng)物的投藥用量是有限的，范圍較窄，按體重給藥容量難以達(dá)到試驗(yàn)要求。一些國家對動(dòng)物數(shù)和組數(shù)不作規(guī)定，因此，有只用 3只一組經(jīng)多組試驗(yàn)測得近似致死量或 LD50者。由于中藥已在臨床長期使用，一般認(rèn)為，如尤特殊情況，使用一種動(dòng)物已基本上達(dá)到急性毒性試驗(yàn)的目的。急性毒性試驗(yàn) 急性毒性試驗(yàn) (單次給藥毒性試驗(yàn) )主要觀察對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一次給藥后所產(chǎn)生的毒性癥狀及其程度，出現(xiàn)和消失的時(shí)間，死亡的發(fā)生率并計(jì)算出其最大給藥量，最小致死量、半數(shù)致死量 (LD50)等。為推測新藥對人的急性毒性，某些發(fā)達(dá)國家動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)要求包含非嚙齒類動(dòng)物 (除家兔外 )在內(nèi)的兩種動(dòng)物，我國對此未作出明確規(guī)定。最小致死量或半數(shù)致死量，小動(dòng)物 (大鼠、小鼠 )試驗(yàn)組在三組以上，每組 — 般至少 10只動(dòng)物 (雌雄各半 )。不同劑量的設(shè)定有兩種方式， — 是濃度一定不同給藥