【正文】 白蛋白：常見其濃度降低，反應(yīng)肝臟合成功能或胃腸消化吸收受影響后的攝 入不足或腎臟受損丟失過多。若能預(yù)測(cè)毒性作用的靶器官，可以有目的地選擇指標(biāo)，否則原則上應(yīng)盡可能多地進(jìn)行檢測(cè)。 (4)攝水量的測(cè)定有時(shí)是必要的。 第三節(jié) 觀察指標(biāo) 一、檢測(cè)次數(shù) 試驗(yàn)周期在 3個(gè)月以內(nèi)的，末次給藥后 24h，每組活殺部分動(dòng)物 (1／ 2— 2／ 3)，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，余下動(dòng)物停藥繼續(xù)觀察 2— 4星期之后，同樣活殺全面檢測(cè)，以了解可能出現(xiàn)的遲緩性毒忭和毒性反應(yīng)的可逆程度。如采用不含賦形劑制劑，對(duì)照組可給等容量的水等溶劑。對(duì)中藥復(fù)方制劑很難做到這點(diǎn)，必須摻飼，給藥時(shí)，采用現(xiàn)喂現(xiàn)摻的方法較好。腹腔注射時(shí)大部分藥物依然是首先入肝，因此不能完全代替臨床注射給藥途徑。 第二節(jié) 受試藥物 一、藥物形式 應(yīng)與臨床試驗(yàn)用制劑完全 — 致 (除可以不含賦形劑外 )。 (4)溫、濕度適中且穩(wěn)定：常溫動(dòng)物在 15— 33C下，體溫波動(dòng)在 1. 5C以內(nèi)。 試驗(yàn)周期 3個(gè)月之內(nèi)的，嚙齒類宜用 6— 8周齡的大鼠，每組數(shù)量不少于20只；非嚙齒類可用 6— 10月齡的犬，每組數(shù)量 6只；試驗(yàn)周期 3個(gè)月以上的，嚙齒類宜用 6周齡的大鼠，每組數(shù)量應(yīng)增至 3040只。 二、動(dòng)物品系 實(shí)驗(yàn)應(yīng)選用封閉群動(dòng)物，如嚙齒類的 Wistar或 Sprague Dewley品系大鼠，非嚙齒類的 Beagle犬。 長期毒性實(shí)驗(yàn)的主要目的有： — 是觀察藥物在選定時(shí)間內(nèi)反復(fù)給予動(dòng)物的情況下，動(dòng)物出現(xiàn)損害的靶組織或器官及劑量 — 效應(yīng)關(guān)系和可逆性等；二是了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)藥物能耐受的劑量范圍和對(duì)人來說可能無毒的安全劑量。濕度是種潛熱，宜控制在 30％ — 70％。非嚙齒類可用 46月齡的犬，每組數(shù)量 6只。 (3)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果對(duì)推測(cè)長期毒性試驗(yàn)劑量具重要意義，、不同種動(dòng)物之間的差異，急性毒性結(jié)果無論用體重劑量還是體表面積劑量計(jì)算常見有差異而尚無規(guī)律。另外，國外還有采用固定劑量給藥觀察近似致死劑量，以決定藥物毒性大小者。如用 10只動(dòng)物未見毒性反應(yīng)或死亡則該劑量不可能大于 LD26。 LD50和最小致死量及其可信限的汁算可采用 Bliss法，改進(jìn)寇氏法、點(diǎn)斜法、簡(jiǎn)化概率單位法或其他的計(jì)算方法。更確田地說是找到 — 個(gè) 0死亡的最大劑量和 100％死亡的最小劑量的估值以決定實(shí)驗(yàn)中采用的最大劑量 (Dm)和最小劑量 (Dn)，這在測(cè)定中非常重要，是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。 (二 }致死劑量計(jì)算 可用 Bliss點(diǎn)斜法、簡(jiǎn)化機(jī)率法、改進(jìn)寇氏序貫法等計(jì)算最小致死量或半數(shù)致死量。小鼠口服最大容量不超過 0． 8ml／ 20g(體重 )，其他途徑不超過0． 5ml／ 20g(體重 )。 (二 )樣品液的濃度及給藥容量 為了求得最低致死且或半數(shù)致死量，需要設(shè)不同劑量組，使部分組反應(yīng)率在 50％以上，部分組反應(yīng)率在 50％以下。 (三 )動(dòng)物數(shù)量 視不同試驗(yàn)而異。 第一節(jié) 急性毒性試驗(yàn)方法的有關(guān)問題 一、動(dòng)物 (一 )動(dòng)物種 動(dòng)物種 (或系 )的差異是動(dòng)物急性毒性差異的主要原因，藥酶則是毒性種差的重要原因之一。由于中藥毒性常較小，單次給藥往往不能表現(xiàn)明顯的毒性作用，我國藥政部門把一日內(nèi)多次給藥觀察受試藥物毒性的實(shí)驗(yàn)也稱作急性毒性實(shí)驗(yàn)。目前雖常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是小鼠或大鼠。大動(dòng)物 (犬、猴 )并不 — 定要求得到 LD50，可用少量動(dòng)物采用劑量遞增的方法觀察中毒癥狀，求近似致死量即可。因此，通常采用同容量不同濃度的給藥方法，注射給藥藥液濃度應(yīng)勺體液濃度等滲 (至少不應(yīng)低滲 )，口服液不必作特殊考慮，對(duì)毒性低的中藥制劑而言，應(yīng)以能保持一定流動(dòng)性的最大濃度作為口服樣品液。發(fā)現(xiàn)毒性癥狀及毒性反應(yīng)的靶器官同樣是急毒實(shí)驗(yàn)非常重要的目的。各種方法原則基本相同，如：①劑量劉數(shù)值應(yīng)為等差，即劑量應(yīng)按等比級(jí)數(shù)排列；②各組動(dòng)物數(shù)應(yīng)相等；③死亡率應(yīng)在 50％上下基本對(duì)稱分布等。然后在死亡數(shù) 4／ 4和 0／ 4兩組之間按 1； 2(如 50mg/kg、 100mg/kg、 200mg／kg、 400mg／ kg)以下的劑量比進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，以此測(cè)得近似的 0和 100％死亡率。 二、最大給藥量試驗(yàn) 如同受試藥物的濃度或體積限制，無法測(cè)出半數(shù)致死量 (LD50)時(shí)，作最大給藥量試驗(yàn)。每組用 3— 4只動(dòng)物，設(shè)多組，詳細(xì)觀察并汜錄動(dòng)物毒性反應(yīng)井進(jìn)行血液學(xué)，血液生化以及病理組織學(xué)觀察。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果對(duì)急性毒性進(jìn)行全面評(píng)價(jià)。不同種動(dòng)物間雖然也可以進(jìn)行劑量推測(cè)但僅可作為參考．仍需要長期毒性試驗(yàn)前進(jìn)行必要的預(yù)試驗(yàn)。 (2)光照規(guī)律：因生物節(jié)律對(duì)動(dòng)物的反應(yīng)性有明顯的影響，光照會(huì)影響動(dòng)物的生物節(jié)律從而影響不同批次之間的毒性對(duì)比。各劑量組和對(duì)照組的飼養(yǎng)條件應(yīng)等同。長期毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)一般需要重點(diǎn)考慮以下幾個(gè)方面。也有認(rèn)為雜交第一代鼠兼有對(duì)藥物反應(yīng)波動(dòng)少和接近人群基因組成情況的優(yōu)點(diǎn)而提倡選用的，尚未被普遍接受。 四、飼養(yǎng)條件 (1)通風(fēng)良好：動(dòng)物飼養(yǎng)室的換氣次數(shù)和氣流速度能控制在 10～ 15次／ h和 13—18cm／ s較好，目的是利于動(dòng)物的散熱及排除臭氣、粉塵和微生物，又不明顯影響室內(nèi)的溫、濕度和動(dòng)物的耗能。 (5)室內(nèi)噪聲最好在 50dB以下：雌雄分養(yǎng)，不宜擁擠，必要時(shí) (如摻飼給藥或需精確測(cè)定飲食量時(shí) )單籠飼養(yǎng)，但要注意單養(yǎng)和群養(yǎng)的動(dòng)物劉藥物的反應(yīng)是有差異的?；鞈乙阂鶆颍腆w物先磨成 80目以上的細(xì)粉，再加 1％左右的羧甲基纖維素鈉或 10％左右阿拉伯膠助懸，冰箱放置，臨用前搖勻，短期內(nèi)用完，以免受試物活性下降。注射給藥應(yīng)嚴(yán)格消毒，并需經(jīng)常變換注射點(diǎn)以減少對(duì)局部的刺激，還應(yīng)考慮藥液的酸堿度和滲透壓。 三、給藥分組 (1)應(yīng)設(shè) 3個(gè)或 9個(gè)以上的劑量組。 ≤新藥審批辦法 因此，在給藥開始 l星期內(nèi)須嚴(yán)密觀察，以后每日至少觀察一次行為活動(dòng)、外觀體征、糞便性狀等。對(duì)瀕死動(dòng)物應(yīng)立即處死，剖檢和進(jìn)行血液學(xué)、血液生化及病理組織學(xué)檢查。 (2)總膽紅素：反應(yīng)肝臟解毒功能和膽道排泄?fàn)顩r或溶血等。其濃度降 低較少見，原因可能是丟失增多或體液免疫受損。常用的麻醉后頸動(dòng)脈或腹主動(dòng)脈放血的方法比較合理。在同一張片上盡量含有同一器官組織的不同層面。 一、動(dòng)物 常用動(dòng)物為成年健康的白色家兔、白色豚鼠、白色大鼠或白色小型豬，雌雄各半。如賦形劑有毒性，應(yīng)再設(shè)空白對(duì)照組。 2．給藥方法 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑 (如羊毛脂、凡上林、橄欖油等 )混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。根據(jù)中藥特點(diǎn)，可適當(dāng)提高濃度或增加 24h內(nèi)用藥次數(shù)。 (二 )受試藥物 原則上盡量與臨床用制劑 — 致，并保證受試物與皮膚接觸良好。 黏膜用藥，如直腸或陰道或滴鼻或吸入用藥時(shí)，可將動(dòng)物固定后進(jìn)行；口腔用藥，可將藥物涂抹在下唇與齒齦之間 (不能排除動(dòng)物舔食受試物 )；或提高受試物的黏稠度；或增加用藥次數(shù)。 第三節(jié) 皮膚刺激試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康淖阌^察動(dòng)物皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。分完整皮膚給藥區(qū)、破損皮膚給藥區(qū)、完整皮膚對(duì)照區(qū)、破損皮膚對(duì)照區(qū) 4個(gè)區(qū)，每區(qū)均為體表面積的 3％ — 5％，各區(qū)之間留有適當(dāng)距離。 一、動(dòng)物 原則上選擇敏感性高的動(dòng)物。脈鼠去毛范圍約 3cm~3cm(或 2cmx4cm)。 3．敞開式敷皮試驗(yàn)法 (open eplcutmeo test) 按臨床擬用方法，反復(fù)涂敷受試物致敏。⑧根據(jù) 24h， 48h的皮膚反應(yīng)，坪價(jià)受試物的過敏性反應(yīng)。 5 破損皮膚佐劑試驗(yàn)法 (split od juvant) 用冰接觸損傷皮膚，使用 FCA，包封式涂敷受試物致敏。 確定劑量應(yīng)考慮受試物的溶解性等理化性質(zhì)，局部、全身的耐受性等。 一、動(dòng)物 首選成年健康的白色家兔 (2kg左右 )，其次是大鼠 (0． 25kg左右 )。如為液體制劑，或去除賦形劑可做成液體制劑的，也可以眼結(jié)膜刺激性試驗(yàn)代替。分為單次給藥和多次給藥的眼刺