【正文】 分為單次給藥和多次給藥的眼刺激試驗(yàn)。 一、動(dòng)物 首選成年健康的白色家兔 (2kg左右 )，其次是大鼠 (0． 25kg左右 )。 5 破損皮膚佐劑試驗(yàn)法 (split od juvant) 用冰接觸損傷皮膚，使用 FCA，包封式涂敷受試物致敏。 3．敞開式敷皮試驗(yàn)法 (open eplcutmeo test) 按臨床擬用方法，反復(fù)涂敷受試物致敏。 一、動(dòng)物 原則上選擇敏感性高的動(dòng)物。 第三節(jié) 皮膚刺激試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康淖阌^察動(dòng)物皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。 (二 )受試藥物 原則上盡量與臨床用制劑 — 致，并保證受試物與皮膚接觸良好。 2．給藥方法 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑 (如羊毛脂、凡上林、橄欖油等 )混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。 一、動(dòng)物 常用動(dòng)物為成年健康的白色家兔、白色豚鼠、白色大鼠或白色小型豬，雌雄各半。常用的麻醉后頸動(dòng)脈或腹主動(dòng)脈放血的方法比較合理。 (2)總膽紅素：反應(yīng)肝臟解毒功能和膽道排泄?fàn)顩r或溶血等。因此，在給藥開始 l星期內(nèi)須嚴(yán)密觀察，以后每日至少觀察一次行為活動(dòng)、外觀體征、糞便性狀等。 三、給藥分組 (1)應(yīng)設(shè) 3個(gè)或 9個(gè)以上的劑量組?；鞈乙阂鶆?，固體物先磨成 80目以上的細(xì)粉，再加 1％左右的羧甲基纖維素鈉或 10％左右阿拉伯膠助懸，冰箱放置，臨用前搖勻，短期內(nèi)用完，以免受試物活性下降。 四、飼養(yǎng)條件 (1)通風(fēng)良好：動(dòng)物飼養(yǎng)室的換氣次數(shù)和氣流速度能控制在 10～ 15次／ h和 13—18cm／ s較好，目的是利于動(dòng)物的散熱及排除臭氣、粉塵和微生物，又不明顯影響室內(nèi)的溫、濕度和動(dòng)物的耗能。長期毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)一般需要重點(diǎn)考慮以下幾個(gè)方面。 (2)光照規(guī)律：因生物節(jié)律對動(dòng)物的反應(yīng)性有明顯的影響，光照會(huì)影響動(dòng)物的生物節(jié)律從而影響不同批次之間的毒性對比。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果對急性毒性進(jìn)行全面評價(jià)。 二、最大給藥量試驗(yàn) 如同受試藥物的濃度或體積限制，無法測出半數(shù)致死量 (LD50)時(shí)，作最大給藥量試驗(yàn)。各種方法原則基本相同，如：①劑量劉數(shù)值應(yīng)為等差，即劑量應(yīng)按等比級(jí)數(shù)排列；②各組動(dòng)物數(shù)應(yīng)相等；③死亡率應(yīng)在 50％上下基本對稱分布等。因此，通常采用同容量不同濃度的給藥方法，注射給藥藥液濃度應(yīng)勺體液濃度等滲 (至少不應(yīng)低滲 )，口服液不必作特殊考慮，對毒性低的中藥制劑而言，應(yīng)以能保持一定流動(dòng)性的最大濃度作為口服樣品液。目前雖常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是小鼠或大鼠。 第一節(jié) 急性毒性試驗(yàn)方法的有關(guān)問題 一、動(dòng)物 (一 )動(dòng)物種 動(dòng)物種 (或系 )的差異是動(dòng)物急性毒性差異的主要原因，藥酶則是毒性種差的重要原因之一。 (二 )樣品液的濃度及給藥容量 為了求得最低致死且或半數(shù)致死量，需要設(shè)不同劑量組，使部分組反應(yīng)率在 50％以上，部分組反應(yīng)率在 50％以下。 (二 }致死劑量計(jì)算 可用 Bliss點(diǎn)斜法、簡化機(jī)率法、改進(jìn)寇氏序貫法等計(jì)算最小致死量或半數(shù)致死量。 LD50和最小致死量及其可信限的汁算可采用 Bliss法，改進(jìn)寇氏法、點(diǎn)斜法、簡化概率單位法或其他的計(jì)算方法。另外，國外還有采用固定劑量給藥觀察近似致死劑量，以決定藥物毒性大小者。非嚙齒類可用 46月齡的犬，每組數(shù)量 6只。 長期毒性實(shí)驗(yàn)的主要目的有： — 是觀察藥物在選定時(shí)間內(nèi)反復(fù)給予動(dòng)物的情況下，動(dòng)物出現(xiàn)損害的靶組織或器官及劑量 — 效應(yīng)關(guān)系和可逆性等；二是了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對藥物能耐受的劑量范圍和對人來說可能無毒的安全劑量。 試驗(yàn)周期 3個(gè)月之內(nèi)的，嚙齒類宜用 6— 8周齡的大鼠，每組數(shù)量不少于20只；非嚙齒類可用 6— 10月齡的犬，每組數(shù)量 6只；試驗(yàn)周期 3個(gè)月以上的，嚙齒類宜用 6周齡的大鼠，每組數(shù)量應(yīng)增至 3040只。 第二節(jié) 受試藥物 一、藥物形式 應(yīng)與臨床試驗(yàn)用制劑完全 — 致 (除可以不含賦形劑外 )。對中藥復(fù)方制劑很難做到這點(diǎn)，必須摻飼，給藥時(shí)，采用現(xiàn)喂現(xiàn)摻的方法較好。 第三節(jié) 觀察指標(biāo) 一、檢測次數(shù) 試驗(yàn)周期在 3個(gè)月以內(nèi)的，末次給藥后 24h，每組活殺部分動(dòng)物 (1／ 2— 2／ 3)，檢測各項(xiàng)指標(biāo)，余下動(dòng)物停藥繼續(xù)觀察 2— 4星期之后，同樣活殺全面檢測，以了解可能出現(xiàn)的遲緩性毒忭和毒性反應(yīng)的可逆程度。若能預(yù)測毒性作用的靶器官，可以有目的地選擇指標(biāo)，否則原則上應(yīng)盡可能多地進(jìn)行檢測。正確肉眼觀察記錄的同時(shí)要保留相應(yīng)的影像、照片等資料。三、四類外用藥治療局部疾患且方中不含毒性藥材或有毒成分的， — 般可不做長期毒性試驗(yàn)，但需做局部刺激試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)，必要時(shí)需做光敏試驗(yàn)。 (2)如果受試物毒性較小，可只一個(gè)劑量組。 一、動(dòng)物 常用動(dòng)物為成年健康的白色家兔 (2kg左右 )、白色豚鼠 (0． 3kg左右 )、白色大鼠 (0． 2kg左右 )或白色小型豬 (7kg左右 )，雌雄各半。 3．給藥周期 皮膚黏膜用藥長期毒性試驗(yàn)時(shí)，給藥時(shí)間不少于臨床用藥療程的兩倍，具體用藥周期可參照全身用藥的長期毒性試驗(yàn)。其他同 1次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)。測試皮膚過敏反應(yīng)的還有其他方法，據(jù)報(bào)道認(rèn)為福氏完全佐劑法的敏感忭略高。⑤貼敷除后 24h、 48h觀察皮膚反應(yīng)。 結(jié)果評價(jià) 同皮膚過敏性試驗(yàn)。 多次給藥的黏膜刺激實(shí)驗(yàn)，每日 1次，每次接觸 4h，連續(xù) 1星期或以上。需加適量水或其他賦形劑時(shí)，也應(yīng)參考臨床使用方法，合理配制。 二、受試物 應(yīng)盡量與臨床用制刑 — 致。 一、動(dòng)物 原則上選樣敏感性高的動(dòng)物。②在注射部位用注射針呈井字擦傷皮膚，③ 24h，將受試物 (0． 1mI或 0. lg)涂敷破損皮膚上。 二、陽性對照 對 — 苯二胺， 1— 氯 — 2， 4— 二硝基苯、二鉻化鉀、璜胺新霉素、磺化鎳等。嬰兒用藥應(yīng)用更年輕的動(dòng)物，如白色家免 1． 5kg左右，白色豚鼠 0． 2kg左右。具體方法可參見本篇“長期毒性試驗(yàn)”。 黏膜用藥，如直腸或陰道或滴鼻或吸入用藥時(shí)，可將動(dòng)物固定；口腔用藥時(shí)，可將藥物涂抹在下唇與齦之間 (不能排除動(dòng)物舔食受試物 )；或提高受試物的黏稠度；或分次數(shù)用藥，目的是要保證受試物與黏膜接觸 4h以上。去毛后 24h檢杳去毛皮膚是否因去毛而受傷，受傷的皮膚不能作完好皮膚的毒性試驗(yàn)。 (3)取材原則上應(yīng)盡量廣泛。 (5)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶：主要心臟受損情況。 (3)攝食量的測定應(yīng)與體重變化同時(shí)測定。在即使最大限度提高劑量 (技術(shù)上能投給的最高劑量 )仍不能使動(dòng)物中毒死亡的情況下，高劑量組應(yīng)相當(dāng)于臨床用量 50倍以上，雖低不能低于臨床劑量的 30倍 (按千克體重計(jì)算 )，且必須高于藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的高劑量組。灌胃給藥有血藥高峰期：摻飼給藥血藥濃度波動(dòng)較小，維持時(shí)間較長。 (3)環(huán)境清潔：微生物或寄生蟲感染等，均叫能影響毒性試驗(yàn)的結(jié)果。 (3)對一、二類新藥以及含有毒藥材、非法定標(biāo)準(zhǔn)藥材，或有十八反、十九畏等配伍禁忌的三、四類中藥新藥，我國及各國藥政部門普遍規(guī)定，長期毒性實(shí)驗(yàn)應(yīng)用嚙齒類和非嚙齒類二種動(dòng)物進(jìn)行。有條件者應(yīng)盡可能選用清潔級(jí)、 SPF級(jí)試驗(yàn)設(shè)施。 (2)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果對臨床研究有指導(dǎo)意義，可以為臨床研究時(shí)探索安全有效劑量避免出現(xiàn)急性不良反應(yīng)提供依據(jù)。如仍未見毒性反應(yīng)或體重正常增加，則可認(rèn)為該藥物小鼠最大給藥量未見毒性反應(yīng)，或 LD50大于最大給藥量。 第二節(jié) 急性毒性試驗(yàn)方法 一、 LD50的測定 最小致死量是使動(dòng)物剛好致死的藥物劑量，但由于藥物的性質(zhì)，給藥方法和個(gè)體差異，每只動(dòng)物的最小致死量確很大的差異，實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)訓(xùn)學(xué)原理表明一群動(dòng)物最小致死量的平均值相當(dāng)于半數(shù)致死量。腹腔汁射在人體極少用，中藥粗制劑成分復(fù)雜，動(dòng)物毒性試驗(yàn)中也盡可能少用，以避免腹腔刺激性的干擾。未成年的動(dòng)物藥酶活性一般較低，對于經(jīng)