【正文】 容量，另 — 種是容量一定不同給藥濃度，兩者各有所長。大鼠口服最大容量不超過 2ml／ l00g(體重 )，其他途徑不超過 lml／ l00g(體重 )。Bliss法嚴(yán)謹(jǐn)精確，缺點(diǎn)是計(jì)算非常繁復(fù)?？捎么苹蛐坌詣游?，設(shè)四組以上，每組 34只，先用 1； 10的劑量比給藥 (如 5mg／ kg、50mg／ kg、 500mg／ kg、 5000mg／ kg固定劑量 )。汁算結(jié)果對比表明，不同的汁算方法，結(jié)果間一般無明顯差異，而不同實(shí)驗(yàn)室對同一樣品試驗(yàn)結(jié)果卻常見有顯著差異。 三、近似致死量試驗(yàn) 國外近年來有采用少量動物進(jìn)行近似致死量測定的方法。 四、急毒試驗(yàn)結(jié)果評價 (一 )可靠性評價 為保證急毒結(jié)果，實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)符合 GLP的要求，供試品質(zhì)量穩(wěn)定，動物合格，實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)原始記錄，標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，總結(jié)報告應(yīng)符合要求。如果急性毒性試驗(yàn)與長期毒性試驗(yàn)采用同種動物，則急性毒性試驗(yàn)的劑量對長毒有更大的參考價伉。確定每組動物數(shù)的原則，主要考慮藥物毒性致實(shí)驗(yàn)動物死亡數(shù)，實(shí)驗(yàn)中處死動物的批次和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時及停藥后觀察恢復(fù)狀況所需能用于統(tǒng)計(jì)分析的動物數(shù)。溫度、濕度的突然變化，體溫雖然變化不大，但并不意味著動物的生理狀況未受影響，同樣可以導(dǎo)致動物對外環(huán)境變化的抵抗力降低，影響毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 組成長期毒性實(shí)驗(yàn)的三個主要部分是實(shí)驗(yàn)動物、受試藥物和觀察指標(biāo)。既易得、易養(yǎng)、易于操作，又接近實(shí)際用藥人群的基因組成情況。非嚙齒類可用 46月齡的犬，每組數(shù)量 6只。濕度是種潛熱，宜控制在 30％ — 70％。三類以下的中藥新藥復(fù)方制劑，體積較大，以不含賦形劑如中藥浸膏作受試物為宜。 皮下注射，大鼠每 l00g體重不超過 1ml，小鼠為 0． 1— 0． 3ml／ l0g(體重 )。 長期毒性實(shí)驗(yàn)的給藥量應(yīng)根據(jù)動物體重的變化不斷調(diào)整，一般每期稱量體重并調(diào)整藥量 1次。如賦形劑或溶劑可能產(chǎn)生毒性時，還需另設(shè)空白對照組。試驗(yàn)周期在 3個月以上的，可增加在實(shí)驗(yàn)中期活殺少量動物(如高劑量組和對照組 )檢測各項(xiàng)指標(biāo)。對可能影響飲水量、尿量的受試藥物，或摻入飲水紿藥時，應(yīng)測定攝水量。嚙齒類受到血液量的限制，非吶齒類雖不受采血量限制，但實(shí)際上不可能無限制地選擇檢測項(xiàng)目，因此， — 般首先選擇下列指標(biāo)以初步廠解受試藥物對機(jī)體的毒性概況，為較深入地研究受試藥物的毒性指明方向。其濃度增高見于脫水及血液濃縮。常用方法和注意事項(xiàng)如下。剖取的實(shí)質(zhì)性臟器應(yīng)稱重。有關(guān)皮膚黏膜用藥的毒性試驗(yàn)分述如下。保證受試物與黏膜接觸 4h以上。每組家兔或豬 4只，如用豚鼠需 10只。如采用其他方法，應(yīng)說明理由。嬰兒用藥應(yīng)用更年輕的動物，如白色家兔 (1． 1kg左右 )、白色豚鼠 (0． 2kg左右 )。 2 給藥方法 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚上；固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑 (如羊毛脂、凡士林、橄欖油等 )混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好， 藥物涂抹后應(yīng)以適當(dāng)?shù)牧Ψü潭ǎ缬脽o刺激性紗布、膠布或有孔尼龍繃帶固定；豚鼠或大鼠可用剪去指套的乳膠手套包住整個背部和腹部；如受試物是液體，應(yīng)先覆以聚乙烯薄膜，防液體揮發(fā)。每周給七次，每日 1次，每次 6h黏膜用藥至少 4h)。 三、試驗(yàn)方法 至少用 3只家兔或 5只豚鼠。 第四節(jié) 皮膚過敏性試驗(yàn) 皮膚過敏性試驗(yàn)的目的足觀察在重復(fù)接觸受試物后，受試物作為致敏原引起的變態(tài)反應(yīng)在皮膚上的表現(xiàn)。必要時應(yīng)能陳述所用劑量的理由。簡述如下： (一 )不用佐劑的方法 l， Buehler試驗(yàn)法 包敷封閉式涂敷受試物致敏， 2星期后包敷封閉式涂敷受試物激發(fā)。⑥在同一部位包封式涂敷受試物 (0． 2ml或 0， 1g)致敏，保持 48h。 3．福氏完全佐劑法 (FCA) 受試物溶解在蒸餾水與福氏完全佐劑的等量混合液中，再皮下注射。 二、陽性對照 6— 甲基香豆素、 3， 3’， 4’， 5— 四氯水楊酸苯胺等。 第六節(jié) 黏膜刺激性試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康氖怯^察接觸受試物后產(chǎn)生的動物黏膜刺激反應(yīng)情況。保證受試物與黏膜接觸 4h以上。末次給受試物后 lh處死動物，觀察內(nèi)容同單次給藥。 凡臨床用藥超過 1星期的受試物，要進(jìn)行多次給藥的刺激性試驗(yàn)，與單次給藥方法相同，連續(xù)給藥 1星期或以上。 二、受試物 應(yīng)盡量與臨床用制劑一致。如賦形劑有刺激性，應(yīng)再設(shè)空白對照組。嬰兒用藥應(yīng)用更年輕的動物，如白色家兔 1． 5kg左右，白色豚鼠 0． 2kg左右。 四、注意事項(xiàng)及結(jié)果評價 1．注意事項(xiàng) 實(shí)驗(yàn)動物的選擇同皮膚過敏性試驗(yàn)。凡含有類似已知光敏性物質(zhì)或根據(jù)其他試驗(yàn)推測可能有光敏性的黏膜外用藥，均應(yīng)做光敏性試驗(yàn)。② 1星期后，皮內(nèi)注射部位涂敷含 10％月桂醇硫酸鈉的凡士林液。 (二 )使用佐劑的方法 1 佐刑貼敷試驗(yàn)法 ①頸背部脫毛區(qū)四角各皮內(nèi)注射蒸餾水和福氏完全佐劑 (1； 1)乳化劑 (油包水， W／ O)0． 1ml。 14日后，在動物背部另一側(cè)，試驗(yàn)組涂敷受試物，陰性對照組涂敷賦形劑，陽性對照組涂敷 o． 1％ DNCB(或其他陽性對照藥 )。每組 10只，或由是否會影響結(jié)果評價決定。給藥區(qū)涂抹受試物 (固體 )或 1ml(液體 )，對照區(qū)涂以等量賦形劑，二層紗布覆蓋，適當(dāng)方法固定。 一、動物 選成年健康的白色家兔 (2kg左右 )，其次是白色豚鼠 (0． 3kg左右 )。 受試物劑量應(yīng)以同面積不同濃度為宜。高劑量組應(yīng)是使動物產(chǎn)生嚴(yán)重毒性反應(yīng)或有少數(shù)動物死亡的劑量，低劑量組應(yīng)相當(dāng)或略高于藥效學(xué)有效劑量。 三、觀察記錄與檢查 除去受試物后每日觀察至第七日，記錄動物的體重、皮膚毛發(fā)、眼和黏膜的變化，中毒表現(xiàn)的觀察項(xiàng)與全身給藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)相同。同時要注意防止試驗(yàn)動物舔食受試物。 1．劑量設(shè)置 (1)如果受試物毒性較大．預(yù)試驗(yàn)時提高劑量可使大部分動物死亡，應(yīng)按全身給藥的原則，沒置幾個劑量組 (完整皮膚組和破損皮膚組備數(shù)個劑量組 )。 二、試驗(yàn)方法 (一 )皮膚準(zhǔn)備 動物給藥前 24h背部脊柱兩側(cè)去毛 (剪、剃，或適宜脫毛劑 )，去毛面積約為體表面積的 10％ (家兔約 150cm2，豚鼠約 40cm2，小型豬約 300cm2)。 皮膚黏膜用藥的毒性試驗(yàn) 皮膚黏膜用藥即局部用藥，包括皮膚用藥、直腸或陰道給藥、滴眼藥、滴鼻藥、滴耳劑、吸入劑及口腔咽喉用藥等。取出的組織應(yīng)放在頂先排定組織器官名稱扦盛有生理鹽水的容器中．以防漏取及干燥。 (10)總膽固醇 (T— CHO)：增高見于代謝減退，脂類動員增加等。 (4)尿素氮 (BUN)、肌酐 (Crea)：增高反應(yīng)腎臟功能受損或蛋白質(zhì)分解增強(qiáng)或脫水。反應(yīng)骨髓造血功能，外周各類血細(xì)胞的受損或活動情況，凝血機(jī)制的影響程度等。 (2)體重，反映動物的生長和一般健康狀況，也是反映毒性的敏感指標(biāo)，同時給約量的調(diào)也需根據(jù)體重的變化，因此至少每星期稱量記錄 1次。 1星期以上者及需反復(fù)應(yīng)用的藥物，可選用大鼠進(jìn)行長期毒性實(shí)驗(yàn)。中藥 — 般毒性較低，體積較大。犬等大動物常采用口服或摻飼給藥?？诜幬锟晒辔富驌斤暯o藥。室內(nèi)飼養(yǎng)另種動物，或其他飼養(yǎng)條件的突然改變，均可引起實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)激反應(yīng)，從而影響毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。大鼠、小鼠應(yīng)為 12h明， 12h暗；倉鼠應(yīng)是14h明， l0h暗。 三、動物規(guī)格和數(shù)量 長期毒性實(shí)驗(yàn)一般由雌雄各半、健康無病、檢疫合格的動物組成。 (2)符合上述條件，用藥 1星期以上者及需反復(fù)應(yīng)用的藥物，規(guī)定可只選用大鼠進(jìn)行長期毒性實(shí)驗(yàn)。 (6)食物應(yīng)清潔，無霉變：食物中的脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物等營養(yǎng)成分要符合各種動物的生理需求目恒定，因有時營養(yǎng)成分對藥物的毒性也有很大的影響。 (3)環(huán)境清潔：微生物或寄生蟲感染等，均叫能影響毒性試驗(yàn)的結(jié)果。各組平均體重相似，體重變異不超過 20％。國內(nèi)尚無統(tǒng) — 規(guī)定?；虿捎脛┝坷鄯e法，同一批動物間隔一定時間、劑量由小到大給藥，觀察毒性反應(yīng)，同時結(jié)合血藥濃度的測定，確定動物的急性毒性反應(yīng)、靶器官、中毒或致死劑量、毒性反