基因工程復(fù)習(xí)題(答案版)(編輯修改稿)
2024-09-01 22:47 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 蔗糖或其它物質(zhì)增加DNA的密度，可以防止DNA的擴散染色劑即可以在電泳前加入樣液，又可以電泳后再對凝膠染色；（溴化已錠[EB]、硝酸銀、Goldview染料）作用：呈現(xiàn)出核酸電泳后的帶型。第三章 基因克隆的酶學(xué)基礎(chǔ) 限制性核酸內(nèi)切酶的類型，基因工程常用的是哪種限制性核酸內(nèi)切酶？（常用II型） 什么是星活性，產(chǎn)生星活性的因素可能有哪些？在非最適合的條件下酶的識別特異性降低，產(chǎn)生非特異性帶，這種活性稱星活性。產(chǎn)生Star活性的因素：（書上P46P47答案）高濃度甘油，堿性pH，存在Mn2+，低離子強度，低鹽濃度，低pH 結(jié)合已做的實驗，分析影響酶切的因素。（這個答案是上屆的，僅供參考）1）DNA的純度：DNA中的雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、酚、氯仿、乙醇、SDS、EDTA等都會影響酶的活性。 2）DNA的甲基化程度 ：dam甲基化酶（修飾GATC中的A）； dcm甲基化酶（修飾CCA/TGG的C）。3）溫度 ：不同的限制性內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同。大多數(shù)是37 oC，少數(shù)要求4065 oC。4）緩沖液(Buffer)：是影響限制酶活性的重要因素。 MgClNaCl/KCl：提供Mg2+和離子強度； TrisHCl：維持pH； 二硫蘇糖醇（DTT）：保持酶穩(wěn)定性； 牛血清白蛋白BSA等：有助于酶的穩(wěn)定；β－巰基乙醇：保持酶的穩(wěn)定性，防止酶失活 限制性核酸內(nèi)切酶命名規(guī)則及各字母代表的含義。（例子和圖幫助大家理解而已）命名規(guī)則：寄主菌屬名的第1個字母＋種名的前兩個字母＋菌株或菌型代號（大寫）＋空白＋發(fā)現(xiàn)序列（羅馬數(shù)字）例子：EcoRⅠ(E：屬名；co：種名；R：株；Ⅰ：發(fā)現(xiàn)次序) 簡單敘述同尾酶和同裂酶的差別。同尾酶：來源不同，識別的序列不同，但能切出相同的粘性末端，連接后不能被相關(guān)的酶同時切割。同裂酶：識別序列相同，切割位點有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：識別位點和切點完全相同。 不完全同裂酶：識別位點相同，但切點不同。） 連接酶主要有哪些類型？有何異同點？影響連接酶連接效果的因素主要有哪些？類型：DNA連接酶和RNA連接酶異同點：相同點：都能以DNA為模板，從539。向339。進行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應(yīng)。不同點：DNA聚合酶識別脫氧核糖核苷酸，在DNA復(fù)制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在轉(zhuǎn)錄中起作用。 影響因素：（影響因素就四個，后面分析覺得煩的話大家自己看著辦啦）1）連接所用的目的片段的狀態(tài)： 185。 效率：粘性末端平端(100倍)； 185。 5，突出3，突出； 185。平端：HaeIIIAluIHinCIISmaI2）連接溫度 185。連接效果最好在37 ℃，但形成的互補不穩(wěn)定。185。最佳連接溫度：1216 ℃，較好的連接效果，互補又較穩(wěn)定。3）反應(yīng)液中的成分： 185。 ATP：反復(fù)凍熔，ATP活性降低，ATP溶解度不高，連接緩沖液宜分裝； 185。單價離子：150200mM NaCl，提高連接效果； 185。 PEG：5%以下可以提高連接效率4）插入片段與載體的濃度比例 185。載體DNA與外源DNA的分子摩爾比通常為1﹕3左右，甚至1﹕10 或更高。 185。目的或作用：增加插入片段與載體的接觸機會，減少載體自我連接的現(xiàn)象。 試分析提高平端DNA連接效率的可能方法。（傳說中的網(wǎng)上答案）低溫下長時間的連接效率比室溫下短時間連接的好。在體系中加一點切載體的酶，只要連接后原來的酶切位點消失。這樣可避免載體自連，應(yīng)該可以大大提高平端連接的效率。足夠多的載體和插入片段是最重要的 。平端的連接對于離子濃度很敏感盡可能縮小連接反應(yīng)的體積建議放在四度冰箱連接兩天效率更高比14度好 基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大腸桿菌DNA聚合酶 2）Klenow fragment 3）T7 DNA聚合酶 4）T4 DNA聚合酶 5）修飾過的T7 DNA聚合酶 6）逆轉(zhuǎn)錄酶7）Taq DNA聚合酶第四章 基因克隆的載體系統(tǒng) 作為基因工程載體，其應(yīng)具備哪些條件？! 具有針對受體細胞的親緣性或親和性（可轉(zhuǎn)移性）； ! 具有合適的篩選標(biāo)記；! 具有較高的外源DNA的載裝能力；! 具有多克隆位點（MCS）；! 具有與特定受體細胞相適應(yīng)的復(fù)制位點或整合位點。 質(zhì)粒的不相容性及其分子機理?！?定義：任何兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時存在于一個細胞中，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性。● 分子機理：兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，在復(fù)制同時受到同一種拷貝數(shù)控制系統(tǒng)的干擾，致使兩種質(zhì)粒的最終拷貝數(shù)不同，其中拷貝數(shù)多的質(zhì)粒在以后的細胞分裂周期中更具優(yōu)勢。 載體的類型主要有哪些？在基因工程操作中如何選擇載體？基因工程中常用的載體(vector)主要包括質(zhì)粒(plasmid)、噬菌體(phage)和病毒(virus)三大類。這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建，除去致病基因，并賦予一些新的功能，如有利于進行篩選的標(biāo)志基因、單一的限制酶切點等。 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化原理，影響轉(zhuǎn)化率的因素有哪些？A、 化學(xué)法（CaCl2法)轉(zhuǎn)化原理：是Ca2+與細菌外膜磷脂在
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