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正文內(nèi)容

基因工程部分復(fù)習(xí)(編輯修改稿)

2024-10-27 15:42 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 1)動物細胞分離和傳代培養(yǎng)過程 A 獲得原代細胞 原代培養(yǎng):從特定功能組織器官中分離后,無法增殖或處于穩(wěn)定傳代培養(yǎng)前動物細胞,又叫初代細胞。 獲得原代細胞是一系列細胞培養(yǎng)的第一步 獲得原代細胞的步驟: 解剖分離 培養(yǎng)液淋洗和切成碎片 再淋洗 酶法分離成單個細胞 離心分離后再培養(yǎng) B 連續(xù)化培養(yǎng) ? 大多數(shù)細胞系在有限的代數(shù)內(nèi)以不變的形式增殖,當(dāng)超過有限世代后,它們可能有兩種情況,一是衰老死亡,二是發(fā)育成永久細胞系或稱連續(xù)細胞系。 ? 適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞稱為 傳代細胞 。 ?一般情況下,非致死細胞可直接轉(zhuǎn)化為連續(xù)細胞,可以連續(xù)增殖;而其他細胞需要經(jīng)過環(huán)境適應(yīng)(如嚙齒動物細胞)、雜交或基因修飾才能轉(zhuǎn)化為連續(xù)細胞。 細胞系: 經(jīng)過原代培養(yǎng),細胞逐漸形成具有相似生理即代謝特性的穩(wěn)定細胞系,可供繁殖和多次傳代培養(yǎng)。一旦原代細胞進行了傳代培養(yǎng)即成為細胞系。 細胞株: 從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群,稱細胞株 。細胞株具有特殊的表型性質(zhì)。 2)動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境特性 A 生物特性 具有精細分工、職能專一的細胞器 能夠進行蛋白質(zhì)翻譯后的修飾。 B 營養(yǎng)要求 開始的培養(yǎng)基主要是全血清培養(yǎng)基,但由于血清的缺陷,目前開發(fā)無血清培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的主要方向。 3 動物細胞培養(yǎng)方法 動物細胞的離體培養(yǎng)方法有兩種方式: 1)貼壁培養(yǎng):貼附在 比表面積 較大的微載體上或直接貼附在反應(yīng)器器壁上, A 對象:大多數(shù)原代細胞 B貼壁基質(zhì)要求:要求是單層膜和正電荷;通常是用玻璃或一次性塑料 C 實驗室培養(yǎng):多空板培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶等小容器 比表面積:單位質(zhì)量物質(zhì)的表面積(㎡ /g) 2)懸浮培養(yǎng):直接培養(yǎng)于培養(yǎng)基中,不需要任何貼附表面,可在同期攪拌罐中培養(yǎng)。 A 培養(yǎng)對象:極少數(shù)原代細胞適合懸浮培養(yǎng),僅有造血細胞系、嚙齒類的腹水和小細胞肺癌。而大規(guī)模的動物細胞培養(yǎng)往往是從適應(yīng)懸浮培養(yǎng)開始的。 B 培養(yǎng)方式: 實驗室:采用小搖瓶和小轉(zhuǎn)瓶形式 工業(yè)化生產(chǎn)(大規(guī)模培養(yǎng)):通氣攪拌罐 (四)、動物細胞融合和單細胞克隆等技術(shù)簡介 1 細胞融合技術(shù) 1)、定義 細胞融合:兩個或多個細胞融合成一個雙核或多核細胞的現(xiàn)象 2)分類 同源融合細胞:基因型相同的細胞形成的融合細胞。 異源融合細胞:基因型不同的細胞形成的融合細胞。 教材: P61~ 68 3)、技術(shù)過程 ① 原生質(zhì)體制備 : 主要針對植物細胞和微生物細胞 ② 誘導(dǎo)細胞融合:可以通過三種途徑誘導(dǎo)兩種細胞融合在一起。 ③ 篩選、克隆雜合細胞:通過選擇性培養(yǎng)基,使得雜合細胞生長而非融合細胞不能生長
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