基因工程部分復(fù)習(xí)(編輯修改稿)
2024-10-27 15:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 1）動物細胞分離和傳代培養(yǎng)過程 A 獲得原代細胞 原代培養(yǎng)：從特定功能組織器官中分離后，無法增殖或處于穩(wěn)定傳代培養(yǎng)前動物細胞，又叫初代細胞。 獲得原代細胞是一系列細胞培養(yǎng)的第一步 獲得原代細胞的步驟： 解剖分離 培養(yǎng)液淋洗和切成碎片 再淋洗 酶法分離成單個細胞 離心分離后再培養(yǎng) B 連續(xù)化培養(yǎng) ? 大多數(shù)細胞系在有限的代數(shù)內(nèi)以不變的形式增殖，當超過有限世代后，它們可能有兩種情況，一是衰老死亡，二是發(fā)育成永久細胞系或稱連續(xù)細胞系。 ? 適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞稱為 傳代細胞 。 ?一般情況下，非致死細胞可直接轉(zhuǎn)化為連續(xù)細胞，可以連續(xù)增殖；而其他細胞需要經(jīng)過環(huán)境適應(yīng)（如嚙齒動物細胞）、雜交或基因修飾才能轉(zhuǎn)化為連續(xù)細胞。 細胞系： 經(jīng)過原代培養(yǎng)，細胞逐漸形成具有相似生理即代謝特性的穩(wěn)定細胞系，可供繁殖和多次傳代培養(yǎng)。一旦原代細胞進行了傳代培養(yǎng)即成為細胞系。 細胞株： 從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株 。細胞株具有特殊的表型性質(zhì)。 2）動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境特性 A 生物特性 具有精細分工、職能專一的細胞器 能夠進行蛋白質(zhì)翻譯后的修飾。 B 營養(yǎng)要求 開始的培養(yǎng)基主要是全血清培養(yǎng)基，但由于血清的缺陷，目前開發(fā)無血清培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的主要方向。 3 動物細胞培養(yǎng)方法 動物細胞的離體培養(yǎng)方法有兩種方式： 1）貼壁培養(yǎng)：貼附在 比表面積 較大的微載體上或直接貼附在反應(yīng)器器壁上， A 對象：大多數(shù)原代細胞 Ｂ貼壁基質(zhì)要求：要求是單層膜和正電荷；通常是用玻璃或一次性塑料 C 實驗室培養(yǎng)：多空板培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶等小容器 比表面積：單位質(zhì)量物質(zhì)的表面積（㎡ /g） 2）懸浮培養(yǎng)：直接培養(yǎng)于培養(yǎng)基中，不需要任何貼附表面，可在同期攪拌罐中培養(yǎng)。 A 培養(yǎng)對象：極少數(shù)原代細胞適合懸浮培養(yǎng)，僅有造血細胞系、嚙齒類的腹水和小細胞肺癌。而大規(guī)模的動物細胞培養(yǎng)往往是從適應(yīng)懸浮培養(yǎng)開始的。 B 培養(yǎng)方式： 實驗室：采用小搖瓶和小轉(zhuǎn)瓶形式 工業(yè)化生產(chǎn)（大規(guī)模培養(yǎng)）：通氣攪拌罐 （四）、動物細胞融合和單細胞克隆等技術(shù)簡介 1 細胞融合技術(shù) 1）、定義 細胞融合：兩個或多個細胞融合成一個雙核或多核細胞的現(xiàn)象 2）分類 同源融合細胞：基因型相同的細胞形成的融合細胞。 異源融合細胞：基因型不同的細胞形成的融合細胞。 教材： P61～ 68 3）、技術(shù)過程 ① 原生質(zhì)體制備 : 主要針對植物細胞和微生物細胞 ② 誘導(dǎo)細胞融合：可以通過三種途徑誘導(dǎo)兩種細胞融合在一起。 ③ 篩選、克隆雜合細胞：通過選擇性培養(yǎng)基，使得雜合細胞生長而非融合細胞不能生長
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