基因工程復(fù)習(xí)題(答案版)-文庫吧資料
2024-08-18 22:47本頁面
【正文】 制同時(shí)受到同一種拷貝數(shù)控制系統(tǒng)的干擾，致使兩種質(zhì)粒的最終拷貝數(shù)不同，其中拷貝數(shù)多的質(zhì)粒在以后的細(xì)胞分裂周期中更具優(yōu)勢。 質(zhì)粒的不相容性及其分子機(jī)理。足夠多的載體和插入片段是最重要的 。在體系中加一點(diǎn)切載體的酶，只要連接后原來的酶切位點(diǎn)消失。 試分析提高平端DNA連接效率的可能方法。 185。 PEG：5%以下可以提高連接效率4）插入片段與載體的濃度比例 185。 ATP：反復(fù)凍熔，ATP活性降低，ATP溶解度不高，連接緩沖液宜分裝； 185。最佳連接溫度：1216 ℃，較好的連接效果，互補(bǔ)又較穩(wěn)定。連接效果最好在37 ℃，但形成的互補(bǔ)不穩(wěn)定。 5，突出3，突出； 185。 影響因素：（影響因素就四個(gè)，后面分析覺得煩的話大家自己看著辦啦）1）連接所用的目的片段的狀態(tài)： 185。進(jìn)行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應(yīng)。） 連接酶主要有哪些類型？有何異同點(diǎn)？影響連接酶連接效果的因素主要有哪些？類型：DNA連接酶和RNA連接酶異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：都能以DNA為模板，從539。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：識(shí)別位點(diǎn)和切點(diǎn)完全相同。同尾酶：來源不同，識(shí)別的序列不同，但能切出相同的粘性末端，連接后不能被相關(guān)的酶同時(shí)切割。 MgClNaCl/KCl：提供Mg2+和離子強(qiáng)度； TrisHCl：維持pH； 二硫蘇糖醇（DTT）：保持酶穩(wěn)定性； 牛血清白蛋白BSA等：有助于酶的穩(wěn)定；β－巰基乙醇：保持酶的穩(wěn)定性，防止酶失活 限制性核酸內(nèi)切酶命名規(guī)則及各字母代表的含義。大多數(shù)是37 oC，少數(shù)要求4065 oC。 2）DNA的甲基化程度 ：dam甲基化酶（修飾GATC中的A）； dcm甲基化酶（修飾CCA/TGG的C）。產(chǎn)生Star活性的因素：（書上P46P47答案）高濃度甘油，堿性pH，存在Mn2+，低離子強(qiáng)度，低鹽濃度，低pH 結(jié)合已做的實(shí)驗(yàn)，分析影響酶切的因素。（各種可能因素是上一屆的，具體其實(shí)大家可以根據(jù)那天師兄說的去寫）提取失?。?）洗去雙鏈時(shí)，將質(zhì)粒DNA洗去； 2）破壁失敗，質(zhì)粒沒析出； 3）加劑問題電泳失?。?）電壓太高 2）沒加染色劑 3）膠穿孔 4）電泳時(shí)間過長12. 電泳緩沖液使用一定時(shí)間后出現(xiàn)DNA在凝膠中跑不動(dòng)現(xiàn)象的原因，有何解決辦法？原因：電泳緩沖液的離子的富集作用；解決方法：； 13. 電泳的指示劑和染色劑有何區(qū)別，各自的作用是什么？指示劑一定要在電泳前加入，指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成載樣緩沖液；（一般為：溴酚蘭，二甲苯青）作用：①預(yù)知電泳的速率及方向；②使樣品呈現(xiàn)顏色，便于加樣；③一些高濃度蔗糖或其它物質(zhì)增加DNA的密度，可以防止DNA的擴(kuò)散染色劑即可以在電泳前加入樣液，又可以電泳后再對(duì)凝膠染色；（溴化已錠[EB]、硝酸銀、Goldview染料）作用：呈現(xiàn)出核酸電泳后的帶型。堿裂解法原理：在堿性條件下，雙連DNA氫鍵斷裂，結(jié)構(gòu)破壞變性，環(huán)狀超螺旋質(zhì)粒不充分變性。Southern雜交影響因子1）、目的DNA在總DNA中所占的比例2）、探針的大小和標(biāo)記效率3）、轉(zhuǎn)移到濾膜上的DNA量4）、探針與靶DNA的同源性8. 基因組文庫的構(gòu)建過程？如何確定文庫的大?。炕蚪M文庫的構(gòu)建過程：1）從生物體提取大片斷的基因組DNA；2）用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶（常為4堿基識(shí)別位點(diǎn)）進(jìn)行部分酶切或超聲波打斷基因組DNA ；3）在瓊脂凝膠電泳上或蔗糖梯度離心篩選適當(dāng)長度的DNA片斷（根據(jù)載體的要求）； 4）載體的酶切、回收；5）將處理好的基因組DNA片斷與載體連接；6）將重組子導(dǎo)入宿主細(xì)胞7）文庫的鑒定、收集、保存；確定文庫大小的方法：以在構(gòu)建的基因組文庫中任一基因存在的概率來衡量文庫的質(zhì)量或完備性，它與基因文庫最低所含克隆數(shù)N（即文庫大?。┲g的關(guān)系可用下式表示： N = ln ( 1 – P ) / ln ( 1 – f ) 其中： N：文庫所需的總克隆數(shù)； P：任一基因被克?。ɑ虼嬖谟诨蛭膸熘校┑母怕?； f：克隆片段的平均大小/ 生物基因組的大小。標(biāo)記類型：按核酸分子的不同：可分為DNA探針和RNA探針根據(jù)標(biāo)記物的不同：可分放射性標(biāo)記探針和非放射性標(biāo)記探針；雙鏈DNA探針標(biāo)記主要方法：切口平移法、隨機(jī)引物合成法；7. Southern雜交一般過程及影響雜交因素。初始模板量X0的對(duì)數(shù)值與C(T) 值之間呈線性關(guān)系：log X0= log(1+Ex) *Ct+ log N Ct值的含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)開始由本底進(jìn)入指數(shù)增長階段時(shí)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（如后圖所示，圖僅供參考）Threshold line C(t) value C(t) value +/閾值線Ct值Ct值6. 分子雜交的類型主要有哪些？探針的標(biāo)記方法與標(biāo)記類型？常用的雙鏈DNA的標(biāo)記方法是哪兩種？探針的標(biāo)記方法：切口平移法、隨機(jī)引物合成法，末端標(biāo)記法，PCR標(biāo)記法，體外轉(zhuǎn)錄標(biāo)記
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