基因工程復習題(答案版)(參考版)
2024-08-16 22:47本頁面
【正文】 13。對報告基因來講，還可以利用報告基因的顯色或發(fā)光特性進行選擇與 鑒定出現(xiàn)轉基因沉默現(xiàn)象的可能原因分析。(2)基因的轉錄/表達水平的檢測與鑒定(外源基因是否表達):可用RTPCR法或者Northern Blotting。植物基因工程什么叫轉基因植物？植物轉基因技術的基本路線主要包括哪些？利用DNA重組技術，在離體條件下對不同生物的DNA進行加工，并按照人們的意愿和適當?shù)妮d體重新組合，再將重組DNA轉入生物體或細胞內(nèi)，并使其在生物體內(nèi)或細胞中表達的植物。（1）表達蛋白用于生物化學和分子生物學研究 ——主要考慮保持蛋白質(zhì)原有的功能不變；表達策略：融合表達和直接表達（2）表達蛋白用作抗原——主要考慮表達蛋白的快速提純；表達策略：以包涵體形式合成目的蛋白和融合表達目標蛋白（不用去除標簽蛋白）（3）表達蛋白用作結構研究——表達蛋白以天然可溶形式產(chǎn)生；表達時考慮因素：表達溫度（高溫促進包涵體的形成）；表達水平（高表達促成包涵體的形成）；表達載體受體菌?？寺』蚰康牡鞍椎谋磉_的形式主要有哪些類型？表達蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白兩類，具體包括如下幾種結構形態(tài)：包涵體型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白啟動子從轉錄模式上可分為哪兩種？表達系統(tǒng)常選用哪一種？其機理是什么？啟動子從轉錄模式上分為：組成型啟動子和誘導型啟動子表達系統(tǒng)常選用誘導型啟動子機理：指在某些特定的物理或化學信號的刺激下，該種類型的啟動子可以大幅度地提高基因的轉錄水平。 可高密度發(fā)酵252。 表達蛋白的翻譯后的加工和修飾252。甲醇酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)點：252。內(nèi)源性蛋白酶降解空間構象不正確的異源蛋白； 242。缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的復性功能； 242。被FDA批準為安全的基因工程受體生物。基因克隆表達系統(tǒng)成熟、完善； 242。大腸桿菌表達外源基因的優(yōu)勢： 242。 把陽性克隆轉化突變體進行功能互補及進行測序分析。 用獲得的陽性克隆篩選野生型基因組文庫，獲得野生型的陽性克隆。 用TDNA片段做probe篩選突變體文庫，獲得陽性克隆。216。216。然后，通過基因擴增，得到大量所要的目的基因。B．噬菌體表面展示技術原理：當外源DNA片段插入絲狀噬菌體基因組的一個外被蛋白基因中時，如果兩者讀碼框結構保持一致，這個外源DNA片段所編碼的產(chǎn)物可與此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表達，并顯示在噬菌體的表面。這兩個結構域各具功能，互不影響，但一個完整的、具有激活特定基因表達的激活因子必須同時含有這兩個結構域，否則無法完成其激活功能。酵母雙雜交技術、噬菌體表面展示技術的原理。其中標準化步驟均等了檢測子中的cDNA單鏈豐度，而消減雜交步驟去除了檢測子和驅趕子之間的共同序列，使檢測子和驅趕子之間不同的序列得到擴增。（P221）抑制性差減雜交的原理與應用。l 擴出的條帶往往是3`端比較短的UTR區(qū)的一段序列，提供的信息較少。l 工作量大。l 擴出的cDNA可直接用于測序、文庫篩選等。l 所需的mRNA量少。簡單闡述差異顯示PCR克隆基因的原理及其優(yōu)缺點，有何應用？主要原理：利用真核生物mRNA結尾處有POLY（A）結構，在其3`端設計象5`T11GA樣引物，該引物可與mRNA總數(shù)的十二分之一結合，從而使這部分基因得到逆轉錄，同時結合5`端的隨機引物（20條10mer），可以使不同長度的基因得到擴增。[參考文獻：，2006，34（15）：36253628）]6）cDNA微陣列建立一套統(tǒng)一且具有高質(zhì)量、高代表性的cDNA列陣膜，在這一列陣膜上每個cDNA克隆都有固定的位置和編號，這樣大大方便了數(shù)據(jù)的綜合比較分析，并可對每個cDNA克隆子進行定量分析。使用人工合成的短的雙鏈接頭，該接頭一端具有同樣的內(nèi)切酶識別粘性末端，互補連接后成為DNA模板。4）DNA代表性差異分析（DNA RDA）代表性差別分析是通過突變型（驅趕DNA，driver DNA）與野生型（檢測DNA，tester DNA）基因組之間的差異來分離和鑒定突變基因的方法。其中標準化步驟均等了檢測子中的cDNA單鏈豐度，而消減雜交步驟去除了檢測子和驅趕子之間的共同序列，使檢測子和驅趕子之間不同的序列得到擴增。用已學過的重組體分子的選擇與鑒定技術，試設計一個試驗方案，假如一特異PCR擴出的基因或基因片斷重組進T載體并轉化大腸桿菌，如何鑒定并獲得真實轉化子？(自理)第五章 基因的克隆一般方法基因的克隆方法主要有哪些？并闡述其克隆原理（至少3種，都是書上找的，自選哈，建議必選DD RTPCR和SSH，原因請看下題）？1）差減雜交（SH）通過DNA復性動力學原理富集目的基因序列，并以此構建減數(shù)文庫的方式來進行目的基因分離克隆的。（2）基于克隆DNA序列檢測法Southern印跡雜交：根據(jù)毛細管作用的原理，使在電泳凝膠中分離的DNA片段轉移并結合在適當?shù)臑V膜上，然后通過與已標記的單鏈DNA探針的雜交作用以檢測這些被轉移的DNA片段。重組體分子的選擇方法主要有哪些？并簡單闡述其原理。B、 電穿孔轉化轉化原理：將待轉化的質(zhì)?；駾NA重組連接液加在電穿孔轉化儀的樣品池中，兩極施加高壓電場，在強大電場的作用下，細菌細胞壁和細胞膜產(chǎn)生縫隙，質(zhì)?；駾NA重組分子便可進入細胞內(nèi)。這些載體均需經(jīng)人工構建，除去致病基因，并賦予一些新的功能，如有利于進行篩選的標志基因、單一的限制酶切點等。● 分子機理：兩種含有相似復制子結構的不同質(zhì)粒，在復
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