基因工程復(fù)習(xí)題(答案版)-資料下載頁
2025-08-05 22:47本頁面
【正文】 結(jié)構(gòu)域，否則無法完成其激活功能。不同來源的激活因子的BD區(qū)與AD區(qū)結(jié)合后則能特異地激活BD結(jié)合基因的表達(dá)。B．噬菌體表面展示技術(shù)原理：當(dāng)外源DNA片段插入絲狀噬菌體基因組的一個外被蛋白基因中時，如果兩者讀碼框結(jié)構(gòu)保持一致，這個外源DNA片段所編碼的產(chǎn)物可與此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表達(dá)，并顯示在噬菌體的表面。利用抗此外源基因編碼產(chǎn)物（多肽或蛋白）的抗體，通過親和純化，就能從大量的噬菌體中富集、分離出含有所要的基因的融合噬菌體。然后，通過基因擴增，得到大量所要的目的基因。TDNA標(biāo)簽法克隆基因的一般技術(shù)路線。216。 農(nóng)桿菌侵染植物得到轉(zhuǎn)化苗，篩選出表現(xiàn)某種突變性狀的個體。216。 建立突變體基因組文庫及野生型基因組文庫.216。 用TDNA片段做probe篩選突變體文庫，獲得陽性克隆。216。 用獲得的陽性克隆篩選野生型基因組文庫，獲得野生型的陽性克隆。216。 把陽性克隆轉(zhuǎn)化突變體進(jìn)行功能互補及進(jìn)行測序分析。第七章 克隆基因的表達(dá)通過比較，分析大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)各有何優(yōu)缺點。大腸桿菌表達(dá)外源基因的優(yōu)勢： 242。全基因組測序，共有4405個開放型閱讀框架； 242?；蚩寺”磉_(dá)系統(tǒng)成熟、完善； 242。繁殖迅速、培養(yǎng)簡單、操作方便、遺傳穩(wěn)定； 242。被FDA批準(zhǔn)為安全的基因工程受體生物。大腸桿菌表達(dá)外源基因的劣勢： 242。缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的復(fù)性功能； 242。缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的修飾加工系統(tǒng)； 242。內(nèi)源性蛋白酶降解空間構(gòu)象不正確的異源蛋白； 242。周質(zhì)內(nèi)含有種類繁多的內(nèi)毒素。甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點：252。 具有強的受嚴(yán)格調(diào)控的AOX1啟動子252。 表達(dá)蛋白的翻譯后的加工和修飾252。 營養(yǎng)要求低，工業(yè)化生產(chǎn)成本低252。 可高密度發(fā)酵252。 表達(dá)蛋白可存在于胞內(nèi)和胞外酵母表達(dá)系統(tǒng)的缺點：酵母表達(dá)蛋白有時會出現(xiàn)蛋白切割問題（這個找不到，百度的）如何提高克隆基因的表達(dá)水平？1）、表達(dá)載體的優(yōu)化設(shè)計；2）、提高目標(biāo)基因mRNA和目標(biāo)基因產(chǎn)物的穩(wěn)定性；3）、密碼子偏愛性；4）、表達(dá)環(huán)境條件的優(yōu)化。克隆基因目的蛋白的表達(dá)的形式主要有哪些類型？表達(dá)蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白兩類，具體包括如下幾種結(jié)構(gòu)形態(tài)：包涵體型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白啟動子從轉(zhuǎn)錄模式上可分為哪兩種？表達(dá)系統(tǒng)常選用哪一種？其機理是什么？啟動子從轉(zhuǎn)錄模式上分為：組成型啟動子和誘導(dǎo)型啟動子表達(dá)系統(tǒng)常選用誘導(dǎo)型啟動子機理：指在某些特定的物理或化學(xué)信號的刺激下，該種類型的啟動子可以大幅度地提高基因的轉(zhuǎn)錄水平。 表達(dá)載體和基因工程一般克隆載體在元件構(gòu)成上有何差別？表達(dá)載體：啟動子；終止子；核糖體結(jié)合位點（SD序列）；篩選標(biāo)記；復(fù)制子（質(zhì)?？截悢?shù)）；多克隆位點克隆載體：篩選標(biāo)記；復(fù)制子（質(zhì)?？截悢?shù)）；多克隆位點 根據(jù)表達(dá)蛋白用途的不同，設(shè)計選擇基因的表達(dá)策略。（1）表達(dá)蛋白用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究 ——主要考慮保持蛋白質(zhì)原有的功能不變；表達(dá)策略：融合表達(dá)和直接表達(dá)（2）表達(dá)蛋白用作抗原——主要考慮表達(dá)蛋白的快速提純；表達(dá)策略：以包涵體形式合成目的蛋白和融合表達(dá)目標(biāo)蛋白（不用去除標(biāo)簽蛋白）（3）表達(dá)蛋白用作結(jié)構(gòu)研究——表達(dá)蛋白以天然可溶形式產(chǎn)生；表達(dá)時考慮因素：表達(dá)溫度（高溫促進(jìn)包涵體的形成）；表達(dá)水平（高表達(dá)促成包涵體的形成）；表達(dá)載體受體菌。第八章植物基因工程什么叫轉(zhuǎn)基因植物？植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線主要包括哪些？利用DNA重組技術(shù)，在離體條件下對不同生物的DNA進(jìn)行加工，并按照人們的意愿和適當(dāng)?shù)妮d體重新組合，再將重組DNA轉(zhuǎn)入生物體或細(xì)胞內(nèi)，并使其在生物體內(nèi)或細(xì)胞中表達(dá)的植物。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線l 分離目的基因l 目的基因與恰當(dāng)?shù)妮d體DNA形成重組DNAl 重組DNA的擴增l 目的基因?qū)氲绞荏w細(xì)胞l 篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植株l 轉(zhuǎn)基因植株的大規(guī)模種植外源基因?qū)胫参锏姆椒ㄖ饕心男?？Y 物理方法：電擊法、基因槍法(biolistic)、顯微注射法、微激光束法Y 化學(xué)方法：PEG介導(dǎo)法、脂質(zhì)體介導(dǎo)法Y 生物學(xué)方法：農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、花粉管通道法運用已學(xué)的知識，如何全面分析獲得的轉(zhuǎn)基因個體（提示：包括外源基因是否整合，被插入位點分析，外源基因是否表達(dá)，表達(dá)量如何？等）對轉(zhuǎn)基因個體進(jìn)行檢測與鑒定的對象 ——報告基因 ——目的基因(1)基因組水平的檢測與鑒定（外源基因是否整合，被插入位點分析）：可以用PCR擴增結(jié)合Southern Blotting進(jìn)行驗證。(2)基因的轉(zhuǎn)錄/表達(dá)水平的檢測與鑒定(外源基因是否表達(dá)):可用RTPCR法或者Northern Blotting。(3)基因的翻譯水平的檢測與鑒定（表達(dá)量）：可用Western Blotting或者ELISA。對報告基因來講，還可以利用報告基因的顯色或發(fā)光特性進(jìn)行選擇與 鑒定出現(xiàn)轉(zhuǎn)基因沉默現(xiàn)象的可能原因分析。(1)位置效應(yīng)：指插入部位及其周圍序列對外源基因的影響(2)DNA甲基化：包括編碼序列和啟動子的甲基化(3)重復(fù)序列誘發(fā)基因沉默：多拷貝串聯(lián)重復(fù)序列易引起外源基因的失活；(4)共抑制（cosuppression）：具有部分同源性的外源基因和植物內(nèi)源基因相互作用引起的沉默現(xiàn)象。13
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