基因工程復習題(答案版)-資料下載頁
2025-08-05 22:47本頁面
【正文】 結構域，否則無法完成其激活功能。不同來源的激活因子的BD區(qū)與AD區(qū)結合后則能特異地激活BD結合基因的表達。B．噬菌體表面展示技術原理：當外源DNA片段插入絲狀噬菌體基因組的一個外被蛋白基因中時，如果兩者讀碼框結構保持一致，這個外源DNA片段所編碼的產物可與此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表達，并顯示在噬菌體的表面。利用抗此外源基因編碼產物（多肽或蛋白）的抗體，通過親和純化，就能從大量的噬菌體中富集、分離出含有所要的基因的融合噬菌體。然后，通過基因擴增，得到大量所要的目的基因。TDNA標簽法克隆基因的一般技術路線。216。 農桿菌侵染植物得到轉化苗，篩選出表現某種突變性狀的個體。216。 建立突變體基因組文庫及野生型基因組文庫.216。 用TDNA片段做probe篩選突變體文庫，獲得陽性克隆。216。 用獲得的陽性克隆篩選野生型基因組文庫，獲得野生型的陽性克隆。216。 把陽性克隆轉化突變體進行功能互補及進行測序分析。第七章 克隆基因的表達通過比較，分析大腸桿菌表達系統(tǒng)和酵母表達系統(tǒng)各有何優(yōu)缺點。大腸桿菌表達外源基因的優(yōu)勢： 242。全基因組測序，共有4405個開放型閱讀框架； 242?；蚩寺”磉_系統(tǒng)成熟、完善； 242。繁殖迅速、培養(yǎng)簡單、操作方便、遺傳穩(wěn)定； 242。被FDA批準為安全的基因工程受體生物。大腸桿菌表達外源基因的劣勢： 242。缺乏對真核生物蛋白質的復性功能； 242。缺乏對真核生物蛋白質的修飾加工系統(tǒng)； 242。內源性蛋白酶降解空間構象不正確的異源蛋白； 242。周質內含有種類繁多的內毒素。甲醇酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)點：252。 具有強的受嚴格調控的AOX1啟動子252。 表達蛋白的翻譯后的加工和修飾252。 營養(yǎng)要求低，工業(yè)化生產成本低252。 可高密度發(fā)酵252。 表達蛋白可存在于胞內和胞外酵母表達系統(tǒng)的缺點：酵母表達蛋白有時會出現蛋白切割問題（這個找不到，百度的）如何提高克隆基因的表達水平？1）、表達載體的優(yōu)化設計；2）、提高目標基因mRNA和目標基因產物的穩(wěn)定性；3）、密碼子偏愛性；4）、表達環(huán)境條件的優(yōu)化?？寺』蚰康牡鞍椎谋磉_的形式主要有哪些類型？表達蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白兩類，具體包括如下幾種結構形態(tài)：包涵體型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白啟動子從轉錄模式上可分為哪兩種？表達系統(tǒng)常選用哪一種？其機理是什么？啟動子從轉錄模式上分為：組成型啟動子和誘導型啟動子表達系統(tǒng)常選用誘導型啟動子機理：指在某些特定的物理或化學信號的刺激下，該種類型的啟動子可以大幅度地提高基因的轉錄水平。 表達載體和基因工程一般克隆載體在元件構成上有何差別？表達載體：啟動子；終止子；核糖體結合位點（SD序列）；篩選標記；復制子（質粒拷貝數）；多克隆位點克隆載體：篩選標記；復制子（質?？截悢担?；多克隆位點 根據表達蛋白用途的不同，設計選擇基因的表達策略。（1）表達蛋白用于生物化學和分子生物學研究 ——主要考慮保持蛋白質原有的功能不變；表達策略：融合表達和直接表達（2）表達蛋白用作抗原——主要考慮表達蛋白的快速提純；表達策略：以包涵體形式合成目的蛋白和融合表達目標蛋白（不用去除標簽蛋白）（3）表達蛋白用作結構研究——表達蛋白以天然可溶形式產生；表達時考慮因素：表達溫度（高溫促進包涵體的形成）；表達水平（高表達促成包涵體的形成）；表達載體受體菌。第八章植物基因工程什么叫轉基因植物？植物轉基因技術的基本路線主要包括哪些？利用DNA重組技術，在離體條件下對不同生物的DNA進行加工，并按照人們的意愿和適當的載體重新組合，再將重組DNA轉入生物體或細胞內，并使其在生物體內或細胞中表達的植物。植物轉基因技術的基本路線l 分離目的基因l 目的基因與恰當的載體DNA形成重組DNAl 重組DNA的擴增l 目的基因導入到受體細胞l 篩選轉化細胞，誘導產生轉基因植株l 轉基因植株的大規(guī)模種植外源基因導入植物的方法主要有哪些？Y 物理方法：電擊法、基因槍法(biolistic)、顯微注射法、微激光束法Y 化學方法：PEG介導法、脂質體介導法Y 生物學方法：農桿菌介導法、花粉管通道法運用已學的知識，如何全面分析獲得的轉基因個體（提示：包括外源基因是否整合，被插入位點分析，外源基因是否表達，表達量如何？等）對轉基因個體進行檢測與鑒定的對象 ——報告基因 ——目的基因(1)基因組水平的檢測與鑒定（外源基因是否整合，被插入位點分析）：可以用PCR擴增結合Southern Blotting進行驗證。(2)基因的轉錄/表達水平的檢測與鑒定(外源基因是否表達):可用RTPCR法或者Northern Blotting。(3)基因的翻譯水平的檢測與鑒定（表達量）：可用Western Blotting或者ELISA。對報告基因來講，還可以利用報告基因的顯色或發(fā)光特性進行選擇與 鑒定出現轉基因沉默現象的可能原因分析。(1)位置效應：指插入部位及其周圍序列對外源基因的影響(2)DNA甲基化：包括編碼序列和啟動子的甲基化(3)重復序列誘發(fā)基因沉默：多拷貝串聯重復序列易引起外源基因的失活；(4)共抑制（cosuppression）：具有部分同源性的外源基因和植物內源基因相互作用引起的沉默現象。13
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