高考復習之基因工程-資料下載頁
2025-01-09 13:27本頁面
【正文】 酸序列，直接合成 DNA分子 蛋白質 DNA mRNA 直接分離基因 —— 人工合成基因 —— 基因操作的工具 工具 作用 限制性內切酶 在特定的切點上切割 DNA分子 DNA連接酶 把兩條 DNA末端間的縫隙“縫合”起來 運載體 將外源基因送入受體細胞 聚合酶鏈反應 (Polymerase Chain Reaction ,PCR)是 80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術 。 PCR技術的基本原理 類似于 DNA的天然復制過程 ， 其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物 。 PCR由變性 退火 延伸三個基本反應步驟構成： ① 模板 DNA的變性：模板 DNA經(jīng)加熱至 93℃ 左右一定時間后 ， 使模板 DNA雙鏈或經(jīng) PCR擴增形成的雙鏈 DNA解離 ， 使之成為單鏈 ， 以便它與引物結合 ， 為下輪反應作準備； ② 模板 DNA與引物的退火 (復性 )：模板 DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后 ， 溫度降至 55℃ 左右 ， 引物與模板 DNA單鏈的互補序列配對結合； ③ 引物的延伸： DNA模板 引物結合物在 TaqDNA聚合酶的作用下 ， 以 dNTP為反應原料 ， 靶序列為模板 ， 按堿基配對與半保留復制原理 ， 合成一條新的與模板 DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環(huán)變性 退火 延伸三過程 ， 就可獲得更多的“ 半保留復制鏈 ” ， 而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板 。 每完成一個循環(huán)需 2～ 4分鐘 ， 2～ 3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍 。 標準的 PCR反應體系： 10擴增緩沖液 10ul 4種 dNTP混合物 各 200umol/L 引物 各 10～ 100pmol 模板 DNA ～ 2ug Taq DNA聚合酶 Mg2+ 加雙或三蒸水至 100ul PCR反應五要素 ： 參加 PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、 dNTP、 模板和Mg2+ 引物 ： 引物是 PCR特異性反應的關鍵， PCR 產物的特異性取決于引物與模板 DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板 DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用 PCR就可將模板 DNA在體外大量擴增。 1995年，我國科學家將某種細菌的殺蟲蛋白基因導入棉花，培育出了抗棉鈴蟲效果明顯的棉花新品系。 抗蟲棉 普通棉 中心法則的補充 : 中心法則的信息流主方向 : 中心法則 RNA病毒 蛋白質 DNA mRNA 逆轉錄病毒 基因轉移技術和基因擴增技術 —— 提取人們所需要的特定基因 途徑 直接分離基因 —— 如鳥槍法 人工合成基因 mRNA 逆轉錄 單連 DNA 雙連 DNA 合成 推測出的核苷酸序列，通過化學方法合成 提取目的基因的方法 下一頁 返 回 提取目的基因的方法（二） ? 人工基因合成法 1. 反轉錄法： 以 mRNA為模板 ，反轉錄成單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA 2. 直接合成法： 用游離的脫氧核苷酸 直接合成相應的基因。 DNA合成儀 PCR擴增儀 返 回
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