[理學(xué)]基因工程-資料下載頁(yè)
2025-01-21 13:28本頁(yè)面
【正文】 切酶 、 DNA連接酶 、 DNA聚合酶 以及DNA和 RNA的一些 修飾酶 等是最基本的工具，這些酶被稱為基因工程的 工具酶 。 限制性內(nèi)切酶于 1968年被發(fā)現(xiàn)，而 DNA連接酶在 1967年被發(fā)現(xiàn)， DNA聚合酶則早在1957年就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了。 基因工程的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史 ? 限制性內(nèi)切酶 識(shí)別和切割 雙鏈 DNA分子內(nèi)特殊核苷酸 序列 的酶統(tǒng)稱為限制性內(nèi)切酶 (restriction endonedeases) ， 簡(jiǎn)稱限制酶 。 目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn) 2300多種這類酶 。 限制性內(nèi)切酶可分為 3類 : I類 、 II類 和III類 。 II類限制性內(nèi)切酶 是基因工程中使用的主要工具酶。 I類和 III類限制性內(nèi)切酶在基因工程中基本不用。 基因工程的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史 ? II類限制性內(nèi)切酶的特點(diǎn) ? 1）識(shí)別特定的核苷酸序列， 其長(zhǎng)度一般為 48個(gè)核苷酸， 且具回文序列 ? 2）具有特定的酶切位點(diǎn)，產(chǎn)生特定的酶切末端 ? 3）沒(méi)有甲基化修飾酶功能，不需要 ATP和 SAM作為輔助因子，一般只需要 Mg2+ EcoR I ↓ G A A T T C C T T A A G ↑ 基因工程的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史 ? DNA連接酶 用于將兩段乃至數(shù)段 DNA片段拼接起來(lái)的酶稱為連接酶?；蚬こ讨凶畛Ｓ玫倪B接酶是 T4DNA連接酶。它催化 DNA 5’磷酸基與 3’羥基之間形成磷酸二酯鍵。除 T4DNA連接酶外，還有大腸桿菌的 DNA連接酶，其催化反應(yīng)基本與 T4DNA連接酶相同，只是催化反應(yīng)需要輔助因子 NAD+參與。 基因工程的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史 ? 基因工程的誕生 1972年，美國(guó)斯坦福大學(xué)的科學(xué)家博格（ Berg）首先在體外進(jìn)行了 DNA改造的研究，他們把一種會(huì)引起癌癥的猴子病毒（ SV40）的 DNA和一種大腸桿菌的噬菌體的 DNA分別切割，又將兩者連接在一起，成功地構(gòu)建了第一個(gè)體外重組的人工 DNA分子 。 1980年，博格由于他在重組 DNA技術(shù)方面的工作而被授予諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 基因工程的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史 1973年科恩 (Cohen)和波埃（ Boyer）利用限制酶 EcoRI將大腸桿菌的一個(gè) 卡那霉素抗性基因 組合到一個(gè)帶 四環(huán)素抗性 的質(zhì)粒上，制造了一個(gè)雜合的 DNA分子，然后把這個(gè)雜合的 DNA分子又放回大腸桿菌中，結(jié)果產(chǎn)生了同時(shí) 既抗四環(huán)素又抗卡那霉素 的新菌種。 基因工程的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史 這樣，科恩和波埃首次實(shí)現(xiàn)了將在體外重組的 DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌中，并使得導(dǎo)入外來(lái) DNA能在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制和表達(dá)，從而完成了 DNA體外重組和擴(kuò)增的全過(guò)程。 這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的成功宣告了基因工程的誕生！ 再 見(jiàn)！
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