【正文】 轉(zhuǎn)錄任一條鏈的 mRNA，可以方便制備外源 DNA 插入序列的轉(zhuǎn)錄本 ； （ 5）通過(guò)內(nèi)刪除作用， 插入的外源 DNA 可自動(dòng)從λ 噬菌體載體 轉(zhuǎn)移到細(xì)菌質(zhì)粒載體便于構(gòu)建限制圖譜或測(cè)序，省略了 亞克隆。 36. λ噬菌體載體的主要類型 取代型，插入型 37. λ ZAP 的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) λ ZAP 是一種典型的插入型 λ 噬菌體載體，可將插入的 DNA 片段直接從 λ 載體轉(zhuǎn)移到質(zhì)粒載體。 34. 理想的質(zhì)粒載體應(yīng)具備 的條件 （載體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)） ： （ 1）必須具備復(fù)制起點(diǎn)； （ 2）具有抗生素抗性基因； （ 3）具有若干核酸內(nèi)切限制酶的酶切位點(diǎn)； （ 4）具有較小的分子量，較高的拷貝數(shù)。 產(chǎn)生星號(hào)活力的原因：（ 1）酶用量的單位數(shù)與 DNA 用量的比值過(guò)高，超過(guò) 10U/μ g；（ 2）甘油濃度不可超過(guò) 5%；（ 3）二價(jià)離子 Mg2+被 Mn2+、 Cu2+Zn2+Ca2+取代；（ 4） Mg2+濃度低于 25mmol/L （ 5） Buffer pH 不能高于 8；（ 6）有機(jī)溶劑的干擾。 （ 3） DNA 制劑的純度對(duì)酶切活性的影響 ，制劑中的污染物：酚，氯仿，蛋白質(zhì)，酒精，甘油，高鹽， SDS, EDTA 等； 29. 星號(hào)活性： 在反應(yīng)條件發(fā)生變更的情況下，核酸內(nèi)切限制酶便失去了切割其固有識(shí)別序列的能力，而會(huì)在新的識(shí)別序列上發(fā)生 DNA 分子切割。 （ 1） DNA 的分子特性 a 識(shí)別位點(diǎn)周圍核苷酸堿基成分可影響其底物 DNA 消化的速率，有時(shí)達(dá) 25 倍； b 特定 DNA 分子中所具有的目標(biāo)限制位點(diǎn)的密度 ； c 完全超螺旋 DNA 分子比線性 DNA 分子消化時(shí)需要更多的酶； d DNA 分子的甲基化程度，如果位點(diǎn)發(fā)生甲基化，會(huì)強(qiáng)烈干擾核酸內(nèi)切限制酶的活性。 26. 核算內(nèi)切限制酶： 是一類能夠識(shí)別雙鏈 DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割 DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。 裂口（ Gap） :指雙鏈 DNA 分子的某一條鏈上，失去一個(gè)或連續(xù)幾個(gè)核苷酸時(shí)所出現(xiàn)的 DNA單鏈斷裂。 24. 共線性的概念 （ 1）位于同一條染色體 DNA 或 DNA 分子上不同基因的位置排列關(guān)系 ； （ 2）不同物種中 DNA 的排列關(guān)系； （ 3）位于 DNA 分子及其轉(zhuǎn)錄本 RNA 分子間的共線性； （ 4） mRNA 密 碼的順序與蛋白質(zhì)氨基酸順序。 22. 基因工程誕生的技術(shù)基礎(chǔ) (1)核酸 內(nèi)切限制酶， DNA 的體外切割與連接， DAN 連接酶； (2)DNA 核苷酸測(cè)序技術(shù)； （ 3）基因克隆載體的發(fā)展與應(yīng)用； （ 4）大腸桿菌遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的建立； （ 5）瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)應(yīng)用； （ 6）核酸雜交技術(shù)的應(yīng)用。 21. 基因工程誕生的理論基礎(chǔ) (1)20 世紀(jì) 40 年代確定了遺傳信息的攜帶者 (分子載體 )是 DNA 而不是蛋白質(zhì)。 20. 基因的分類 (1)按拷貝數(shù)分： 單拷貝基因， 多拷貝基因 (2)按產(chǎn)物類型分： 結(jié)構(gòu)基因，調(diào)節(jié)基因 (3)按表達(dá)特性分：組成基因， 誘導(dǎo) 基因 (4)按實(shí)驗(yàn)用途分：選擇基因，報(bào)告基因 (5)按排列組合特點(diǎn)分： 基因家族，基因簇 選擇基因： 指可使被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞獲得其親本細(xì)胞所不具有的新的遺傳特征，從而使得人們能夠使用特定的 選擇培養(yǎng)基，將轉(zhuǎn)化的新細(xì)胞 (即轉(zhuǎn)化子 )，從其親本細(xì)胞群體中選擇出來(lái)的一類特殊的基因。 ② 固定作用 將模板固定在細(xì)胞內(nèi)特定位置，如連接在核基質(zhì)上，有利于拓?fù)洚悩?gòu)酶改變 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)張力，有利 于促進(jìn) RNA 聚合酶在 DNA 鏈上的結(jié)合與滑動(dòng)。 一般是位于真核基因 5’ 側(cè)翼序列區(qū)，但也有的是位于轉(zhuǎn)錄區(qū)和 3’ 側(cè)翼序列區(qū)。 18. 真核基因的結(jié)構(gòu) （ 1）真核基因 DNA 序列水平的結(jié)構(gòu) :a. 啟動(dòng)子序列區(qū) b. 轉(zhuǎn)錄序列區(qū) c. 終止子序列區(qū) （ 2）真核基因 premRNA 的結(jié)構(gòu)： a. 5’ UTR 含子 d. 3’ UTR 序列 （ 3）真核基因成熟 mRNA 的結(jié)構(gòu)（五部分）： 真核蛋白質(zhì) mRNA 前體（ premRNA）經(jīng)過(guò)剪輯加工（去掉間隔子、加帽和加尾）成熟后，被輸送到細(xì)胞質(zhì)。 ：位于基因組蛋白質(zhì)編碼基因之間的非編碼的 DNA 序列中，只編 碼 RNA 不編碼蛋白質(zhì)的一類 RNA 基因，叫做隱蔽基因。以人為例，非編碼序列占基因組總長(zhǎng)的 98%以上，而蛋白質(zhì)編碼基因的序列還不到基因組總長(zhǎng)的 2%。而且有些高等植物還是多倍體，擁有多拷貝的基因組。 15. 真核基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： *； 真核基因組 DNA 不是裸露的，而是被包裝成若干條甚至數(shù)十條不同的染色體，這是真核基因組的一大特點(diǎn)。這是依細(xì)菌的生長(zhǎng)條件而定： a. 在營(yíng)養(yǎng)富裕的培養(yǎng)基中，每個(gè)細(xì)胞可同時(shí)擁有３～４條染色體分子。 c. 上游控制單元，包括操縱單元和啟動(dòng)區(qū) 。 操縱子的一般結(jié)構(gòu)： a. 一個(gè)或數(shù)個(gè)調(diào)節(jié)基因 b. 若干個(gè)結(jié)構(gòu)基因，小的操縱子只有三個(gè)基因。對(duì)基因組是如此，但對(duì)單個(gè)基因則不然。也就是說(shuō)基因組ＤＮＡ的兩條鏈，并沒(méi)有規(guī)定哪一條是正義鏈，哪一條是反義鏈。除了以Ｕ取代Ｔ之外，它與ＲＮＡ轉(zhuǎn)錄本具有同樣的核苷酸序列結(jié)構(gòu)。 現(xiàn)在的文獻(xiàn)： a. 雙鏈ＤＮＡ分子中轉(zhuǎn)錄ＲＮＡ轉(zhuǎn)錄本的模板鏈，叫做反義鏈或非編碼鏈，簡(jiǎn)稱（－）鏈。 （ 2）大腸桿菌基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) (有 4 點(diǎn) )： *１．高效的遺傳信息利用率 a. 既沒(méi)有不必要的額外重復(fù)序列，也極少存在無(wú)功能的冗余序列； b. 基因組９８％以上的核苷酸序列都是編碼基因 c. 基因排列緊湊，同一個(gè)操縱子不同基因之間的間隔距 離一般不超過(guò) ２０ bp，而且其中還存在著轉(zhuǎn)錄起始信號(hào)和終止信號(hào)； d. 存在著編碼序列彼此重疊、編碼不同蛋白質(zhì)的重疊基因 *2. 雙鏈ＤＮＡ的編碼功能 關(guān)于正義鏈和反義鏈的劃分，文獻(xiàn)中有兩種不同的意見(jiàn)： 早期文獻(xiàn)： a. 轉(zhuǎn)錄ＲＮＡ轉(zhuǎn)錄本的模板鏈，叫做正義鏈，也叫做有義鏈或編碼鏈，簡(jiǎn)稱（＋）鏈。 （ 2）終止區(qū)的意義 （功能） ： a. 保證基因的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在正確的位置終止； b. 產(chǎn)生正確長(zhǎng)度的 ｍＲＮＡ 分子； c. 產(chǎn)生正確的蛋白質(zhì)多肽鏈； d. 避免產(chǎn)生通讀現(xiàn)象。 終止子（ terminator），也叫做轉(zhuǎn)錄終止子或終止序列，是指位于真核基因３＇ 末端下游外側(cè)與轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)相連的一段非編碼的核苷酸序列區(qū)。 (3) 啟動(dòng)區(qū)的類型：根據(jù)識(shí)別啟動(dòng)子的ＲＮＡ聚合酶的類別，可將 真核啟動(dòng)子分成三種不同的類型： b.Ⅱ 型啟動(dòng)子 c.Ⅲ 型啟動(dòng)子 （１）終止區(qū)的定義：（ terminator region）也叫做終止序列，一般特指位于原核生物操縱子 ３ 39。例如有人也把增強(qiáng)子（ enhancer）歸為真核基因啟動(dòng)子的一個(gè)組成元件． (2) 啟動(dòng)區(qū)的結(jié)構(gòu) 原核基因啟動(dòng)區(qū)的結(jié)構(gòu)： a. －１０元件，亦叫－１０ box 或 Pribnow box，也可稱之為 TATAAT box； b. －３５元件，也叫做－３５ box，或ＴＴＧＡＣＡ box。側(cè)翼序列區(qū)泛稱為啟動(dòng)區(qū)。末端上