細(xì)菌內(nèi)毒素檢查相關(guān)問題(編輯修改稿)
2024-09-01 11:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ion, NIC），為后續(xù)的驗證試驗選擇適當(dāng)?shù)臉悠废♂尪龋ɑ驖舛龋２还懿捎媚z法還是光度法，預(yù)試驗都是對一系列樣品的稀釋液進(jìn)行試驗，在每一個稀釋濃度，都有一組添加內(nèi)毒素的樣品和一組不添加內(nèi)毒素的樣品，添加內(nèi)毒素的濃度保持不變，而樣品濃度會逐級稀釋，但最終樣品的稀釋倍數(shù)不得超過MVD。可以采用直接把內(nèi)毒素添加到樣品溶液中，添加內(nèi)毒素的體積宜小，以免導(dǎo)致樣品溶液被稀釋，一般添加體積等于或小于樣品體積的10%為宜；也可以采用下述方法添加內(nèi)毒素，就是將兩倍于終濃度的內(nèi)毒素溶液與兩倍于終濃度的樣品溶液等體積混合，內(nèi)毒素和樣品溶液間相互稀釋，得到兩者所需終濃度的混合液。添加內(nèi)毒素的濃度，凝膠法為2λ；終點顯色法為4λ（這里的λ表示標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低點，也就是方法的檢測限）。動態(tài)顯色法則有3種選擇添加內(nèi)毒素濃度的方法，可以選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線的中點濃度，也可以與終點比色法一樣，選擇4λ。此外，當(dāng)樣品稀釋液中，，當(dāng)樣品稀釋液中。對于凝膠法的結(jié)果判斷，不添加內(nèi)毒素的樣品不應(yīng)該凝集，如果發(fā)生凝集說明含有內(nèi)毒素或內(nèi)毒素樣物質(zhì)；添加有內(nèi)毒素的樣品應(yīng)該出現(xiàn)凝集，若沒有發(fā)生凝集表明樣品凝集反應(yīng)被抑制。光度法的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為，測得的添加內(nèi)毒素的量應(yīng)該在已知添加量的177。50%范圍內(nèi)，超出范圍（多或少）表明存在增強或抑制作用。通過預(yù)試驗結(jié)果可以確定驗證試驗中樣品的稀釋度或濃度，其選擇的基本原則包括：經(jīng)稀釋后的樣品含內(nèi)毒素的量應(yīng)盡可能少，比其內(nèi)毒素限值至少少4倍，最好檢測不到內(nèi)毒素。要求驗證試驗選擇的稀釋度至少要比NIC大12倍，但不可超過MVD。若樣品需要多支合并進(jìn)行驗證試驗，此時試驗不可采用原來的MVD，因為假定合并樣品中有一瓶存在污染，其它瓶沒有污染，污染瓶含有的內(nèi)毒素就會被其它沒有污染瓶樣品所稀釋，并低于MVD，從而檢測不到污染的樣品。因此，采用合并樣品進(jìn)行試驗時，MVD應(yīng)降低，這種情況下的MVD等于原來的MVD除以合并樣品的數(shù)量。例如：，樣品的MVD為100（倍）。預(yù)試驗結(jié)果表明樣品在1：8倍稀釋時，具有抑制作用，不干擾濃度（NIC）為1:16，可選擇用于驗證試驗的稀釋度或濃度為最低不小于1:32，可以選擇1:64。方法學(xué)驗證試驗（增強/抑制試驗）驗證試驗在細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)的建立過程中具有十分重要的作用，主要目的是確證檢測內(nèi)毒素的方法是否受樣品的干擾。驗證試驗的特點是樣品濃度保持不變，添加內(nèi)毒素的濃度逐漸降低。在建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法中，驗證試驗前，要去除樣品可能含有的內(nèi)毒素，以確保建立方法的準(zhǔn)確可靠。凝膠法的驗證試驗是通過在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品溶液中平行進(jìn)行鱟試劑標(biāo)示靈敏度的復(fù)核試驗完成，試驗中要求樣品平行4管，設(shè)立樣品陰性對照管，也同樣平行4管。盡管要求添加內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)平行管數(shù)量各國不完全一致，可以2管，也可以4管，但鑒于目前國內(nèi)的具體情況，在2005年版藥典附錄的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中規(guī)定是平行4管。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品溶液中的反
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