【文章內容簡介】 查可以為標本的直接藥敏試驗選擇藥敏紙片提供依據(jù)。、營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。血平板、巧克力平板盡量用兔、羊血制備，可明顯提高苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)陽性率。對雜菌多的標本要應用選擇性平板培養(yǎng)基，抑制雜菌提高分離陽性率。提高在特定平板上識別菌落的能力，以便正確鉤取鑒定菌落。分離平板中加上鑒定性紙片，如厭氧分離平板上加上滅菌滴靈紙片。菌種鑒定項目的選擇，程序安排，方法的改進，是大有潛力可挖。既不能要求鑒定項目多而全，也不能草率從事，馬馬虎虎，可進行以下幾個方面的改進。①應用細菌自動培養(yǎng)儀，抗菌藥物敏感測定儀，生化編碼鑒定管等成套鑒定系統(tǒng)。②選用一些對分離菌落直接鑒定的簡易試驗，如氧化酶、玻片凝集、過氧化氫、膽汁溶菌試驗等。③藥敏鑒定法的應用，隨著對細菌耐藥機理研究的不斷深入?？股孛舾性囼灲Y果與菌種間的相關性越來越密切。通過某些藥敏試驗結果可以修正或確認細菌鑒定，同樣，利用準確的菌種鑒定也可推測所試菌株的抗生素表型〔4〕。④鑒定項目的選擇，必須這關鍵性項目，可有可無，鑒別價值不大或僅供參考者不做，以免造成是是而非。直接鏡檢規(guī)定在2h內報告，結果寫入報告單內，即供參考。次晨(24h內)分離培養(yǎng)，初步鑒定，抗生素敏感試驗，細菌計數(shù)等結果，即可做最后報告；如有些項目不全，或尚需作補充實驗者，在次晨可作預報，補完后再做最后報告，一般不遲于3天（血培養(yǎng)除外）。檢驗單上注明有急癥的藥敏試驗報告，所有血培養(yǎng)，骨髓培養(yǎng)的陽性報告，腦脊液的顯微鏡檢查和培養(yǎng)的陽性結果，必須立即用電話報告病房和醫(yī)生[5]。隨著現(xiàn)代感染類型變化、疾病譜的變化、醫(yī)療行為的變化(免疫抑制劑的使用、侵入性操作的普及)、細菌耐藥性的變遷，毒力較弱的條件致病菌在醫(yī)院內感染所占的比重越來越大。細菌檢驗工作者對此要有足夠的以識。由上可知，改進的快速細菌檢驗方法在檢驗步驟方面表現(xiàn)為重點前移，如：①重視標本直接鏡檢；②強調做典型標本的直接藥敏試驗；③加強菌落識別技能；④多用分離菌落直接作鑒定試驗；⑤如標本中細菌單純可用標本材料直接作鑒定試驗等。使用這些手段，以期在最短時間內獲得檢出和鑒定細菌以及藥敏結果的最多信息，最大限度滿足臨床需要。這種快速檢驗方法的改進，不需特殊設備。在細菌室現(xiàn)有條件下即能展開，比較切實可行，不失為提高檢驗質量、縮短報告時間的一條路子，值得進一步研究。綜上所述，基層實驗室只有正視細菌學培養(yǎng)檢查存在的問題并采取必要的改進措施，以醫(yī)院能力建設和等級評審為契機，加強實驗室管理，防止和延緩耐藥性菌株的形成。參 考 文 獻[1]蒲會強，張永寧，胡亞蘭，[J].臨床誤診誤治，2002，15(6)：218.[2]侯淑英，[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2006,21(6)：47.[3]葉應嫵，王毓三，[M].第3版，南京南京大學出版社，2006,744.[4]張軍民，[J].臨床檢驗雜志，1999，17(6)：325.[5][M].第四軍醫(yī)大學，1996,178.[7]夏鐵安，[M].山東大學出版社，：目前，許多基層實驗室臨床細菌學培養(yǎng)檢查中仍沿用傳統(tǒng)的分類細菌學那一類方法，即采集標本——接種培養(yǎng)——純培養(yǎng)——鑒定——藥敏——報告。由于分類細菌學和臨床細菌學研究方法和目的有一定的差異。這種按步就班的做法，往往使取得的信息陳舊而失去助診的意義，已不能適應臨床的客觀需要應進行改進。當前基層實驗室細菌學培養(yǎng)檢查存在的主要問題。 被動采集標本造成培養(yǎng)率降低或被污染，使培養(yǎng)結果可靠性大打折扣。 方法學問題。 基層實驗室基本以手工法為主，多采用傳統(tǒng)分類細菌學檢查方法，因報告遲緩失去助診意義。 忽視標本的革蘭氏染色直接鏡檢，使許多有用信息被忽略。 盲目追求項目多而全或僅憑形態(tài)特點及菌落特征等數(shù)個鑒定項目即草率報告。 培養(yǎng)基選擇單一，致病菌檢出率低。 不重視做典型標本的直接藥敏試驗。 報告沒有時間規(guī)定無預報制度。 基層實驗室管理方面的問題 基層細菌室資金投入不足，設施落后，造成工作量不足。 實驗室工作人員缺乏技術培訓，知識更新滯后，致使藥敏方法選擇錯誤，藥敏紙片選擇不妥出現(xiàn)藥敏與臨床藥效不符。 血平板未用羊、兔血制備，而用分漿后的陳舊血球制備，造成營養(yǎng)要求嚴格的細菌如肺鏈、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌的培養(yǎng)陽性率降低。改進臨床細菌培養(yǎng)方法的建議 加強實驗室管理。 選用成套商品化培養(yǎng)基診斷試劑。 加強檢驗人員技術培訓。 盡量安排細菌室人員值夜班處理標本。，改革細菌標本留取模式。 細菌培養(yǎng)方法及改進建議。 堅持和加強標本的直接顯微鏡鏡檢檢查。 分離培養(yǎng)方法的改進。 鑒定項目選擇和方法的改進。 強調標本的直接藥敏試驗及有關試驗。由上可知，改進的快速細菌檢驗方法在檢驗步驟方面表現(xiàn)為 重點前移。如：1 重視標本直接鏡檢；2強調做典型標本的直接藥敏試驗；3 加強菌落識別技能；4 用分離菌落直接作鑒定試驗；5如標本中細菌單純可用標本直接作鑒定試驗，使用這些手段以期在最短時間內獲得檢出和鑒定細菌及藥敏的最多信息。這種快速檢驗方法的改進不需特殊設備，不失為提高檢驗質量，縮短報告時間的一條路子。主要作者：張永寧 男 職稱：主管檢驗師寶雞市中心醫(yī)院檢驗科 電話：***第五篇：實驗室常用的細菌作用及其選擇第一篇：JM109，DH5a，BL21這些感受態(tài)有何區(qū)別 1：DH5a菌株DH5a是一種常用于質?？寺〉木?。 DH5a在使用pUC系列質粒載體轉化時，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α－互補?？捎糜谒{白斑篩選鑒別重組菌株?；蛐停篎，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYAargF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk，mk+)，phoA，supE44，λ，thi1，gyrA96，relA12：BL21(DE3)菌株該菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體（如pET系列）的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達非毒性蛋白。基因型：F，ompT，hsdS（rBBmB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3)pLysS菌株該菌株含有質粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F，ompT hsdS（rBBmB－），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr4：JM109菌株該菌株在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13 phage載體進行轉染時，由于載體DNA產生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α－互補，從而顯示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株該菌株適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定遺傳。基因型：F，mcrAΔ(mrrhsd RMSmcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ(araleu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG6：HB101菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實驗基因型：supE44，hsdS20（rBmB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl5，mtl1，leuB6，thi1第二篇：JM110或 SCS110 大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一個胞嘧啶 C5位置上引入甲基。常用的菌株都會產生dam,dcm，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的內切酶說明中均有說明。大多數(shù)酶切位點的甲基化不影響切割，而有些會影響，如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列，以XbaI為例，只有在位點序列旁出現(xiàn)GA或TC，該XbaI位才會被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：（1）選用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA識別切割位點與MboI相同；但不受甲基化影響；（2）利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的制備， JM110和鏈霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者細胞內本就沒有甲基化酶，從這些細胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 JM110 要排除dam,dcm甲基化的影響，需要用特定的dam,dcm的菌株，如JM110如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產生的質粒，：各種感受態(tài)細胞的區(qū)別 用途 特征 Xl1Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR)thi1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rKmK+)。特點：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rBmB)λ(DE3 [lacI lacUV5T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。特點：該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的