【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 查可以為標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)選擇藥敏紙片提供依據(jù)。、營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。血平板、巧克力平板盡量用兔、羊血制備，可明顯提高苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)陽(yáng)性率。對(duì)雜菌多的標(biāo)本要應(yīng)用選擇性平板培養(yǎng)基，抑制雜菌提高分離陽(yáng)性率。提高在特定平板上識(shí)別菌落的能力，以便正確鉤取鑒定菌落。分離平板中加上鑒定性紙片，如厭氧分離平板上加上滅菌滴靈紙片。菌種鑒定項(xiàng)目的選擇，程序安排，方法的改進(jìn)，是大有潛力可挖。既不能要求鑒定項(xiàng)目多而全，也不能草率從事，馬馬虎虎，可進(jìn)行以下幾個(gè)方面的改進(jìn)。①應(yīng)用細(xì)菌自動(dòng)培養(yǎng)儀，抗菌藥物敏感測(cè)定儀，生化編碼鑒定管等成套鑒定系統(tǒng)。②選用一些對(duì)分離菌落直接鑒定的簡(jiǎn)易試驗(yàn)，如氧化酶、玻片凝集、過(guò)氧化氫、膽汁溶菌試驗(yàn)等。③藥敏鑒定法的應(yīng)用，隨著對(duì)細(xì)菌耐藥機(jī)理研究的不斷深入?？股孛舾性囼?yàn)結(jié)果與菌種間的相關(guān)性越來(lái)越密切。通過(guò)某些藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以修正或確認(rèn)細(xì)菌鑒定，同樣，利用準(zhǔn)確的菌種鑒定也可推測(cè)所試菌株的抗生素表型〔4〕。④鑒定項(xiàng)目的選擇，必須這關(guān)鍵性項(xiàng)目，可有可無(wú)，鑒別價(jià)值不大或僅供參考者不做，以免造成是是而非。直接鏡檢規(guī)定在2h內(nèi)報(bào)告，結(jié)果寫(xiě)入報(bào)告單內(nèi)，即供參考。次晨(24h內(nèi))分離培養(yǎng)，初步鑒定，抗生素敏感試驗(yàn)，細(xì)菌計(jì)數(shù)等結(jié)果，即可做最后報(bào)告；如有些項(xiàng)目不全，或尚需作補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)者，在次晨可作預(yù)報(bào)，補(bǔ)完后再做最后報(bào)告，一般不遲于3天（血培養(yǎng)除外）。檢驗(yàn)單上注明有急癥的藥敏試驗(yàn)報(bào)告，所有血培養(yǎng)，骨髓培養(yǎng)的陽(yáng)性報(bào)告，腦脊液的顯微鏡檢查和培養(yǎng)的陽(yáng)性結(jié)果，必須立即用電話報(bào)告病房和醫(yī)生[5]。隨著現(xiàn)代感染類型變化、疾病譜的變化、醫(yī)療行為的變化(免疫抑制劑的使用、侵入性操作的普及)、細(xì)菌耐藥性的變遷，毒力較弱的條件致病菌在醫(yī)院內(nèi)感染所占的比重越來(lái)越大。細(xì)菌檢驗(yàn)工作者對(duì)此要有足夠的以識(shí)。由上可知，改進(jìn)的快速細(xì)菌檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)步驟方面表現(xiàn)為重點(diǎn)前移，如：①重視標(biāo)本直接鏡檢；②強(qiáng)調(diào)做典型標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)；③加強(qiáng)菌落識(shí)別技能；④多用分離菌落直接作鑒定試驗(yàn)；⑤如標(biāo)本中細(xì)菌單純可用標(biāo)本材料直接作鑒定試驗(yàn)等。使用這些手段，以期在最短時(shí)間內(nèi)獲得檢出和鑒定細(xì)菌以及藥敏結(jié)果的最多信息，最大限度滿足臨床需要。這種快速檢驗(yàn)方法的改進(jìn)，不需特殊設(shè)備。在細(xì)菌室現(xiàn)有條件下即能展開(kāi)，比較切實(shí)可行，不失為提高檢驗(yàn)質(zhì)量、縮短報(bào)告時(shí)間的一條路子，值得進(jìn)一步研究。綜上所述，基層實(shí)驗(yàn)室只有正視細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)檢查存在的問(wèn)題并采取必要的改進(jìn)措施，以醫(yī)院能力建設(shè)和等級(jí)評(píng)審為契機(jī)，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理，防止和延緩耐藥性菌株的形成。參 考 文 獻(xiàn)[1]蒲會(huì)強(qiáng)，張永寧，胡亞蘭，[J].臨床誤診誤治，2002，15(6)：218.[2]侯淑英，[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006,21(6)：47.[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，[M].第3版，南京南京大學(xué)出版社，2006,744.[4]張軍民，[J].臨床檢驗(yàn)雜志，1999，17(6)：325.[5][M].第四軍醫(yī)大學(xué)，1996,178.[7]夏鐵安，[M].山東大學(xué)出版社，：目前，許多基層實(shí)驗(yàn)室臨床細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)檢查中仍沿用傳統(tǒng)的分類細(xì)菌學(xué)那一類方法，即采集標(biāo)本——接種培養(yǎng)——純培養(yǎng)——鑒定——藥敏——報(bào)告。由于分類細(xì)菌學(xué)和臨床細(xì)菌學(xué)研究方法和目的有一定的差異。這種按步就班的做法，往往使取得的信息陳舊而失去助診的意義，已不能適應(yīng)臨床的客觀需要應(yīng)進(jìn)行改進(jìn)。當(dāng)前基層實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)檢查存在的主要問(wèn)題。 被動(dòng)采集標(biāo)本造成培養(yǎng)率降低或被污染，使培養(yǎng)結(jié)果可靠性大打折扣。 方法學(xué)問(wèn)題。 基層實(shí)驗(yàn)室基本以手工法為主，多采用傳統(tǒng)分類細(xì)菌學(xué)檢查方法，因報(bào)告遲緩失去助診意義。 忽視標(biāo)本的革蘭氏染色直接鏡檢，使許多有用信息被忽略。 盲目追求項(xiàng)目多而全或僅憑形態(tài)特點(diǎn)及菌落特征等數(shù)個(gè)鑒定項(xiàng)目即草率報(bào)告。 培養(yǎng)基選擇單一，致病菌檢出率低。 不重視做典型標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)。 報(bào)告沒(méi)有時(shí)間規(guī)定無(wú)預(yù)報(bào)制度。 基層實(shí)驗(yàn)室管理方面的問(wèn)題 基層細(xì)菌室資金投入不足，設(shè)施落后，造成工作量不足。 實(shí)驗(yàn)室工作人員缺乏技術(shù)培訓(xùn)，知識(shí)更新滯后，致使藥敏方法選擇錯(cuò)誤，藥敏紙片選擇不妥出現(xiàn)藥敏與臨床藥效不符。 血平板未用羊、兔血制備，而用分漿后的陳舊血球制備，造成營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格的細(xì)菌如肺鏈、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌的培養(yǎng)陽(yáng)性率降低。改進(jìn)臨床細(xì)菌培養(yǎng)方法的建議 加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理。 選用成套商品化培養(yǎng)基診斷試劑。 加強(qiáng)檢驗(yàn)人員技術(shù)培訓(xùn)。 盡量安排細(xì)菌室人員值夜班處理標(biāo)本。，改革細(xì)菌標(biāo)本留取模式。 細(xì)菌培養(yǎng)方法及改進(jìn)建議。 堅(jiān)持和加強(qiáng)標(biāo)本的直接顯微鏡鏡檢檢查。 分離培養(yǎng)方法的改進(jìn)。 鑒定項(xiàng)目選擇和方法的改進(jìn)。 強(qiáng)調(diào)標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)及有關(guān)試驗(yàn)。由上可知，改進(jìn)的快速細(xì)菌檢驗(yàn)方法在檢驗(yàn)步驟方面表現(xiàn)為 重點(diǎn)前移。如：1 重視標(biāo)本直接鏡檢；2強(qiáng)調(diào)做典型標(biāo)本的直接藥敏試驗(yàn)；3 加強(qiáng)菌落識(shí)別技能；4 用分離菌落直接作鑒定試驗(yàn)；5如標(biāo)本中細(xì)菌單純可用標(biāo)本直接作鑒定試驗(yàn)，使用這些手段以期在最短時(shí)間內(nèi)獲得檢出和鑒定細(xì)菌及藥敏的最多信息。這種快速檢驗(yàn)方法的改進(jìn)不需特殊設(shè)備，不失為提高檢驗(yàn)質(zhì)量，縮短報(bào)告時(shí)間的一條路子。主要作者：張永寧 男 職稱：主管檢驗(yàn)師寶雞市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 電話：***第五篇：實(shí)驗(yàn)室常用的細(xì)菌作用及其選擇第一篇：JM109，DH5a，BL21這些感受態(tài)有何區(qū)別 1：DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍?DH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí)，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α－互補(bǔ)。可用于藍(lán)白斑篩選鑒別重組菌株?；蛐停篎，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYAargF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk，mk+)，phoA，supE44，λ，thi1，gyrA96，relA12：BL21(DE3)菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體（如pET系列）的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白?；蛐停篎，ompT，hsdS（rBBmB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3)pLysS菌株該菌株含有質(zhì)粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白?；蛐停篎，ompT hsdS（rBBmB－），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr4：JM109菌株該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進(jìn)行α－互補(bǔ)，從而顯示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳?；蛐停篎，mcrAΔ(mrrhsd RMSmcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ(araleu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG6：HB101菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型：supE44，hsdS20（rBmB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl5，mtl1，leuB6，thi1第二篇：JM110或 SCS110 大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一個(gè)胞嘧啶 C5位置上引入甲基。常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生dam,dcm，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割，而有些會(huì)影響，如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列，以XbaI為例，只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC，該XbaI位才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：（1）選用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與MboI相同；但不受甲基化影響；（2）利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備， JM110和鏈霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶，從這些細(xì)胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 JM110 要排除dam,dcm甲基化的影響，需要用特定的dam,dcm的菌株，如JM110如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒，：各種感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別 用途 特征 Xl1Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR)thi1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rKmK+)。特點(diǎn)：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質(zhì)粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rBmB)λ(DE3 [lacI lacUV5T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。特點(diǎn)：該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的