生工--分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(學(xué)生用20xx)(編輯修改稿)
2025-08-31 18:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 n。6. 12,000 r/min離心10 min，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的干凈離心管中。7. 向上清中加0. 6倍體積的異丙醇，混勻，室溫作用15 min ，12,000 r/min離心10 min 。8. 棄上清，用200ul70 %乙醇洗沉淀一次，倒扣在紙巾上涼干。9. 用50ul100 181。g/ml RNA酶的TE溶解沉淀，65℃作用30 min后，補(bǔ)加400ulTE。10. 加等體積酚氯仿異戊醇，反復(fù)顛倒混合，進(jìn)行抽提, 12,000 r/min離心10 min 。11. 重復(fù)10至兩相界面無蛋白出現(xiàn)，再用氯仿異戊醇抽提一次。12. 取上層水相，加2倍體積無水乙醇及十分之一倍體積的3 mol/L NaAc(pH5. 2)，混勻，20℃放置30min。12,000 r/min離心10 min；棄上清，用預(yù)冷的70 %乙醇洗沉淀一次，倒扣在紙巾上涼干，用30ulTE溶解沉淀，20℃存放備用。實(shí)驗(yàn)三 質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳定性及定量檢測[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯通過本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術(shù)。[實(shí)驗(yàn)原理]DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動(dòng)。由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極移動(dòng)。在一定的電場強(qiáng)度下，DAN的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即DNA分子本身的大小和構(gòu)型。具有不同的相對分子質(zhì)量的DNA片段泳動(dòng)速度不一樣，可進(jìn)行分離。DNA分子的遷移速度與相對分子質(zhì)量的對數(shù)值成反比關(guān)系。凝膠電泳不僅可以分離不同相對分子質(zhì)量的DNA，也可以分離相對分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的DNA分子。不同構(gòu)型的DNA分子遷移率不同。凝膠中的DNA可與熒光染料溴化乙錠(EB)結(jié)合，在紫外燈下可看到熒光條帶，籍此可分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。[儀器、材料與試劑]（一）儀器1. 水平電泳槽 2．電泳儀 3．紫外燈或凝膠成像儀（二）材料1. 冰醋酸2. 三羥甲基氨基甲烷（Tris）3. 乙二胺四乙酸（EDTA）4. 溴酚蘭5. 瓊脂糖7. 甘油8. DNA染料9. 吸頭、小離心管（三）試劑6DNA電泳加樣緩沖液：甘油 30% 溴酚藍(lán) 0. 25%TrisCl(pH8. 0)
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