【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 膏蕈堿的敏感性。P69酶 細(xì)胞內(nèi)定位 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 相對(duì)活性 敏感程度6 / 12DNApolyaseⅠ 核仁 rRNA 50～70％ －DNApolyaseⅡ 核質(zhì) hnRNA 20～40％ ＋DNApolyaseⅢ 核質(zhì) tRNA ≈10％ 存在物種特異三種聚合酶中有兩個(gè)行對(duì)分子量超過 1105的大亞基；同種生物 3類聚合酶有“共享”小亞基的傾向。線粒體和葉綠體 RNA聚合酶活性不受 α－鵝膏蕈堿所抑制。24 試述轉(zhuǎn)錄的基本過程。P66模板識(shí)別：RNA 聚合酶與啟動(dòng)子區(qū)相互結(jié)合。轉(zhuǎn)錄起始前，啟動(dòng)子附近的 DNA雙鏈會(huì)分開形成轉(zhuǎn)錄泡，促使底物 NTP，與模板 DNA配對(duì)。轉(zhuǎn)錄起始：RNA 上第二個(gè)核苷酸鍵的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)錄起始后直到形成 9個(gè)核苷酸短鏈?zhǔn)雇ㄟ^啟動(dòng)子階段，轉(zhuǎn)錄開始進(jìn)入正常的延伸階段。轉(zhuǎn)錄的延伸：RNA 聚合酶離開啟動(dòng)子，沿 DNA鏈移動(dòng)，DNA 雙鏈持續(xù)解開，新生 RNA鏈以DNA為模板不斷在 3’端延長(zhǎng)，在接連區(qū)形成 DNARNA雜合物。在解鏈區(qū)后面，DFNA 模板鏈與原先配對(duì)的非模板鏈重新結(jié)合成雙螺旋。轉(zhuǎn)錄終止：延伸到終止位點(diǎn)時(shí)，RNApolyase 不再形成新的磷酸二酯鍵，RNADNA 雜合物分離，轉(zhuǎn)錄泡瓦解，DNA 恢復(fù)雙鏈，RNA 被釋放。25 何謂增強(qiáng)子其作用機(jī)制和特點(diǎn)是什么？增強(qiáng)子：能強(qiáng)化轉(zhuǎn)錄起始的序列為增強(qiáng)子或強(qiáng)化子。機(jī)理：可能通過影響染色質(zhì) DNA－蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或改變超螺旋的密度而改變模板的整體結(jié)構(gòu)，從而使得 RNA聚合酶更容易與模板結(jié)合，起始基因轉(zhuǎn)錄。特點(diǎn)：72bp，起始位點(diǎn)約 200bp處。 保留或?qū)⒅逶?DNA任何部分，都能保持基因的正常轉(zhuǎn)錄。26 真核生物的啟動(dòng)子區(qū)的主要結(jié)構(gòu)特征是什么？各部分的作用如何？（原核生物：－10bpTATA 區(qū) －35bpTTGACA 區(qū)）真核生物：－25～30bpTATA 區(qū)，－70～－78bpCAAT 區(qū)，GC 區(qū)上游啟動(dòng)子原件 UPE或上游激活序列 UASTATA區(qū)：使轉(zhuǎn)錄精確地開始，提供結(jié)合位點(diǎn)。CAAT區(qū)：控制轉(zhuǎn)錄起始的頻率，基本不參加起始位點(diǎn)的確定。GC區(qū)同上27 原核生物與真核生物 mRNA的特征主要表現(xiàn)在什么地方？單順反子：只編碼一個(gè)蛋白質(zhì)的 mRNA稱為單順反子。多順反子：編碼多個(gè)蛋白質(zhì)的 mRNA。原核 真核mRNA 半衰期短，細(xì)菌的轉(zhuǎn)錄和翻譯是緊密相連的，一旦轉(zhuǎn)錄開始，核糖體就結(jié)合到mRNA5’端啟動(dòng)蛋白結(jié)合，當(dāng)一個(gè) mRNA5’開始降解時(shí)，3’可能仍在合成或被翻譯。5’端存在“帽子”結(jié)構(gòu)，一般以為是GTP與原 mDNA5’ATP，GTP 縮合反應(yīng)物。mRNA帽子常被甲基化；帽子結(jié)構(gòu)可能使mRNA免受核酸酶破壞。以多順反子形式存在，對(duì)于第一個(gè)順反子來(lái)說(shuō)，一旦 mRNA5’被合成，翻譯起始位點(diǎn)即可與核糖體相結(jié)合，而后面幾個(gè)順反子翻譯的起始就會(huì)受上游順反子結(jié)構(gòu)的調(diào)控。mRNA可分為：①編碼區(qū)②位于 AUG之前 5’端上游非編碼區(qū)③終止密碼之后不翻譯的3’端下游非編碼區(qū)。具有 poly（A）尾巴（絕大多數(shù)） ，使mRNA由細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)所必需的形式，大大提高了 mRNA在細(xì)胞質(zhì)中的穩(wěn)定性。原核 mRNA5’端無(wú)帽子結(jié)構(gòu)，3’端無(wú)poly(A)或只有較短的 poly(A)幾乎都是單順反子，通過 RNA聚合酶Ⅱ進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。7 / 12常以 AUG，有時(shí)以 GUG，UUG 作為起始密碼子。相對(duì)分子量較大的前體 RNA出現(xiàn)在核內(nèi)，只有成熟的，相對(duì)分子量明顯變小并經(jīng)過化學(xué)修飾的 mRNA才進(jìn)入胞質(zhì)。永遠(yuǎn)以 AUG作為起始。28 DNA甲基化狀態(tài)可能調(diào)節(jié) DNA復(fù)制的機(jī)理如何？P250DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA 構(gòu)象、DNA 穩(wěn)定性及 DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達(dá)。DNA 甲基化主要形成 5－甲基胞嘧啶（5－mC）和少量的 N6－甲基腺嘌呤（N 6－mA）及 7－甲基鳥嘌呤（7－mG） 。在真核生物中，5－甲基胞嘧啶主要出現(xiàn)在 CpG序列、CpXpG、CCA/TGG 和 GATC中。DNA甲基化抑制基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)理：DNA甲基化導(dǎo)致某些區(qū)域 DNA構(gòu)象變化，從而影響了蛋白質(zhì)與 DNA的相互作用，抑制了轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)區(qū) DNA的結(jié)合效率。研究表明，當(dāng)組蛋白 H1與含 CCGG序列的甲基化或非甲基化 DNA分別形成復(fù)合體時(shí)，DNA 的構(gòu)型存在著很大的差別，甲基化達(dá)到一定程度時(shí)會(huì)發(fā)生從常規(guī)的 BDNA向 ZDNA的過渡。由于 ZDNA結(jié)構(gòu)收縮，螺旋加深，使許多蛋白質(zhì)因子賴以結(jié)合的元件縮入大溝而不利于基因轉(zhuǎn)錄的起始。5－甲基胞嘧啶在 DNA上并不是隨機(jī)分布的，基因的 5’端和 3’端往往富含甲基化位點(diǎn)，而啟動(dòng)區(qū) DNA分子上的甲基化密度與基因轉(zhuǎn)錄受抑制的程度密切相關(guān)。對(duì)于弱啟動(dòng)子來(lái)說(shuō)，稀少的甲基化就能使其完全失去轉(zhuǎn)錄活性。當(dāng)這一類啟動(dòng)子被增強(qiáng)時(shí)（帶有增強(qiáng)子） ，既使不去甲基化也可以恢復(fù)其轉(zhuǎn)錄活性。若進(jìn)一步提高甲基化密度，即使增強(qiáng)后的啟動(dòng)子仍無(wú)轉(zhuǎn)錄活性。因?yàn)榧谆瘜?duì)轉(zhuǎn)錄的抑制強(qiáng)度與 MeCP1結(jié)合 DNA的能力成正相關(guān)，甲基化CpG的密度和啟動(dòng)子強(qiáng)度之間的平衡決定了該啟動(dòng)子是否具有轉(zhuǎn)錄活性。DNA的甲基化還提高了該位點(diǎn)的突變頻率。真核生物中 5－mC 主要出現(xiàn)在 5’－CpG－3’序列中，5－mC 脫氨后生成的胸腺嘧啶，不易被識(shí)別和矯正。因此，特定部位的 5－mC 脫氨反應(yīng)，將在 DNA分子中引入可遺傳的轉(zhuǎn)化（C－T） ，若位點(diǎn)突變發(fā)生在 DNA功能區(qū)域，就可能造成基因表達(dá)的紊亂。由于 CpG甲基化增加了胞嘧啶殘基突變的可能性，5－mC 也作為內(nèi)源性誘變劑或致癌因子調(diào)節(jié)基因表達(dá)。29 DNA轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)制是什么？終止子：能提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的 DNA序列。終止因子：協(xié)助 RNA聚合酶識(shí)別終止信號(hào)的蛋白因子。不依賴 ρ 因子的終止 終止位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含 GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 RNA易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)；終止位點(diǎn)前有一端由 4～8 個(gè) A組成的序列，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的 3’端的寡聚 U。 新生 DNA中的發(fā)卡結(jié)構(gòu)會(huì)導(dǎo)致 RNA聚合酶的暫停，破壞 RNADNA雜合鏈 5’端的正常結(jié)構(gòu)；寡聚 U使雜合鏈的 3’部分出現(xiàn)不穩(wěn)定 rU?da區(qū)域。兩者共同作用使 RNA從三元復(fù)合物中解離出來(lái)。終止效率與二重對(duì)稱序列和寡聚 U的長(zhǎng)短有關(guān)。依賴 ρ 因子的終止 無(wú) GC二重對(duì)稱序列及寡聚 U ρ 因子使一個(gè)相對(duì)分子量 105六聚體蛋白，是一種 NTP水解酶。RNA 合成起始后，ρ 因子即附著在新生的 RNA鏈上，靠 ATP水解能量，沿 5’?3’朝 RNA聚合酶移動(dòng)，到達(dá)RNA的 3’－OH 端后取代了暫停在終點(diǎn)位上的 RNA聚合酶，使之從模板 DNA釋放 nRNA，完成轉(zhuǎn)錄。30 RNA的 I、Ⅱ內(nèi)含子的剪切機(jī)制是什么？它與 mRNA內(nèi)含子剪切作用機(jī)制有什么不同？P9192mRNA前體中主要（GUAG 類）和次要（AUAC 類）內(nèi)含子的剪接方式不同的是Ⅰ、Ⅱ類內(nèi)含子，因?yàn)閹в羞@些內(nèi)含子的 RNA本身具有催化活性，能進(jìn)行內(nèi)含子的自我剪接。Ⅰ型：鳥苷或鳥苷酸的 3’－OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 5’端磷酸二酯鍵，從上游切開 DNA鏈；8 / 12再由上游外顯子（第一個(gè)）的自由 3’－OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 3’核苷酸的磷酸二酯鍵，使內(nèi)含子被完全切開（不發(fā)生水解，無(wú)需供能） ；上下游兩個(gè)外顯子通過新的磷酸二酯鍵相連。Ⅱ型：內(nèi)含子本身的某個(gè)腺苷酸 2’－OH 作為親核基團(tuán)攻擊 5’端的磷酸二酯鍵，從上游切開 RNA鏈后形成套索狀結(jié)構(gòu)；再由上游外顯子的自由 3’－OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 3’位核苷酸上的磷酸二酯鍵，使內(nèi)含子被完全切開；上下游兩個(gè)外顯子通過新的磷酸二酯鍵相連。mRNA：