分子生物學(xué)實驗(編輯修改稿)
2025-01-19 15:14 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ? 通過回收純化后利用 T載體等克隆并轉(zhuǎn)化細菌? 鋪板培養(yǎng)后通過藍白斑，原位裂解雜交分離出含有目標(biāo)質(zhì)粒的單個菌落對于通過 PCR技術(shù)獲得的目標(biāo)基因PCR或 RACE電泳凝膠成像系統(tǒng) 長波紫外觀察箱切膠膠回收試劑盒T載體、平末端載體轉(zhuǎn)化細菌并鋪板培養(yǎng)篩選目標(biāo)菌落提取目標(biāo)質(zhì)粒對于通過 PCR技術(shù)獲得的目標(biāo)基因PCR或 RACE瓊脂水平電泳凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈 長波紫外觀察箱PCR回收試劑盒 膠回收試劑盒PCR儀電泳儀器恒溫水浴鍋、離心機Taq酶、薄壁管、礦物油瓊脂糖對于通過 PCR技術(shù)獲得的目標(biāo)基因（續(xù)）純化產(chǎn)物PCR產(chǎn)物測序 T載體、平末端載體連接細菌轉(zhuǎn)化、鋪板培養(yǎng)藍白斑篩選、菌落原位雜交質(zhì)粒提取、酶切分析、測序測序儀 低溫冰箱雜交箱、恒溫搖床、低溫冰箱超凈工作臺、電轉(zhuǎn)化儀離心機、恒溫水浴鍋感受態(tài)細胞、培養(yǎng)基、抗生素Xgal、 IPTG、尼龍膜和探針限制性內(nèi)切酶質(zhì)粒提取、分析? 常規(guī)質(zhì)粒提取方法：通過細菌的適當(dāng)裂解釋放出質(zhì)粒，利用酚和氯仿抽提掉蛋白，再利用無水乙醇沉淀質(zhì)粒 DNA? 質(zhì)粒提取試劑盒：裂解方法一致。裂解完成后利用過濾柱純化出質(zhì)粒 DNA? 質(zhì)粒提取后，根據(jù)以后實驗要求利用不同的限制性內(nèi)切酶在水浴鍋中進行酶切? 電泳，用凝膠成像系統(tǒng)分析? 測序水稻基因組 DNA的提取、純化和分析? 利用 SDS法或 Qiagen提供的基因組提取試劑盒提取水稻基因組 DNA：利用 SDS在高鉀離子濃度的情況下能沉淀蛋白和多糖等雜質(zhì)的原理提取基因組 DNA? 利用酚 氯仿抽提或過濾柱純化基因組 DNA? 水稻基因組文庫的構(gòu)建? 利用特異的探針，通過 Southern blotting檢
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