生化及分子生物學(xué)大實(shí)驗(yàn)(編輯修改稿)
2025-05-01 23:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 少引起敏感的生物化學(xué)物質(zhì)的變性和吸附。瓊脂糖凝膠電泳是實(shí)驗(yàn)室中最早得到廣泛應(yīng)用的凝膠電泳，是分離鑒定核酸的常規(guī)方法。因?yàn)樗哂幸韵聝?yōu)點(diǎn)：1）%%，在這種凝膠中電泳，近似自由界面電泳，但是樣品的擴(kuò)散度比自由電泳??；2）瓊脂糖凝膠電泳支持物均勻，電泳區(qū)帶整齊，分辨率高，重復(fù)性好；3）液相與固相界面無明顯界限，電泳速度快；4）瓊脂糖凝膠透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測(cè)儀作定量測(cè)定；5）區(qū)帶易染色，樣品易回收。核酸分子在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。分子大小不同的核酸分子具有各異的電泳遷移率，而在電泳后處于凝膠的不同位置。影響其電泳遷移率的因素包括電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。前者由分子所帶的凈電荷多少而定，這與電泳時(shí)電流強(qiáng)度、電泳緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度有關(guān)；而后者主要與核酸分子大小和其構(gòu)象以及所用瓊脂糖凝膠的濃度有關(guān)。實(shí)驗(yàn)試劑與器材 2分鐘 液氮罐、陶瓷研缽、冷凍高速離心機(jī)、恒溫水浴器、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、紫外線透射儀、吸頭、乳膠手套、紫外分光光度計(jì)、電泳儀、水平式電泳槽、微波爐、Eppendorf微量離心管、微量加樣器（pipetman）、三角燒瓶、燒杯、量筒?？俁NA提取試劑盒（TRIzol TM試劑）、%焦碳酸二乙酯(DEPC)、75%乙醇、氯仿、異丙醇、無水乙醇、瓊脂糖、10mg/ml EB溶液、 5TBE電泳緩沖液（ mol/L Tris、 mol/L EDTANa mol/L硼酸，）、溴酚藍(lán)指示劑（%溴酚藍(lán)、50%甘油）、DNA marker。實(shí)驗(yàn)步驟講解： 5分鐘216。組織總RNA的提取把液氮凍存的組織放到冰凍的碾缽中碾碎，加入適量的Trizol 試劑（1mL/100mg組織）裂解組織，冰上放置5 min。，加入氯仿()，冰上放置5 min。10 000g離心10 min，吸取上清于另一離心管，加入等體積的異丙醇，室溫放置10 min。10 000g離心15 min，去上清，70%乙醇洗滌沉淀，室溫風(fēng)干，加DEPC處理的雙蒸水(1520 μL)溶解?？偨Y(jié) 2分鐘教學(xué)重點(diǎn)及難點(diǎn)：如何獲得高質(zhì)量的總RNA。教學(xué)方法： 啟發(fā)式教學(xué)，結(jié)合理論，對(duì)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行分析并給于適當(dāng)示范。教學(xué)手段（掛圖、幻燈、多媒體…等）：板書，PPT。使用的教材及參考資料：《現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》，熊大勝 主編，中南大學(xué)出版社，2005《分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》，魏群 主編，高等教育出版社，2006《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》（ 第三版） J. 薩姆布魯克 等著 金冬雁、黎孟楓等譯 科學(xué)出版社 1999思考題： 比較核酸濃度測(cè)定的幾種方法。 在RNA提取過程中應(yīng)該注意事項(xiàng)？本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗(yàn)、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等） 結(jié)合理論內(nèi)容講述實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，采用開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)，效果較好。 強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。實(shí)驗(yàn)22 半定量RTPCR檢測(cè)基因的表達(dá)差異（設(shè)計(jì)、創(chuàng)新）授課題目：半定量RTPCR檢測(cè)基因的表達(dá)差異（設(shè)計(jì)、創(chuàng)新）（9學(xué)時(shí)）授課對(duì)象：生科專業(yè)授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求：培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)和創(chuàng)新能力。在任課教師的指導(dǎo)下，查閱資料，選題，開題，實(shí)施實(shí)驗(yàn)，最后以小論文的形式總結(jié)實(shí)驗(yàn)。學(xué)習(xí)基因特異性引物的設(shè)計(jì)。學(xué)習(xí)和掌握RTPCR的原理和方法。學(xué)習(xí)和掌握用半定量RTPCR對(duì)基因表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量的原理和方法。采用開放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)。教學(xué)內(nèi)容提要及時(shí)間分配：實(shí)驗(yàn)講解： 216。查閱資料及選題 10分鐘216。擬定實(shí)驗(yàn)提綱
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