分子生物學(xué)試卷(編輯修改稿)
2025-05-01 23:13 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 中常見的主要工具酶：酶類功能限制性內(nèi)切酶識別并在特定位點切開DNADNA連接酶通過磷酸二酯鍵把兩個或多個DNA片段連接成一個DNA分子反轉(zhuǎn)錄酶按照RNA分子中的堿基序列，根據(jù)堿基互補(bǔ)原則合成DNA鏈堿性磷酸酶切除位于DNA鏈末端的磷酸基團(tuán)DNA聚合酶按539。到339。方向合成新鏈DNA多核苷酸激酶把磷酸基團(tuán)加到多聚核苷酸鏈的539。OH末端（進(jìn)行末端標(biāo)記實驗或用來進(jìn)行DNA的連接末端轉(zhuǎn)移酶在雙鏈核酸的3‘末端加上多聚或單核苷酸2. 比較說明Southern blotting, Northern blotting, 和 western blotting有何異同All three techniques are used to transfer molecules that have been separated by gel electrophoresis from the gel to a membrane for further analysis (such as hybridization of a probe to detect a specific DNA sequence). Southern blotting transfers DNA, northern blotting transfers RNA, and western blotting transfers proteins。3. 說出藍(lán)白斑篩選的分子機(jī)制藍(lán)白斑篩選是重組子篩選的一種方法： 是根據(jù)載體的遺傳特征篩選重組子，如α互補(bǔ)、抗生素基因等?，F(xiàn)在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區(qū)段，其中有β半乳糖苷酶基因（lacZ）的調(diào)控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點（MCS），它并不破壞讀框，但可使少數(shù)幾個氨基酸插入到β半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用于可編碼β半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細(xì)胞。因此，宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細(xì)胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實現(xiàn)了互補(bǔ)，稱為α互補(bǔ)。由α互補(bǔ)而產(chǎn)生的LacZ+細(xì)菌在誘導(dǎo)劑IPTG的作用下，在生色底物XGal存在時產(chǎn)生藍(lán)色菌落，因而易于識別。然而，當(dāng)外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點后，幾乎不可避免地導(dǎo)致無α互補(bǔ)能力的氨基端片段，使得帶有重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍(lán)白斑篩選
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