天然藥物有效成分提取分離技術(shù)(研)doc(編輯修改稿)
2025-08-11 05:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ；羧酸類化合物PKa值約為5。因而PH3以下，大部分酸性物質(zhì)將以非解離形式(HA)存在，易分配于有機(jī)溶劑中，而PH12以上時(shí)，則將以解離形式(A)存在，易分配于水中。同理，對(duì)堿性物質(zhì)(B)，其堿性強(qiáng)弱可用其共軛酸(BH+)的解離常數(shù)Ka或PKa值表示。 Ka越小，堿性越強(qiáng)；PKa越大，堿性越強(qiáng)。一般PH3時(shí)，酸性物質(zhì)多呈非解離狀態(tài)(HA)，堿性物質(zhì)則呈解離狀態(tài)(BH+)，但PH12，則酸性物質(zhì)呈解離狀態(tài)(A)，堿性物質(zhì)則呈非解離狀態(tài)(B)存在。據(jù)此，可利用PH值的不同將酸、堿物質(zhì)分開。三、層析法 Chromatography層析技術(shù)目前已廣泛應(yīng)用于各種化合物的分離分析，發(fā)展很快，它已成為化學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可缺少的分析分離手段。層析法是一種使不同分子相互分離的過程，當(dāng)一混樣品被導(dǎo)入一固定相的支持體中，而另一流體（移動(dòng)相）通過時(shí)，由于樣品各組分與固定相和移動(dòng)相相互作用的大小不同，使用權(quán)各組分通過固定相支持體的速成率不同而得到期分離。按其操作方法，在柱上進(jìn)行稱為柱層析；在薄層上進(jìn)行稱為薄層層析；在紙上進(jìn)行稱為紙層析。層析法按分離原理可分為⑴吸附層析（利用吸附劑對(duì)樣品吸附能力的差別進(jìn)行分離）；⑵分配層析（利用樣品組分在二種不相互溶的溶劑中分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離）；⑶離子交換層析（利用樣品組分在離子交換樹脂上交換能力大小不同進(jìn)行分離）；⑷凝膠層析（利用分子篩分離物質(zhì)的一種方法）。(一)薄層層析：薄層層析是50年代初發(fā)展起來的一種新型、快速、簡單、高效的層析法。薄層層析的操作方法是將吸附劑均勻地鋪在玻璃板上，把欲分析的樣品點(diǎn)加到薄層上，然后用合適的溶劑展開而達(dá)到分離、鑒定和定量的目的，因?yàn)獒鍪窃诒由线M(jìn)行，所以稱它為薄層層析。薄層層析在天然藥物化學(xué)中應(yīng)用：⑴天然藥物化學(xué)成分的予試驗(yàn)；⑵中藥中已知有效成分的鑒定（須用已知標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌愤M(jìn)行對(duì)照）；⑶分離得到的有效成分或單體的純度判斷；⑷小量樣品的制備；⑸探索柱層析分離的條件。薄層層析優(yōu)點(diǎn)：⑴價(jià)廉、設(shè)備簡單、易于操作；⑵展開時(shí)間短，一般只須數(shù)分鐘到期數(shù)十分鐘；⑶斑點(diǎn)擴(kuò)散小，檢出靈敏度高；⑷分離情況受溫度影響?。虎煽梢允褂酶g性試劑。薄層層析缺點(diǎn)：⑴Rf值重現(xiàn)性差（因此，為了克服這一缺點(diǎn)，通常將標(biāo)準(zhǔn)品與樣品在同一薄層板上同時(shí)層析）；⑵用大的薄層板展開時(shí)，容易出現(xiàn)邊緣效應(yīng)；⑶色譜圖不易保存。吸附劑的選擇國內(nèi)常用的吸附劑有硅膠、聚酰胺和纖維素。氧化鋁已經(jīng)不常用。其中硅膠由于它們的吸附性能良好，適用于各類化合物的分離，應(yīng)用最廣。硅膠商品常見的有以下幾種⑴硅膠G： 粘合劑為石膏（Gypsum）；⑵硅膠H：不含石膏和其它有機(jī)粘合劑；⑶硅膠HF254：不含粘合劑，但含有一種無機(jī)熒光劑。薄層的制備 薄層板常分為軟板和硬板兩種，軟板常用5180。20cm的玻璃板；180。，根據(jù)薄層的厚度在玻璃管兩端繞幾圈膠布。把吸附劑倒在玻璃板上，用玻璃管將吸附劑順一個(gè)方向推動(dòng)，即成薄層。硬板的制備是用stahl涂布器或手工方法鋪板。國內(nèi)一般都采用手工方法鋪板。鋪板注意事項(xiàng)： ⑴用蒸餾水調(diào)制吸附劑時(shí)，有時(shí)為了把氣泡趕盡，可加12滴乙醇消泡；⑵國內(nèi)產(chǎn)硅膠G 中的石膏經(jīng)常不起粘合作用，因此，常用2‰的CMCNa溶液調(diào)硅膠G制成硬板。薄層層析操作方法參見其它專著。 薄層層析操作注意事項(xiàng)： ⑴，樣品原點(diǎn)的直徑要小(23mm)，如一次點(diǎn)樣量不夠，可在溶劑揮發(fā)后重復(fù)點(diǎn)樣；⑵樣品量要適中。樣品量太少時(shí)，樣品中含量少的成分不易檢出，但樣品量太多會(huì)形成斑點(diǎn)過大互相交叉或拖尾而不能達(dá)到很好的分離；⑶被檢樣品用合適的溶劑溶解(盡量避免用水、甲醇)，但有時(shí)樣品只能用水、甲醇作溶劑時(shí)，點(diǎn)樣時(shí)，要注意斑點(diǎn)的擴(kuò)散(每次點(diǎn)樣量要小，點(diǎn)樣后可采用電吹風(fēng)吹干或在水浴鍋上加熱揮干后，再重復(fù)點(diǎn)樣)，點(diǎn)樣完畢后，也要將水和甲醇揮去以后，才能進(jìn)行展開，否則得不到較好的分離效果(原因：水和甲醇會(huì)改變展開劑極性；展開劑多為有機(jī)溶劑，由于水和展開劑互不相溶，展開劑展開時(shí)開始會(huì)繞著原點(diǎn)展開)。⑷點(diǎn)樣時(shí)避免將固體物質(zhì)點(diǎn)到薄層上，否則，當(dāng)展開劑 時(shí)樣品邊溶解，邊移動(dòng)，形成嚴(yán)重拖尾，組分交叉重疊，達(dá)不到分離目的。⑸有些展開劑中因含有水，有時(shí)可能會(huì)分層，此時(shí)一定要將水分去后，方能展開，否則層析失敗，觀察不到很好的斑點(diǎn)。 展開劑 層析過程中溶劑的選擇對(duì)組分分離關(guān)系極大。在國內(nèi)，可供選擇的吸附劑種類不多，而展開劑的種類很多，不僅可用單一溶劑，而且常用各種配比的混合溶劑。因此，在進(jìn)行薄層層析時(shí)，選擇展開劑比選擇吸附劑要復(fù)雜的多。 選擇展開劑時(shí)，在吸附薄層上，主要是考慮展開劑的極性；被分離物質(zhì)在展開劑中的溶解度；在分配薄層上，根據(jù)被分離物質(zhì)在兩相溶劑中的溶解度來選擇。這
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