【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 5．大黃素3D葡萄糖苷（Anthraglycoside B）:淺黃色針晶（稀乙醇中結(jié)晶含1分子水mp190191℃。6．白藜蘆醇（Resveratrol）：無(wú)色針狀結(jié)晶，mp256257℃，216℃升華，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。7．白藜蘆醇葡萄糖苷（polydotinpeceid）：無(wú)色顆粒狀結(jié)晶，雙熔點(diǎn)分別為130140℃225～226℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、熱水，可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸鈉和氫氧化鈉水溶液中，稍溶于冷水，難溶于乙醚。8．β谷甾醇9．鞣質(zhì)：屬縮合鞣質(zhì)，可溶于醇及水，不溶于苯、乙醚、氯仿等。另外?；⒄热~、莖中含少量羥基蒽醌類化合物、有機(jī)酸、槲皮苷、異槲皮苷、虎杖黃酮苷、扁蓄苷、金絲桃苷及蕓苷、Vtio等。二、實(shí)驗(yàn)原理：羥基醌類化合物及二苯乙烯類成分，均可溶于乙醇中，故可用乙醇將它們?nèi)〕鰜?lái)。羥基蒽醌類易溶于乙醚等弱極性溶劑，白藜蘆醇苷在乙醚中溶解度很小，利用它們對(duì)乙醚的溶解性差異使羥基蒽醌類與白藜蘆醇苷分離，再利用各羥基蒽醌類結(jié)構(gòu)上的不同所表現(xiàn)酸性不同，用PH梯度萃取法分離它們。三、實(shí)驗(yàn)方法：（一）提取乙醇總提取物的制備：取虎杖粗粉200g，于1000ml圓底燒瓶中回流，第一次加500ml乙醇回流一小時(shí)，第二次加300ml乙醇回流30分鐘，第三次加250ml乙醇回流30分鐘，合并三次乙醇提取液，放置，如有沉淀可過(guò)濾一次，濾液減壓回收乙醇至干，得膏狀物。（二）分離1．親脂性成分與親水性成分的分離：將上述膏狀物加水10ml，乙醚100ml充分振搖后放置，將乙醚液傾于500ml三角瓶中（水層不可倒出），再于燒瓶中加50ml乙醚振搖，放置，傾出乙醚液，同法操作六次，合并乙醚液即為親脂性成分——總游離蒽醌，乙醚提取過(guò)的剩余物中含水溶性成分。2．游離蒽醌分離：（1）強(qiáng)酸性成分的分高：將上述含總游離蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中，加5%碳酸氫鈉水溶液40ml萃取（測(cè)5%碳酸氫鈉PH值），放置使充分分層，若提取過(guò)程中乙醚揮發(fā)可補(bǔ)充，分出堿水溶液同法提取二次，合并堿水提取液，在攪拌下緩緩滴加6N鹽酸調(diào)至pH2注意觀察顏色變化，稍放置即可析出沉淀，抽濾，用水洗滌沉淀中性，將沉淀置表面器上干燥，得強(qiáng)酸性成分。（2）中等酸性成分——大黃素的分離：碳酸氫鈉萃取過(guò)的乙醚液用5%碳酸鈉溶液（測(cè)5%碳酸鈉水溶液的pH值）萃取5～9次，每次40ml，直至萃取液較淺為止。合并碳酸鈉提取液，小心加鹽酸調(diào)pH3，放置，抽濾，水洗沉淀至中性，抽干，干燥稱重。以甲醇一氯仿或苯一氯仿（1：1）重結(jié)晶，得大黃酚和大黃素6甲醚混合物。注：大黃酚和大黃素6甲醚二者相互分離比較困難，在本實(shí)驗(yàn)薄層條件下為同一斑點(diǎn)，可用層析用磷酸氫鈣進(jìn)行柱層析，以石油醚洗脫，下層黃色帶洗脫后，以甲醇重結(jié)晶可得大黃酚，上層黃色帶洗脫后以甲醇重結(jié)晶可得大黃素6甲醚。（3）中性成分——甾醇類化合物分離：氫氧化鈉萃取過(guò)的乙醚液，用水洗至中性，以無(wú)水硫酸鈉脫水，回收乙醚得殘留物，以甲醇熱溶二次（10ml,5ml）過(guò)濾合并甲醇液，濃縮，放置結(jié)晶，濾取沉淀并用少量石油醚洗滌，再用甲醇重結(jié)晶，得β谷甾醇，mp136～137℃，取少許結(jié)晶，做醋酐——濃硫酸反應(yīng)，觀察現(xiàn)象。（三）鑒定化學(xué)檢識(shí)：分別取大黃素、大黃酚等少許，用乙醚溶解，做如下反應(yīng)：A：堿液試驗(yàn)：取試液1ml，加20%NaOH數(shù)滴，觀察顏色。B．醋酸鎂反應(yīng)：取試樣1ml，加醋酸鎂試劑數(shù)滴，觀察現(xiàn)袋。2．薄層鑒定：吸附劑：硅膠—CMC展開(kāi)劑：C6H6—EtoAc(3:2或97：9)。顯色劑：（1）氨蒸氣熏。（2）5%KOH噴霧。實(shí)驗(yàn)五 蘆丁的提取、分離與鑒定槐花米系豆科槐屬植物槐樹(shù)（Sophora japonica L）的花蕾，自古用作止血藥物。治療吐血，痔瘡便血、子宮出血、鼻血等癥，所含主要成分為蕓香苷，又稱蘆?。≧utin，維生素P），其含量高達(dá)12～16%，有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管滲透性之作用，臨床用作毛細(xì)血管止血藥，如復(fù)方蘆丁，也作為高血壓的輔助治療藥物。一、目的要求：1．掌握酸堿法提取黃酮苷類的原理及方法。2．掌握化學(xué)鑒別試驗(yàn)、苷水解、衍生物制備、熔點(diǎn)和薄層層檢查等手段在苷類結(jié)構(gòu)鑒定上的作用。3．通過(guò)UV、IR、HNMR和MS圖譜解析，了解光譜方法黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定中的作用。二、已知重要成分性質(zhì)：1． 蘆丁（蕓香苷，rutin）淡黃色針晶，水中結(jié)晶者含3分結(jié)晶水，C27H30O163H2O 100mmHg和110℃加熱12小時(shí)后，變?yōu)闊o(wú)水物，無(wú)水物于25℃變棕，115～7℃軟化，214～5℃發(fā)泡分解，1g蘆丁溶于約300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶吡啶，甲酰胺和堿液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。2． 槲皮素（Guereetin）為蘆丁的苷元，C15H10O7，；含二分子結(jié)晶水為黃色針晶，（稀乙醇），5～7℃失水，314℃解，1g溶于290ml無(wú)水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋一般在堿水中溶解顯黃色，幾不溶于水。3． 皂苷（Saponin）粗品為白色粉末，mp 210℃～20℃（dec）。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解得下列兩種苷元及糖。糖為葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸內(nèi)酯。（1）白樺酯醇（Betulin）無(wú)色針晶，mp215～2℃，能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；難溶于石油醚和水。 槐花二醇（Sophoradiol）無(wú)色針晶，mp219~20℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇、難溶于水。三、提取分離和純化注1：硼砂因能與蘆丁結(jié)合，起保護(hù)鄰二酚羥基，不被氧化破壞的作用，實(shí)驗(yàn)證明，提取時(shí)加入硼砂，產(chǎn)品質(zhì)量要好些。注2：加石灰乳既能達(dá)到堿溶解提取蘆丁的目的，還可以除去槐花米中大量的粘液質(zhì)和酸性樹(shù)脂（形成鈣鹽沉淀），但pH不能過(guò)高和長(zhǎng)時(shí)間煮沸，因?yàn)闀?huì)導(dǎo)致蘆丁的降解。注3：pH過(guò)低會(huì)使蘆丁形成鋅鹽而降低收率。四、蘆丁的鑒定定性反應(yīng)見(jiàn)附錄酮苷的鑒別。（一）蘆丁的酸水解稱取精制蘆丁約2g，研細(xì)，加H2SO4150ml，投入500ml錐形瓶中，放沸石，直火沸騰后，保持2小時(shí)，放冷后抽濾，濾液保留作糖份的鑒定，水洗沉淀后，粗品用95%乙醇大約20ml回流溶解，趁熱過(guò)濾，放置，加水至50%左右濃度，得黃色針晶。（二）糖的鑒定1．紙層析鑒定：取水解母液20ml，于水溶上加熱，同時(shí)于攪拌下加BaCO3細(xì)粉中和至中性，濾BaCO3后，濾液在水浴上濃縮至2~3ml，得樣品液，以葡萄糖和鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照。展開(kāi)劑：正丁酵一醋酸一水（BAW）（4：1：5）上層，上行展開(kāi)。顯色劑：苯胺一鄰苯甲酸試液，噴后105℃烘10分鐘。顯棕紅色斑點(diǎn)。2．糖脎的制備及鑒定余下的水解母液小心用45%NaOH液中和、濾除棕紅色沉液物，水浴上加熱濃縮至約30ml，濾后加1g鹽酸苯肼和2gNaAC，沸水浴上加熱30~40分鐘，析出黃混合糖脎，停止加熱冷卻，取結(jié)晶少許，于是顯微鏡下觀察，鼠李糖脎為簇狀針晶，葡萄糖脎掃帚狀聚針晶，濾取糖結(jié)晶，水洗，干燥后，溶于丙酮，濾除不溶物。濾液加水使呈30%丙酮液，即析出葡萄糖脎抽濾后以少量丙酮重結(jié)晶一次，mp209℃，母液加水稀釋，析出鼠李糖脎，稀乙醇重結(jié)晶，mp135℃。（三）蘆丁和槲皮素的薄層層析鑒定吸附劑：青島硅膠G（10~400）%CMCNa水液制板，105℃活化1小時(shí)。展開(kāi)劑：（1）CHCL3MeOHHCOOH（15：5：1）（2）CHCL3丁酮HCOOH（5：3：1）顯色劑：1%FeC13和1%K3[Fe（CN）6]水溶液，應(yīng)用時(shí)等體積混和。四、槲皮素五乙?；锏闹苽洌?5ml干燥的錐形瓶中，加6ml醋酐和1滴濃H2SO4，振搖使完全溶解，接上空氣冷管，于水浴上加熱30分鐘放冷，攪拌下傾入100ml冰水中，攪至稀油滴消失，得灰白色的粉末沉淀，放置抽濾，洗滌，用95%乙醇將沉淀重結(jié)晶，得無(wú)色針晶，為五乙?；纹に?，mp192~4℃。五、光譜鑒定（一）紫外光譜利用紫外吸收光譜，測(cè)定黃酮化合物在加入各種電解質(zhì)或絡(luò)合劑后吸收峰的位移，根據(jù)位移的情況，以判斷化合羥基的位置。1．試劑配制（1）無(wú)水甲醇：用分析純的甲醇，加入10%CaO，放置24小時(shí)后，加熱回流1小時(shí)，回流時(shí)冷凝管頂端應(yīng)安裝CaCl2干燥管，然后蒸餾得無(wú)水甲醇。（2）甲醇鈉溶液：，切碎，小心加入無(wú)水甲醇10ml中，此溶液貯存于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。（3）氫氧化鈉溶液： NaOH，加10ml水溶解。（4）三氯化鋁溶液：，放置24小時(shí)后全溶即得。（5）醋酸鈉：用無(wú)水粉狀醋酸鈉。（6）硼酸飽和液：將無(wú)水硼酸加入適量無(wú)水甲醇，制成飽和溶液。依照上述方法制備的各貯備液，可存放使用6個(gè)月。2．測(cè)定方法精密稱取黃酮樣品（槲皮素），用無(wú)水甲醇溶解，再稀釋至100ml。（1）黃酮光譜：取樣品溶液約3ml置于石英杯（1cm）中，在200~500nm波段內(nèi)進(jìn)行掃描，重測(cè)一次，視光譜的重現(xiàn)性。（2）氫氧化鈉光譜：取樣品溶液約3ml置于石英杯中，加入氫氧化鈉2~3滴后，立即進(jìn)行測(cè)定。放置5分鐘后，再測(cè)定一次。（3）甲醇鈉光譜：取樣品溶液約 3ml置于石英杯中，加入甲醇鈉溶液5~7滴后，立即進(jìn)行測(cè)定。放置5分鐘后，再測(cè)定一次。（4）三氯化鋁光譜：在盛有約3ml樣品溶液的石英杯中，加入AICI3溶液6滴，放置一分鐘后進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定后，加入3滴鹽酸溶液（濃鹽酸：水=1：1），再測(cè)定一次。（5）醋酸鈉光譜：取樣品溶液約3ml置于石英杯中，加入適量的無(wú)水醋酸鈉固體，杯底剩有約2mm的醋酸鈉時(shí)，二分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)六 秦皮中七葉苷、七葉內(nèi)酯的提取、分離和鑒定秦皮為本樨科白蠟樹(shù)屬植物白蠟樹(shù)（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦瀝白蠟樹(shù)（ Hance）或小葉白蠟樹(shù)（ DC）的樹(shù)皮,味苦，性微寒。具有清熱、燥濕、收澀作用。主治溫?zé)崃〖?、目赤腫瘤等癥。秦皮中含有多種內(nèi)酯類成分及皂苷、鞣質(zhì)等，其中主要有七葉苷、七葉內(nèi)酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七葉內(nèi)酯對(duì)細(xì)菌性痢疾、急性腸炎有較好治療效果，兼有退熱作用，毒付作用小，幾無(wú)苦味。適于小兒服用。一、秦皮中主要成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)1．七葉苷（esculin），又叫馬粟樹(shù)皮苷：白色粉末狀結(jié)晶，mp205～206℃。易溶于熱水（1：15），可溶于乙醇（1：24），微溶于冷水（1：610），難溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。在稀酸中可水解。水溶液中有藍(lán)色熒光。2．七葉內(nèi)酯（esculetin）：黃色針狀結(jié)晶，mp276℃。易溶于沸乙醇及氫氧化鈉溶液，可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，幾不溶于乙醚、氯仿。3．秦皮苷（fraxin）：mp205℃。4．秦皮素（fraxetin）：mp227～228℃。二、實(shí)驗(yàn)原理七葉苷、七葉內(nèi)酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇將二者提取出來(lái)，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分離之。三、實(shí)驗(yàn)方法（一）提?。喝∏仄ご址?50g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流1012小時(shí)，得乙醇提取液，減壓回收溶劑至浸膏狀，即得總提取物。（二）分離：在上述浸膏中加40ml水加熱溶之。移于分液漏斗中，以等體積氯仿萃取二次，將氯仿萃取過(guò)的水層蒸去殘留氯仿后加等積乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以無(wú)水硫酸鈉脫水，減壓回收溶劑至干，殘留物溶于溫?zé)峒状贾?，濃縮至適量，放置析晶，即有黃色針狀結(jié)晶析出。濾出結(jié)晶。甲醇、水反復(fù)重結(jié)晶，即得七葉內(nèi)酯。將乙酸乙酯萃取過(guò)的水層濃縮至適量，放置析晶，即有微黃色晶體析出。濾出結(jié)晶。以甲醇，水反復(fù)重結(jié)晶，即得七葉苷。（三）鑒定：1．化學(xué)檢識(shí)：取七葉苷、七葉內(nèi)酯各少許分別置試管中，加乙醇1ml溶解。加1%FeCl3溶液2—3滴，顯暗綠色，再滴加濃氨水3滴，加水6ml，日光下觀察顯深紅色。2．薄層鑒定： 吸附劑：硅膠G樣品：七葉苷、七葉內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品及自制七葉苷﹑七葉內(nèi)酯的醇溶液。展開(kāi)劑：甲醇—甲酸乙酯—甲苯（1：4：5）顯色：1）UV254燈下觀察，七葉苷為灰色熒光，七葉內(nèi)酯為灰褐色。2）以重氮化對(duì)硝基苯胺噴霧顯色，七葉苷和七葉內(nèi)酯均呈瑪瑙色。結(jié)果：七葉苷Rf=0. 04，七葉內(nèi)酯Rf=實(shí)驗(yàn)七 薯蕷皂苷元的提取和鑒別一、目的要求：1．掌握甾體皂苷元（親脂性和中性成分）的提取方法。2．熟悉薯蕷皂苷元的性質(zhì)及鑒定法。二、簡(jiǎn)介：薯蕷皂苷元（Diosgenin）是一種甾體皂苷元，分子式（C27H42O31）,，為白色結(jié)晶，mp204～207℃，[]（CHCl3），溶于一般有機(jī)溶劑和醋酸，不溶于水。目前，是制造多種甾體藥物如口服避孕藥（I號(hào)，II號(hào)避孕藥片）和甾體激素（如可的松）等的重要原料。在植物界主要分布在薯蕷科薯蕷屬（Dioscorea）植物中，我國(guó)的薯蕷屬植物有80余種，其中只有薯蕷根莖組（Stenophora）的17種、I亞種及一變種才含有甾體皂苷元，其它則含有多量淀粉，無(wú)皂苷元。已用于生產(chǎn)的主要有盾葉薯蕷（ C. H. Wright），穿龍薯蕷（ Makino），黃山藥（ prain et Burkil）,紫黃姜( Makinovar rosthani prain et Burk)等。在植物體內(nèi)薯蕷皂苷元是與葡萄糖、鼠李糖結(jié)合成薯蕷皂苷（Dioscin）而存在。提取分離時(shí)，一般是先用稀酸將薯蕷皂苷水解成薯蕷皂苷元與單糖（葡萄糖、鼠李糖）。因薯蕷皂苷元不溶于水，混存于植物殘?jiān)校士捎糜袡C(jī)溶劑（如石油醚）直接從植物殘?jiān)刑崛〕鍪硎氃碥赵?。三、提取方?．皂苷預(yù)試：方法見(jiàn)“皂苷的鑒別”①泡沫試驗(yàn)②李伯曼—布哈德