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天然藥物有效成分提取分離技術(shù)(研)doc(完整版)

2024-08-17 05:03上一頁面

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【正文】 鹽處理又得到原來的生物堿。:在濃縮乙醇提取液中加入數(shù)倍量水稀釋,放置以沉淀除去樹脂、果膠、粘液質(zhì)、葉綠素等水不溶性雜質(zhì)。從比較不純的結(jié)晶用結(jié)晶方法精制到較純的結(jié)晶,稱重結(jié)晶。中草藥中的揮發(fā)油及某些揮發(fā)性成分能用水蒸汽蒸餾法得到。以乙醇最為常用,由于醇類溶劑兼有親水性的醇羥基和親脂性的烷基,因此,具有溶解度范圍大,適用范圍廣的特點(diǎn)。據(jù)此,可選擇適當(dāng)溶劑從中藥中提取所需成分。只能根據(jù)預(yù)先確定的目標(biāo),在臨床或藥理試驗(yàn)配合下,經(jīng)不同溶劑提取,以確定有效部位。中草藥有效成分的提取分離一般有下面兩種情況:第一、從植物中提取已知的有效成分或已知的化學(xué)結(jié)構(gòu)類型者。其中主要有纖維素、葉綠素、單糖、低聚糖和淀粉、蛋白質(zhì)和酶、油脂和蠟、樹脂、樹膠、鞣質(zhì)及無機(jī)鹽等。當(dāng)然有效成分與無效成分的劃分是相對(duì)的,如天花粉的引產(chǎn)有效成分是蛋白質(zhì),香茹中的多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤有顯著的抑制作用。一般先查閱有關(guān)資料,特別是工業(yè)生產(chǎn)的方法,搜集比較該種或該類成分的各種提取方法,再根據(jù)具體條件加以選用?,F(xiàn)分別介紹如下:  (一)溶劑提取法   溶劑提取法的原理:溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì),選用對(duì)活性成分溶解度大,對(duì)不需要溶出的成分溶解度小的溶劑,而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來的方法。提取方法可分為水煎、水浸和水滲鹿三種。提取方法:回流提??;連續(xù)提取。如:樟木可樟腦;茶葉中咖啡堿;大黃中游離羥基蒽醌的提取。因此,必須注意中藥的粗提物先用其它方法盡量除去雜質(zhì)后,再采用此法。③金屬鹽沉淀法:常用鉛鹽(中性和堿性醋酸鉛)、鋇鹽、鈣鹽、銅鹽等。常用作鹽析的無機(jī)鹽的氯化鈉、硫 鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。100%=%。對(duì)酸性物質(zhì)(HA),其在水中的解離平衡及解離常數(shù)K可用下式表示: 兩邊取負(fù)對(duì)數(shù) 注:Ka越大,酸性越強(qiáng);PKa值越小,酸性越強(qiáng)。層析法是一種使不同分子相互分離的過程,當(dāng)一混樣品被導(dǎo)入一固定相的支持體中,而另一流體(移動(dòng)相)通過時(shí),由于樣品各組分與固定相和移動(dòng)相相互作用的大小不同,使用權(quán)各組分通過固定相支持體的速成率不同而得到期分離。吸附劑的選擇國內(nèi)常用的吸附劑有硅膠、聚酰胺和纖維素。硬板的制備是用stahl涂布器或手工方法鋪板。 展開劑 層析過程中溶劑的選擇對(duì)組分分離關(guān)系極大。被分離物質(zhì)、吸附劑和展開劑三者既相互聯(lián)系又相互制約,三者之間的關(guān)系可用下圖表示: 在實(shí)際工作中,應(yīng)注意前人有經(jīng)驗(yàn),再結(jié)合自己的條件加以選擇。(二)硅膠柱層析 硅膠的應(yīng)用范圍比較廣,既能用于非極性物質(zhì)的分離,也能用于極性化合物的分離。使洗脫劑蓋過硅膠表面數(shù)厘米為宜。⑵樣品量與吸附劑比例 硅膠一般為1:100300;較難分離者有時(shí)甚至可達(dá)1:5001000;聚酰胺為1:2030。分別命名為RP(reverse phase)RP8及RP18。依據(jù)所用壓力大小不同,可以分為快速層析(5個(gè)大氣壓),低壓液相層析(LPLC,小于5個(gè)大氣壓),中壓液相層析(MPLC,520大氣壓)及高壓液相層析(HPLC,20個(gè)大氣壓)等。聚酰胺吸附強(qiáng)弱主要取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力,要含水溶劑中大致有下列規(guī)律:⑴形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多,則吸附能力越強(qiáng)。⑵柱層析時(shí)用含有氯仿作冼脫劑時(shí),由于溶劑的比重大于1,無法裝柱。羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH20)為Sephadex G25經(jīng)羥丙基化處理后得到的產(chǎn)物。即可實(shí)現(xiàn)物質(zhì)分離。③堿性強(qiáng)弱不同的生物堿分離東茛菪堿;茛菪堿;小檗堿混合物水溶液通過銨(NH4+)型弱酸性樹脂。能干的人,不在情緒上計(jì)較,只在做事上認(rèn)真;無能的人!不在做事上認(rèn)真,只在情緒上計(jì)較。因此,先用水洗下東茛菪堿;繼用氯化銨(NH4Cl)洗下茛菪堿;最后用碳酸鈉(Na2CO3)洗下小檗堿。離子交換樹脂的交鏈度對(duì)中藥化學(xué)成分的交換分離影響較大。不僅可在水中應(yīng)用,也可在極性有機(jī)溶劑或它們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。如常用的乙醇水;甲醇水;丙酮水等,當(dāng)含水量大于20%以上時(shí),所用聚酰胺顆粒最好不要小于100目。⑵形成氫鍵的位置對(duì)吸附力有影響。因此,既可分離水溶性物質(zhì),又可分離脂溶性物質(zhì)。Lobar柱屬于低壓柱層析范疇(5個(gè)大氣壓)。但因薄層層析時(shí)吸附劑的表面積一般為柱層析時(shí)表面積的2倍左右。要求在層析柱四周敲擊均勻,否則,由于層析柱兩側(cè)硅膠緊密程度不一,造成色譜帶產(chǎn)生斜面,影響分離效果。硅膠的活性與含水量有關(guān),含水量高則吸附力減弱,當(dāng)游離水含量高達(dá)17%以上時(shí),吸附能力極低,而可作為分配層析載體。⑵絡(luò)合薄層:硝酸銀薄層,用于分離碳原子數(shù)目相等而其中碳碳雙鍵數(shù)目不等的一系列化合物。因此,在進(jìn)行薄層層析時(shí),選擇展開劑比選擇吸附劑要復(fù)雜的多。鋪板注意事項(xiàng): ⑴用蒸餾水調(diào)制吸附劑時(shí),有時(shí)為了把氣泡趕盡,可加12滴乙醇消泡;⑵國內(nèi)產(chǎn)硅
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