天然藥物有效成分提取分離技術(shù)(研)doc(參考版)
2025-07-18 05:03本頁面
【正文】 能干的人，不在情緒上計較，只在做事上認真；無能的人！不在做事上認真，只在情緒上計較。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來越容易。寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。因此，先用水洗下東茛菪堿；繼用氯化銨（NH4Cl）洗下茛菪堿；最后用碳酸鈉（Na2CO3）洗下小檗堿。③堿性強弱不同的生物堿分離東茛菪堿；茛菪堿；小檗堿混合物水溶液通過銨（NH4+）型弱酸性樹脂。②生物堿的分離可用強酸性樹脂從中草藥水浸液或稀乙醇提取液或乙醇提取部位的水溶部位直按交換生物堿，用氨水或氨性乙醇洗脫，所得部位，再及其它分離手段分離。陽離子交換樹脂交鏈度36%；陰離子交換樹脂交鏈度23%。離子交換樹脂的交鏈度對中藥化學成分的交換分離影響較大。即可實現(xiàn)物質(zhì)分離。離子交換層析⑴離子交換法系以離子交換樹脂作為固定相，以水或含水溶劑作為流動相。Sephadex LH20價格比較昂貴。不僅可在水中應(yīng)用，也可在極性有機溶劑或它們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH20)為Sephadex G25經(jīng)羥丙基化處理后得到的產(chǎn)物。由于凝膠網(wǎng)孔半徑的限制，大分子將不能滲入凝膠顆粒內(nèi)部(即被排阻在凝膠粒子外部)，故在顆粒間隙移動，并隨溶劑一起從柱底先行流出；小分子因可自由滲入并擴散到疾膠顆粒內(nèi)部，故通過層析柱時阻力增大，流速變緩，將較晚流出。它是六十年代發(fā)展起來的一種分離分析技術(shù)，是利用分子篩分離物質(zhì)的一種方法。如常用的乙醇水；甲醇水；丙酮水等，當含水量大于20%以上時，所用聚酰胺顆粒最好不要小于100目。⑵柱層析時用含有氯仿作冼脫劑時，由于溶劑的比重大于1,無法裝柱。如⑷與溶劑介質(zhì)有關(guān)，一般認為，在水中形成氫鍵能力最強，在有機溶劑中較弱，大堿性溶劑最弱。如間苯二酚苯酚鄰苯二酚；對羥基苯甲酸鄰羥基苯甲酸。⑵形成氫鍵的位置對吸附力有影響。聚酰胺吸附強弱主要取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力，要含水溶劑中大致有下列規(guī)律：⑴形成氫鍵的基團數(shù)目越多，則吸附能力越強。芳香硝基化合物和醌類是其硝基和醌基與聚酰胺分子中酰胺鍵的游離氨基形成氫鍵。因而對這些物質(zhì)產(chǎn)生了吸附作用即氫鍵吸附。因此，既可分離水溶性物質(zhì)，又可分離脂溶性物質(zhì)。依據(jù)所用壓力大小不同，可以分為快速層析(5個大氣壓)，低壓液相層析(LPLC，小于5個大氣壓)，中壓液相層析(MPLC，520大氣壓)及高壓液相層析(HPLC，20個大氣壓)等。現(xiàn)在國內(nèi)也有反相硅膠商品出售，也可直接按常壓柱層析操作使用。國內(nèi)使用的單位也比較多。Lobar柱屬于低壓柱層析范疇(5個大氣壓)。分別命名為RP(reverse phase)RP8及RP18。柱層析的填料系將普通硅膠經(jīng)化學修飾，鍵合上長度不同的烴基(R)，形成親油表面而成。⑸干法上樣時，樣品一定要呈溶液狀態(tài)拌入吸附劑，如樣品沒有完全溶解，將混懸液拌入吸附劑，當進行柱層析時，顆粒狀樣品在洗脫劑作用下，逐步溶解后再經(jīng)柱層析移動，用薄層層析檢查時，樣品完全沒有分離開。但因薄層層析時吸附劑的表面積一般為柱層析時表面積的2倍左右。⑵樣品量與吸附劑比例 硅膠一般為1:100300；較難分離者有時甚至可達1:5001000；聚酰胺為1:2030。上樣時注意除去樣品硅膠中的氣泡。上樣 ⑴濕法上樣 一般將樣品溶于洗脫劑中輕輕注入已準備好的硅膠柱上面，勿使硅膠柱面受到擾動，否則將影響層析效果，所用樣品洗脫 劑要少，使樣品在硅膠柱上形成狹窄的原始譜帶。要求在層析柱四周敲擊均勻，否則，由于層析柱兩側(cè)硅膠緊密程度不一，造成色譜帶產(chǎn)生斜面，影響分離效果。使洗脫劑蓋過硅膠表面數(shù)厘米為宜。⑵濕法裝柱 將硅膠混懸于洗脫劑中，不斷攪拌待空氣除去后，連同溶劑一起傾入，否則由于不同粒度大小的硅膠沉降速度不一，使硅膠柱有明顯的分段，容易影響分離效果。將硅膠經(jīng)漏斗慢慢裝入柱中，邊填裝，邊用橡皮塞輕輕敲擊層析柱，使其填裝均勻緊密，最后使吸附劑表面形成一水平面。硅膠的活性與含水量有關(guān)，含水量高則吸附力減弱，當游離水含量高達17%以上時，吸附能力極低，而可作為分配層析載體。(二)硅膠柱層析 硅膠的應(yīng)用范圍比較廣，既能用于非極性物質(zhì)的分離，也能用于極性化合物的分離。⑶酸堿薄層：在鋪制薄層時采用稀酸或稀堿以代替水調(diào)制的薄層。硼酸薄層用于分離糖類化合物。⑵絡(luò)合薄層：硝酸銀薄層，用于分離碳原子數(shù)目相等而其中碳碳雙鍵數(shù)目不等的一系列化合物。被分離物質(zhì)、吸附劑和展開劑三者既相互聯(lián)系又相互制約，三者之間的關(guān)系可用下圖表示： 在實際工作中，應(yīng)注意前人有經(jīng)驗，再結(jié)合自己的條件加以選擇。因此，如果用某種展開劑去展開某一化合物時，當Rf值太小時，就要考慮換用一種極性較大的溶劑去展開；Rf值過大時，就降低溶劑的極性。這里著重討論吸附層析的情況。因此，在進行薄層層析時，選擇展開劑比選擇吸附劑要復雜的多。 展開劑 層析過程中溶
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