【文章內(nèi)容簡介】 競爭，同時(shí)霉菌能使瘤胃中的總菌數(shù)和纖維素分解菌成倍增加，從而速瘤胃內(nèi)纖維素的分解。霉菌可分泌一系列代謝終產(chǎn)物，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，促進(jìn)動(dòng)物生長。此外霉菌細(xì)胞中富含 B 族維生素。 根據(jù)微生態(tài)制劑的用途及作用機(jī)制可分為微生物生長促進(jìn)劑、微生態(tài)治療劑和復(fù)合型微生態(tài)多功能制劑等。(1) 微生態(tài)治療劑主要由正常消化道優(yōu)勢菌群的乳酸菌、雙歧桿菌等菌株組成，有些則以蠟樣芽孢桿菌、枯草桿菌、地衣芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌等需氧菌為主，用于畜禽的育肥、抗病，可替代抗生素治療腸道細(xì)菌性疾病，減少藥物殘留和富集。另外，噬菌蛭孤菌等能發(fā)揮直接殺滅病原微生物的作用。11(2) 生長促進(jìn)類枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌這一類微生態(tài)制劑具有較強(qiáng)的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，能發(fā)酵合成多種生物活性物質(zhì)，如有機(jī)酸 B 族維生素、脂肪酸、吡哆結(jié)構(gòu)化合物等，從而加強(qiáng)腸的蠕動(dòng)和分泌，促進(jìn)飼料的消化吸收，提高 Ca、 Fe 等微量元素及蛋白質(zhì)的吸收率；酵母菌類既可以幫助消化，刺激的益生菌的生長，又可以為動(dòng)物提供蛋白質(zhì)；優(yōu)桿菌分泌乳酸，促進(jìn)飼料消化。(3) 微生態(tài)多功能制劑類由多種屬菌株配合而成，較常用的是雙歧桿菌、乳酸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、腸球菌、酵母菌以及擬桿菌等，它們直接參與生物屏障的構(gòu)成，發(fā)揮對致病菌和條件致病菌的拮抗作用，促進(jìn)優(yōu)勢菌群生長，調(diào)整微生態(tài)平衡，同時(shí)還具有免疫調(diào)節(jié)因子，減少氧自由基的產(chǎn)生、延緩細(xì)胞老化、抑制腫瘤細(xì)胞生長等作用，而且還具有輔助消化、促進(jìn)生長等作用。．我國微生態(tài)制劑的研究開發(fā)現(xiàn)狀我國微生態(tài)制劑的研究開始于７０年代，但應(yīng)用則是近幾年的事。１９９２年我國成立中國微生態(tài)學(xué)會(huì)，并把飼用微生態(tài)制劑及其應(yīng)用技術(shù)研究列入國家“八五 ”科 技攻關(guān)課題，推動(dòng)了微生態(tài)制劑應(yīng)用研究工作。國內(nèi)已經(jīng)有一批生產(chǎn)廠家研制生產(chǎn)出飼用微生態(tài)制劑產(chǎn)品，在實(shí)際應(yīng)用中表現(xiàn)出顯著的作用和效果。 醫(yī)用微生態(tài)制劑 [27,28]近十年來，隨著微生態(tài)理論的發(fā)展，微生態(tài)制劑應(yīng)運(yùn)而生并迅速發(fā)展，至今已研制出百余種產(chǎn)品，主要以雙歧桿菌、乳酸桿菌制成的益生菌制劑，也有一些低聚糖類益生元制劑，但大部分是保健品。自 20 世紀(jì) 90 年代以來先后已有 9 種活菌制劑取得國家新藥證書，并有 12 個(gè)廠家被批準(zhǔn)生產(chǎn)，據(jù)悉還有一些微生態(tài)制劑已取得新藥證書，但尚未開始生產(chǎn)，也有一些正在進(jìn)行臨床驗(yàn)證或?qū)嶒?yàn)室研究階段。臨床應(yīng)用的微生態(tài)活菌制劑成份中正常優(yōu)勢細(xì)菌主要有：⑴厭氧菌：雙歧桿菌（Bifidobacterium） 、酪酸菌（Clostridium butyricum） ；⑵兼性厭氧菌：乳酸桿菌(Lactobacillus acidphilus)、枯草芽孢桿菌 (Bacillussubtilis)、糞鏈球菌( Streptacous faecuum)；⑶需氧菌：蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、地衣芽孢桿菌( Bacillus licheniformis)等。1995 年經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，頒布了麗珠腸樂、培菲康、整腸生和促菌生四種活菌制劑的生產(chǎn)和檢定試行規(guī)程，2022 年此四種制劑和另一種活菌劑即金雙歧都有了國家正式的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并被列入 2022 年版《中國生物制品規(guī)程》 。 動(dòng)物微生態(tài)制劑 國內(nèi)外微生態(tài)菌株的使用現(xiàn)狀動(dòng)物微生態(tài)制劑的菌株主要來源于動(dòng)物（包括人類）的消化道和土壤 [9]。12“華星一號”菌株（BF839 ）由人體中篩選 [29]；薜恒平等分離的乳桿菌 K 株和來源于兔和豬的腸道糞便；DM423 是康白等從土壤中分離的需氧蠟樣芽孢桿菌[30]。一般說來，人們更傾向于從動(dòng)物消化道內(nèi)分離菌株，這樣有利于菌株在宿主腸道內(nèi)定植。由于研究現(xiàn)狀的差異，各國在使用菌株種類上也存在很大的不同。日本使用的菌株主要有 Toyoi、芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、酪酸梭菌、雙歧桿菌、糞鏈球菌和乳酸桿菌等，但幾乎不使用霉菌及酵母類菌株；美國用于生產(chǎn)的菌株主要有乳酸桿菌、糞鏈球菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌、仙人山屬菌、優(yōu)桿菌及酵母等；而我國使用的菌株主要有嗜酸乳桿菌、蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、雙歧桿菌、糞鏈球菌、噬菌蛭弧菌、脆弱擬桿菌及酵母菌等。目前，比較典型的微生態(tài)制劑產(chǎn)品是由日本硫球大學(xué)教授比嘉昭夫研制的EM 制劑，EM 是“有效微生物菌群” （Effective microanisms）的英文縮寫，EM 制劑是由光合菌、酵母菌和乳酸菌等 10 屬 80 多種微生物復(fù)合培養(yǎng)成的有效微生物菌群，用于飼料中能增強(qiáng)畜禽免疫力、促進(jìn)生長、改善環(huán)境衛(wèi)生，而且具有天然無毒、無殘留等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于世界各國畜牧業(yè)。 國內(nèi)主要?jiǎng)游镂⑸鷳B(tài)制劑我國動(dòng)物微生態(tài)制劑的生產(chǎn)研究起步較晚，很多產(chǎn)品還沒有成熟的生產(chǎn)和檢定規(guī)程；而國家規(guī)定，動(dòng)物微生態(tài)制劑作為獸藥批量生產(chǎn)的，要按獸用生物制品的《獸藥 GMP》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行審查和驗(yàn)收，生產(chǎn)條件要求非常高，造成很多廠家只能以飼料添加劑的形式進(jìn)行生產(chǎn)操作，阻礙了其在動(dòng)物疾病防治方面的研究和應(yīng)用。目前國內(nèi)生產(chǎn)動(dòng)物微生態(tài)制劑的廠家的十幾家 [31]，其主要產(chǎn)品有：何明清教授研制的芽孢桿菌類系列 8501（仔豬） 、8701（豬用） 、8801（魚用） 、8901（禽用） 、901 和 906（肉雞用） ；大連醫(yī)科大學(xué)康白教授研制的促菌生（由需氧芽孢桿菌組成） ；四川農(nóng)大的調(diào)痢生（雙歧桿菌主芽孢桿菌） ；南京農(nóng)大研制的促康生（由芽孢桿菌 N42 和乳酸菌 K?P 株等制成） ；揚(yáng)州大學(xué)研制的NY—10 制劑（由乳酸桿菌配合大腸桿菌制成） ；上海華星生物工程研究所研制的“華星寶” （由脆弱擬桿菌、糞鏈球菌和蠟樣芽孢桿菌制成的復(fù)合制劑）等等。盡管品種較多，但目前使用的菌種主要以乳酸菌芽孢桿菌、糞鏈球菌等為主。 微生態(tài)制劑在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用效果微生態(tài)制劑在動(dòng)物上應(yīng)用，報(bào)道很多，對近年來的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)效果 [3238]總結(jié)于下表 11。根據(jù)表 11 的統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，報(bào)道結(jié)果不一致，但正效應(yīng)多于負(fù)效應(yīng)。這可能與飼料營養(yǎng)水平、成分、動(dòng)物所處的環(huán)境、狀態(tài)以及微生態(tài)制劑使用的方式、方法、劑量有關(guān)，而且與微生態(tài)制劑的質(zhì)量也有很大關(guān)系。目前，對于動(dòng)13物微生態(tài)制劑，我國還沒有一個(gè)統(tǒng)一的國家標(biāo)準(zhǔn)，也無統(tǒng)一的檢測部門。市場上流通的微生態(tài)制劑產(chǎn)品僅就含活菌來看，有些生產(chǎn)廠家認(rèn)為活菌數(shù)量越多越好，以產(chǎn)品含菌量來評價(jià)微生態(tài)制劑的質(zhì)量，但在生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用中并非如此。另外，微生態(tài)制劑在保藏和在飼料加工的穩(wěn)定性也影響其使用效果。表 11 微生態(tài)制劑的使用效果統(tǒng)計(jì)動(dòng)物類型提 高增 重提高飼料轉(zhuǎn)化率降 低發(fā)病率降 低死亡率提高產(chǎn)蛋量或產(chǎn)奶量~* ~ ~ ~ ——豬** ——－~* －~ —— ~ ~** ~* ~ ~ —— ~動(dòng)物 ** —— －~* ~ ~ ~ ——兔** ——－~ ~ ~ ~ ——魚蝦** —— ——－~* －~ ~ ~ ——總效應(yīng) ** —— * 數(shù)值變化范圍 ** 平均值 酪酸菌的研究與發(fā)展大量的人醫(yī)及動(dòng)物臨床實(shí)踐證明，微生態(tài)制劑（例如雙歧桿菌、乳酸桿菌等）確實(shí)能起到調(diào)節(jié)菌群紊亂的作用，但這些微生態(tài)制劑有一個(gè)致命的弱點(diǎn)，即在儲(chǔ)存和口服過程中易受外界各種生化和物理因素的影響而失去活性。特別是雙歧桿菌對外界的抵抗能力極弱，室溫保存活菌數(shù)會(huì)大幅降低，直接口服也易被胃酸滅活而降低療效，需制成腸溶膠囊加以保護(hù)，另外抗生素對其也有殺滅作用，因而臨床上不易與抗生素同服。為了克服以上種種弊端，人們研究出了新一代的微生態(tài)制劑 酪酸菌制劑。酪酸菌是一種專性厭氧芽苞桿菌，由于它具有耐熱耐酸及對常用抗生素有抗性等特點(diǎn)，在臨床上廣泛用于治療各種腸道疾病，是一種較理想的有開發(fā)前景的微生態(tài)制劑。．酪酸菌的來源、形態(tài)和生理酪酸菌，又名丁酸梭菌（Clostridium butyricum）是 1933 年由日本千葉醫(yī)科大學(xué)宮入近治博士首先發(fā)現(xiàn)并報(bào)告的，因此又叫宮入菌。1935 年，Kingi miyairi 博士從人的糞便和土壤中分離出丁酸梭菌，隨后發(fā)現(xiàn)其厭氧培養(yǎng)的過濾14物中含有較少的脂肪酸，具有極強(qiáng)的整腸作用，它可抑制腸道中的致病菌，促進(jìn)腸道中有益菌如雙歧桿菌和乳桿菌的生長。酪酸菌在分類學(xué)上屬于芽孢桿菌科梭菌屬，是一種厭氧的革蘭氏陽性芽孢桿菌，其直徑為 ~﹡ ~，兩端鈍圓，中間部分輕度膨脹，細(xì)菌呈直桿狀或稍有彎曲 [39]。具有周生鞭毛能運(yùn)動(dòng)，在瓊脂平板上形成白色或淺灰色的小規(guī)則圓形菌落，不水解明膠，不消化血清蛋白，能夠發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖等碳水化合物產(chǎn)酸，一個(gè)顯著的特征是產(chǎn)生淀粉酶，水解淀粉但不水解纖維素。水解淀粉和糖類的最終代謝產(chǎn)物為丁酸、醋酸和乳酸，還發(fā)現(xiàn)有少量的丙酸、甲酸，硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)均為陰性。．酪酸菌的功能和特性（1）促進(jìn)腸道有益菌群（雙歧桿菌、乳酸桿菌）的增殖和發(fā)育，抑制腸道內(nèi)有害菌和腐敗菌的生長繁殖，糾正腸道菌群紊亂，減少腸道毒素的產(chǎn)生，實(shí)驗(yàn)表明，已知健康人的糞便菌群以厭氧菌為主，并知雙歧桿菌在人和動(dòng)物體為最高和最常見的正常菌群之一 [40]。張達(dá)榮 [41]等證實(shí)，腸易激綜合癥患者中菌群失調(diào)，表現(xiàn)為與糞便菌群中主要比例的總厭氧菌雙歧桿菌、乳酸桿菌的量減少，而占腸道菌群比例中較少的具有潛在致病性梭菌卻顯著增多，經(jīng)酪酸菌治療后，糞便菌群中的雙歧桿菌、無芽孢厭氧菌、大腸菌、腸球菌和乳酸菌與健康人無顯著差異，占腸道比例多的雙歧桿菌、乳酸桿菌顯著上升，而具有潛在致病性的梭菌明顯下降，并且臨床癥狀相應(yīng)明顯改善。趙熙 [42]等研究報(bào)道，酪酸菌制劑使腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量增加，差異極顯著（P≤） ，乳酸桿菌的數(shù)量增加，差異顯著（P≤） 。傅思武 [43]等證實(shí)，服用酪酸菌制劑后，受試者的腸桿菌、腸球菌、擬桿菌的數(shù)量無明顯變化。雙歧桿菌、乳酸桿菌的數(shù)量增加，差異有非常顯著性（P≤） 。張雪平 [44]等用酪酸菌制劑對腸道致病菌體外生物拮抗作用研究表明，酪酸菌和雙歧桿菌在體外能明顯抑制大腸埃希氏菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌的生長繁殖。陸儉 [45]等研究表明，酪酸菌對霍亂弧菌有拮抗作用，具有抑制霍亂弧菌的作用。呂存女 [46]等實(shí)驗(yàn)證明，酪酸菌和嬰兒雙歧桿菌能明顯抑制艱難梭菌的生長，并且兩菌聯(lián)合比各自單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)顯示出更強(qiáng)的生物拮抗作用。這一系列實(shí)驗(yàn)研究說明，酪酸菌制劑對調(diào)整腸道微生態(tài)具有重要意義。（2）酪酸菌能激活免疫系統(tǒng)，促進(jìn)免疫功能，維持機(jī)體的健康狀況：當(dāng)機(jī)體攝食酪酸菌死菌體（10 9個(gè)/g）后，從小腸上皮無菌取出派伊爾氏淋巴集結(jié)細(xì)胞，用 ELISA 法測定血清中免疫球蛋白 IgA 含量，試驗(yàn)組（6181。g/ml）明顯高于未攝食菌體的對照組（） 。給雞飼喂含酪酸菌體的飼料后，測其血清中 NDHI 抗體效價(jià)的變化，結(jié)果顯示，攝食一周后，NDHI 滴度迅速上升。有人發(fā)現(xiàn)酪酸菌細(xì)胞具抗腫瘤活力。移植肉瘤 180 前和后分別對小鼠進(jìn)行15腹膜注射其液劑發(fā)現(xiàn)酪酸菌產(chǎn)生的胞外可溶性多聚糖完全抑制肉瘤的生長。另有人用酪酸菌治療移植性腫瘤“Jensen 肉瘤” ，熱殺死酪酸菌細(xì)胞后制成菌體疫苗，對 BDF、鼠的 B16—F10 黑素瘤進(jìn)行抗轉(zhuǎn)移試驗(yàn)。疫苗刺激自然殺傷（NK）細(xì)胞對靶細(xì)胞 YAC—1 的細(xì)胞毒力的抗性。處理后 72h 出現(xiàn)拮抗峰值，而最大巨噬細(xì)胞對細(xì)胞毒活力的抑制在 9~11 天出現(xiàn)。這種刺激作用證實(shí)了被激活的 NK 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在抗轉(zhuǎn)移作用中的角色 [47]。(3) 在腸道內(nèi)，酪酸菌能產(chǎn)生 B 族維生素、維生素 K、淀粉酶等物質(zhì)，對機(jī)體具有保健作用 [48]。最近對母乳喂養(yǎng)嬰兒腦出血的研究已集中到維生素 K 方面來。對維生素 K 缺乏具有高度敏感性的家禽進(jìn)行實(shí)驗(yàn)證明酪酸菌能在腸道內(nèi)產(chǎn)生必需的維生素 K[49]。(4) 酪酸菌的主要代謝產(chǎn)物為丁酸，而丁酸是腸道上皮組織細(xì)胞的再生和修復(fù)的主要營養(yǎng)物質(zhì)。因此，對腸道上皮組織的再生和修復(fù)有很重要的意義。(5) 酪酸菌是厭氧芽孢桿菌，內(nèi)生芽孢，穩(wěn)定性好，在人體內(nèi)不受胃酸、膽汁酸等影響，在體外室溫下可保存三年以上 [48]。并且對多種抗生素有較強(qiáng)的耐受性，在臨床上可與其并用。．酪酸菌制劑的臨床應(yīng)用和開發(fā)現(xiàn)狀自 1944 年日本將酪酸菌制劑正式投入臨床應(yīng)用以來，酪酸菌制劑在國內(nèi)外臨床、應(yīng)用已有幾十年的歷史。其在臨床上不僅對各種原因（腸道感染、腫瘤化療、外科手術(shù)等）所致的腸道菌群紊亂、急慢性腹瀉、腸易激綜合癥、非潰瘍性消化不良等疾病有良好的療效，尤其對應(yīng)用抗生素后所致的偽膜性腸炎有獨(dú)特的效果。日本是研究酪酸菌制劑歷史最長、范圍最廣的國家，他們除開發(fā)用于整腸的藥品外，還開發(fā)了酪酸菌液劑、粉末劑、膠囊劑等保健食品，并將其作為獸醫(yī)藥品用來治療畜禽腸道菌群紊亂，提高生產(chǎn)力。另外，酪酸菌制劑還可以當(dāng)作微生物肥料使用，不僅促進(jìn)植物生長，又能防治植物病害。我國自 93 年起，從日本進(jìn)口酪酸菌制劑——米雅 BM 片劑和米雅利桑愛兒A 顆粒劑，先后在上海、廣州、哈爾濱等十幾家著名醫(yī)院臨床應(yīng)用，治療腸菌群紊亂引起的腸炎、腹瀉、消化不良等疾患，取得了顯著療效 [50,51]。．本研究的目的意義我國對酪酸菌的研究開發(fā)才剛剛起步，目前僅有兩家廠家被批準(zhǔn)生產(chǎn)。而在畜牧和農(nóng)業(yè)方面的應(yīng)用還是一塊沒有開墾的處女地。我國是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國，我省是畜牧大省，將酪酸菌制劑在畜牧業(yè)開發(fā)應(yīng)用會(huì)有廣闊的前景。隨著中國加入 WTO，畜牧業(yè)面臨著新的機(jī)遇和更大的挑戰(zhàn)。當(dāng)前，我們已經(jīng)取得入關(guān)的通行證，可是我們的畜牧產(chǎn)品有相當(dāng)一部分卻是因?yàn)樗幬餁埩舳粨踉陉P(guān)外。因此，如何減少和降低、甚至沒有抗生素藥物殘留是擺在我們面16前的重要的課題，動(dòng)物微生態(tài)制劑的研究和開發(fā)為我們提供了很好的方向，而酪酸菌自身具有