【正文】 Ⅱ：酵母浸汁 、蛋白胨 、牛肉膏 、葡萄糖 、瓊脂 、蒸餾水 1000ml、pH ~ 方法 抑菌作用測定方法：抑菌活性測定檢測采用杯碟法。⑴ 磷酸緩沖液（pH ）制備：取磷酸氫二鉀 2g 與磷酸二氫鉀 8g，加水使成 1000ml，濾過，在 115℃滅菌 30 分鐘，備用。⑵ 菌懸液的制備挑取大腸埃希氏菌，接種于 LB 瓊脂斜面上，在 37℃恒溫箱培養(yǎng) 20—24 小時。臨用時，用滅菌水將菌苔洗下，即得。⑶ 測試溶液的制備A：硫酸新霉素 PBS 液：精密稱取硫酸新霉素 ,溶解于 1000ml滅菌磷酸鹽緩沖液中。B：菌液離心液：分別量取乳酸菌 48h， 發(fā)酵液 ，酪酸菌48h 的發(fā)酵液 以及復(fù)合酪酸菌制劑 于 EP 管中，8000rpm 離心 5 分鐘，取上清。⑷ 平板培養(yǎng)基制備取內(nèi)徑 90mm，高 16—17mm 的平皿（已滅菌） ，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基Ⅱ20ml，使在皿底均勻攤布，防治，使其凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基Ⅱ適量加熱融化后，放冷至 45℃左右，加入大腸桿菌菌懸液適量，搖勻，在每 1 平皿中分別加入 5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置冷卻后，每皿中以等距離均勻安置牛津杯，用陶瓦圓蓋備用。 有機酸的檢測與排除發(fā)酵液對指示菌有抑制作用，可能是酸的作用。采用氣相色譜法分析樣品中的有機酸，根據(jù)分析結(jié)果，采用 pH 值 的乳酸做對照以排除有機酸的干擾。 檢定⑴ 在已做好的雙碟中，放置 5 個牛津杯，在每個杯中分別滴滿硫酸新霉素PBS 液、L—13 離心上清液、CB2 離心上清液、復(fù)合酪酸菌制劑離心上清液， 的乳酸溶液，放置溫箱中 37℃培養(yǎng) 16 小時。2 雙碟中，放置 4 個牛津杯，分別滴入 L—13 上清液、CB2 離心上清液、27復(fù)合酪酸菌制劑離心上清液、 的乳酸溶液，37℃溫箱中孵育 16 小時。 有機酸的檢測與排除通過檢測，復(fù)合酪酸菌制劑中所含的有機酸主要為乳酸，見表 21。樣品pH 值為 的乳酸溶液作對照，檢測有機酸對抑菌作用無影響。因此可排除對抑菌作用的影響。表 21 有機酸含量有機酸 甲酸 乙酸 丙酸 丁酸 乳酸含量（g/L） 抑菌結(jié)果結(jié)果發(fā)現(xiàn)：L13 、新霉素和復(fù)合酪酸菌制劑有抑菌作用，CB2 和乳酸無抑制作用。見表 22 及附圖 5。表 22 幾種試樣液的抑菌效果樣液 平均抑菌直徑（mm）L13 新霉素 CB2 0復(fù)合制劑 乳酸 0由以上試驗結(jié)果說明，乳酸菌 L13 能夠產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)——細菌素，復(fù)合酪酸菌制劑的抑菌作用是由乳酸菌產(chǎn)生抑菌物質(zhì)造成的，該抑菌物質(zhì)濃度越高，抑菌作用越大。28實驗三 復(fù)合酪酸菌制劑動物飼喂試驗 ：(1) 供試菌株：大腸埃希菌 SW 株，山東省生物研究所提供；(2) 實驗藥品：復(fù)合酪酸菌制劑，山東省平陰縣畜牧局研制生產(chǎn)；(3) 培養(yǎng)基： LB 培養(yǎng)基；(4) 實驗雞只： 1 日齡健康 AA 雞 260 只，購自濰坊市大正種雞場；(5) 飼料：雛雞全價配合飼料，淄博六和集團提供；(6) 飼養(yǎng)方式：采用籠養(yǎng)方式； 實驗時間與地點：2022 年 2 月 10 日—2022 年 3 月 31 日；山東省平陰畜牧局。 方法 增菌培養(yǎng)：將大腸埃希菌接種于 LB 培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng) 24h。經(jīng)活菌計數(shù)，每毫升含細菌數(shù) 2*109個。 攻毒及攻毒劑量的測定：取實驗雞 20 只，隨機分為 4 組，分別經(jīng)肌肉注射已計數(shù)的培養(yǎng)菌，第 1 組為 ml/只 (含活菌約 億個) ，第 2 組為 ml/只( 含活菌約 億個)，第 3組為 ml/只( 含活菌約 億個), 第 4 組為 ml/只(含活菌約 億個)。攻毒 24h 后，第 1 組未見死亡，第 2 組死亡 1 只（死亡率 20%） ，第 3 組死亡 2 只29（死亡率 40%） ，第 4 組死亡 3 只（死亡率 60%） 。所以將攻毒劑量定為 ml/只。 試驗方法 實驗分為 6 組，每組 40 只雛雞（0—6 周齡） ，設(shè) 2 個重復(fù)。具體分組為：1 組：1 日齡開始 %復(fù)合酪酸菌制劑飲水； 2 組：空白對照； 3 組：1 日齡開始 %復(fù)合酪酸菌制劑飲水，10 天后攻毒； 4 組：只在 10 天后攻毒； 5 組：先攻毒，再以 %復(fù)合酪酸菌制劑飲水； 6 組：只攻毒。 各組雞只按正常免疫程序進行。實驗組飼養(yǎng)管理條件完全一致。實驗過程中,每天觀察各組雞的采食量、精神狀況、糞便等，記錄各組死亡雞只數(shù)，同時剖檢病死雞只，判定病因。 增重測定：各實驗組分別于 14 日齡、35 日齡，實驗結(jié)束，稱取每組雞只的體重，記錄采食量。 臨床觀察：攻毒后連續(xù)觀察 2 周，每天觀察臨床癥狀，剖檢病死雞只，實驗結(jié)束稱取各組雞只體重，計算平均增重，然后分別剖檢存活雞只，觀察病變程度，同時進行 X2 檢驗，計算該制劑的有效率和治愈率。 結(jié)果與分析 對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響結(jié)果見表 31結(jié)果表明,平均增重比對照組提高了 %；料肉比對照組降低了 %。經(jīng) t 檢驗差異極顯著（P ＜ ） ，說明復(fù)合酪酸菌制劑能明顯促進肉仔雞的生長，促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高飼料轉(zhuǎn)化率。表 31：復(fù)合酪酸菌制劑對 1—49 日齡肉仔雞生產(chǎn)性能的影響日齡組別1 14 35 49平均增重（g/只）平均耗料（g/只）料肉比 Ⅰ Ⅱ 預(yù)防實驗結(jié)果先以復(fù)合酪酸菌制劑按 %比例給雞飲水 10 天，后用大腸埃希氏菌液 ml 攻毒，雞群未出現(xiàn)明顯的精神不振、食欲下降、下痢等癥狀，攻毒 20 天后，30剖檢所有實驗雞只，實驗雞只均未見典型的大腸桿菌病變。而攻毒對照組，在攻毒 24h 后，有些雞只就出現(xiàn)精神不振、食欲下降等癥狀，繼而拉稀便，糞便帶有惡臭，3 天后雞只出現(xiàn)死亡，到 20 天時死亡 23 只，剖檢病死雞，可見明顯的肝臟腫大，邊緣有出血點，有些可見肝包炎，氣囊混濁并伴有心包炎。實驗結(jié)果見表 32表 32 預(yù)防實驗結(jié)果組別 數(shù)量（只） 死亡數(shù)（只）存活數(shù)（只）死亡率（%）有效率（%）20 1 19 5% 95%Ⅲ20 0 20 0 100%20 8 12 40%Ⅳ20 9 11 45%由此可見，復(fù)合酪酸菌制劑對肉仔雞的大腸桿菌病有很好的預(yù)防作用，有效率達 %，而與對照組相比差異極顯著(P＜ ＝。 治療實驗結(jié)果：先用 大腸埃希氏菌在 10 日齡給雛雞攻毒,然后用復(fù)合酪酸菌制劑 %飲水。雛雞攻毒后，出現(xiàn)怕冷、扎堆、精神不振、食欲下降或廢絕，排灰白色、黃白色稀便等癥狀。24h 出現(xiàn)部分死亡。對病死雞只進行剖檢，可見肝臟腫大，邊緣有出血點，肝被膜增厚，嚴重者伴有心包炎。14 天后剖檢所有實驗雞只，觀察心臟、肝臟的恢復(fù)情況，結(jié)果見表 33。表 33 攻毒后的治療情況組別 實驗數(shù)（只）死亡數(shù)（只）存活數(shù)（只）死亡率（%）有效率（%）20 3 17 15% 85%Ⅴ20 4 16 20% 80%20 9 11 45%Ⅵ20 9 11 45% 由此可見，復(fù)合酪酸菌制劑對肉仔雞的大腸桿菌病的治療效果不錯，有效率達 80%以上，與對照組相比較，死亡率降低 %。 小結(jié)通過以上實驗，復(fù)合酪酸菌制劑不僅能夠促進肉仔雞的生長、發(fā)育，降低料肉比，提高飼料報酬，而且對肉仔雞的腸道疾病有很好的預(yù)防和治療效果。2. 復(fù)合酪酸菌制劑對肉雞生產(chǎn)性能和腸道菌群的影響試驗 材料與方法31 試驗材料(1) 復(fù)合酪酸菌液體制劑：山東省平陰縣畜牧局提供。(2) 基礎(chǔ)日糧：由淄博六和集團提供肉雞前期、中期、后期的全價顆粒料。(3) 實驗雞群： AA 雞，3 日齡，5000 只。(4) 改良 MRS 培養(yǎng)計，麥康凱培養(yǎng)基。 時間與地點實驗于 2022 年 4 月 20 日—2022 年 6 月 12 日，在平陰普財種雞場進行。 試驗方法： 分組：試驗在兩棟雞舍進行，每棟雞舍 2500 只，因此分成二組，一組為試驗組，在飲水中以 %比例添加復(fù)合酪酸菌制劑，另一組為對照組，不添加微生態(tài)制劑。 飼養(yǎng)管理：采用室內(nèi)平養(yǎng)，免疫程序正常進行。 測定的項目和方法分別記錄兩組肉雞的初始重、出欄重、飼料消耗、死亡淘汰情況；計算飼料報酬、增重效果、死淘率。觀察兩組雞群的精神狀態(tài)、糞便狀態(tài)、雞群整齊度等以及用藥情況、病死雞只的剖檢診斷等。 糞便中微生物的測定分別于 14 日齡和 35 日齡，每組隨機選 10 只雞，采用擠壓肛門法，無菌收集糞便 — 置已稱重的玻璃珠的干燥滅菌小試管中,再稱重、計算出糞便重量，并加滅菌生理鹽水，稀釋 10 倍，振蕩 1 分鐘，再依次 10 倍系列稀釋，選擇合適的稀釋度，分別接種選擇性培養(yǎng)基上。雙歧桿菌用改良 MRS 培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng) 48h，大腸桿菌用麥康凱培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng) 24h。 結(jié)果與分析 觀察記錄：試驗組與對照組比較，在 15 天后，試驗組雞群精神狀態(tài)很好，食欲旺盛、糞便正常，雞屁股較干凈，雞群大小整齊，對照組雞群不太整齊，有些雞只糞便粘到屁股上。在 7 日齡新城疫滴鼻免疫后，21 日齡 ND 二免后，為了預(yù)防呼吸道病，投用抗生素 2 天來預(yù)防。 對肉雞生產(chǎn)性能的影響結(jié)果見表 34：表 34 對肉雞生產(chǎn)性能的影響結(jié)果組別 數(shù)量（只）死淘數(shù)（只）平均始重（g）平均末重（kg）均耗料（kg）平均增重（kg）料肉比死淘率%試驗 2500 21 32組對照組2500 60 可以看出，在試驗期內(nèi)，實驗組較對照組平均增重提高了 %，料肉比降低了 %，死淘率降低了 65%，經(jīng) t 檢驗差異極顯著（P＜） 。說明復(fù)合酪酸菌制劑能夠明顯促進肉雞生長提高飼料報酬，降低死淘率。 對腸道菌群的影響，細菌計數(shù)結(jié)果見表 35：表 35 酪酸菌制劑對鮮雞糞中雙歧桿菌和大腸桿菌的影響（logCFU，X177。SD ，n=10）日齡 組別 雙歧桿菌（*10 9CFU/g）大腸桿菌（ *108CFU/g）試驗組（T）177。* 177。對照組（C ）177。 177。試驗組（T）177。* 177。對照組（C ）177。 177。 * 與對照組比較 P≤ Δ 與試驗組比較 P≤結(jié)果表明，14 日齡時，服用復(fù)合酪酸菌制劑的雞群腸道內(nèi)的雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加,大腸桿菌數(shù)量減少,差異有極顯著性(P≤)，而對照組大腸桿菌數(shù)量明顯增加，比試驗組相比，差異極顯著(P≤)。35 日齡時，試驗組雞的腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量明顯增加，大腸桿菌數(shù)量減少，差異有極顯著性(P≤)，對照組腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(P≤)。14 日齡時和 35 日齡時相比，雞腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量，差異不顯著(P≤)。說明復(fù)合酪酸菌制劑能夠促進腸道中雙歧桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長。 小結(jié)通過以上實驗，復(fù)合酪酸菌制劑不僅能夠明顯促進肉雞生長，提高飼料報酬，降低死淘率，而且能夠促進腸道中雙歧桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長，減少腸道疾病的發(fā)生。 材料與方法 試驗材料(1) 復(fù)合酪酸菌液體制劑：山東省平陰縣畜牧局提供。33(2) 基礎(chǔ)日糧：參照中國蛋雞飼養(yǎng)標準配制，日糧中不含抗生素，由淄博六合集團飼料廠提供。(3) 實驗雞群：同一雞群中 280 日齡海蘭白商品代蛋雞 600 只 試驗時間及地點：2022 年 9 月 10 日——2022 年 12 月 8 日在平陰普財養(yǎng)雞場進行。 試驗方法： 試驗分組：將雞隨機分為兩組，每組 300 只，一組為試驗組，在飲水中以 %比例添加復(fù)合酪酸菌制劑，另一組為對照組，不添加微生態(tài)制劑。 飼養(yǎng)管理：采用室內(nèi)籠養(yǎng)，相同的環(huán)境條件，每天喂料 3 次，自由采食，自由飲水，按正常程序?qū)﹄u只免疫。 試驗記錄 固定專人每天記錄兩組雞的采食量、產(chǎn)蛋枚數(shù)、蛋重、破損蛋數(shù)(包括軟皮蛋、破碎蛋)，并且觀察雞的健康、發(fā)病、死亡情況（腸道病發(fā)病率、死亡率統(tǒng)計以觀察到肛門周圍被糞便污染、精神不佳為準，健康雞采食、精神、排糞正常） 。試驗結(jié)束后，計算各組產(chǎn)蛋率、平均蛋重、死淘率和料蛋比，進行經(jīng)濟效益分析。 結(jié)果與分析 試驗組與對照組生產(chǎn)性能比較見表 36。表 36 生產(chǎn)性能比較組別只數(shù)試驗天數(shù)產(chǎn)蛋總數(shù)(枚)總蛋重(kg)平均蛋重(g)產(chǎn)蛋率(％)死亡數(shù)(只)死淘率( ％)總耗料(kg)料蛋比試驗組300 91 19929 10 3012 ：1對照組300 91 16926 31 2946 ：l試驗期內(nèi)，兩組間飼料消耗量有些差異，主要是其死亡數(shù)不同的緣故。由表 36 可知：試驗組的料蛋比比對照組降低了 ％，經(jīng)方差分析，差異極顯著(P)；產(chǎn)蛋率比對照組提高了 ％，差異顯著 (P)；產(chǎn)蛋總重量比對照組提高了 231kg：平均蛋重提高了 ％；死淘率比對照組降低了68％，差異極顯著(P) 。34 試驗組與對照組經(jīng)濟效益分析見表 37表 37 經(jīng)濟效益分析產(chǎn) 蛋 收 入 飼 料 費 用組別 只數(shù) 總重量