【正文】 Ⅱ：酵母浸汁 、蛋白胨 、牛肉膏 、葡萄糖 、瓊脂 、蒸餾水 1000ml、pH ~ 方法 抑菌作用測(cè)定方法：抑菌活性測(cè)定檢測(cè)采用杯碟法。⑴ 磷酸緩沖液（pH ）制備：取磷酸氫二鉀 2g 與磷酸二氫鉀 8g，加水使成 1000ml，濾過，在 115℃滅菌 30 分鐘，備用。⑵ 菌懸液的制備挑取大腸埃希氏菌，接種于 LB 瓊脂斜面上，在 37℃恒溫箱培養(yǎng) 20—24 小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，即得。⑶ 測(cè)試溶液的制備A：硫酸新霉素 PBS 液：精密稱取硫酸新霉素 ,溶解于 1000ml滅菌磷酸鹽緩沖液中。B：菌液離心液：分別量取乳酸菌 48h， 發(fā)酵液 ，酪酸菌48h 的發(fā)酵液 以及復(fù)合酪酸菌制劑 于 EP 管中，8000rpm 離心 5 分鐘，取上清。⑷ 平板培養(yǎng)基制備取內(nèi)徑 90mm，高 16—17mm 的平皿（已滅菌） ，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基Ⅱ20ml，使在皿底均勻攤布，防治，使其凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基Ⅱ適量加熱融化后，放冷至 45℃左右，加入大腸桿菌菌懸液適量，搖勻，在每 1 平皿中分別加入 5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置冷卻后，每皿中以等距離均勻安置牛津杯，用陶瓦圓蓋備用。 有機(jī)酸的檢測(cè)與排除發(fā)酵液對(duì)指示菌有抑制作用，可能是酸的作用。采用氣相色譜法分析樣品中的有機(jī)酸，根據(jù)分析結(jié)果，采用 pH 值 的乳酸做對(duì)照以排除有機(jī)酸的干擾。 檢定⑴ 在已做好的雙碟中，放置 5 個(gè)牛津杯，在每個(gè)杯中分別滴滿硫酸新霉素PBS 液、L—13 離心上清液、CB2 離心上清液、復(fù)合酪酸菌制劑離心上清液， 的乳酸溶液，放置溫箱中 37℃培養(yǎng) 16 小時(shí)。2 雙碟中，放置 4 個(gè)牛津杯，分別滴入 L—13 上清液、CB2 離心上清液、27復(fù)合酪酸菌制劑離心上清液、 的乳酸溶液，37℃溫箱中孵育 16 小時(shí)。 有機(jī)酸的檢測(cè)與排除通過檢測(cè)，復(fù)合酪酸菌制劑中所含的有機(jī)酸主要為乳酸，見表 21。樣品pH 值為 的乳酸溶液作對(duì)照，檢測(cè)有機(jī)酸對(duì)抑菌作用無影響。因此可排除對(duì)抑菌作用的影響。表 21 有機(jī)酸含量有機(jī)酸 甲酸 乙酸 丙酸 丁酸 乳酸含量（g/L） 抑菌結(jié)果結(jié)果發(fā)現(xiàn)：L13 、新霉素和復(fù)合酪酸菌制劑有抑菌作用，CB2 和乳酸無抑制作用。見表 22 及附圖 5。表 22 幾種試樣液的抑菌效果樣液 平均抑菌直徑（mm）L13 新霉素 CB2 0復(fù)合制劑 乳酸 0由以上試驗(yàn)結(jié)果說明，乳酸菌 L13 能夠產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)——細(xì)菌素，復(fù)合酪酸菌制劑的抑菌作用是由乳酸菌產(chǎn)生抑菌物質(zhì)造成的，該抑菌物質(zhì)濃度越高，抑菌作用越大。28實(shí)驗(yàn)三 復(fù)合酪酸菌制劑動(dòng)物飼喂試驗(yàn) ：(1) 供試菌株：大腸埃希菌 SW 株，山東省生物研究所提供；(2) 實(shí)驗(yàn)藥品：復(fù)合酪酸菌制劑，山東省平陰縣畜牧局研制生產(chǎn)；(3) 培養(yǎng)基： LB 培養(yǎng)基；(4) 實(shí)驗(yàn)雞只： 1 日齡健康 AA 雞 260 只，購(gòu)自濰坊市大正種雞場(chǎng)；(5) 飼料：雛雞全價(jià)配合飼料，淄博六和集團(tuán)提供；(6) 飼養(yǎng)方式：采用籠養(yǎng)方式； 實(shí)驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)：2022 年 2 月 10 日—2022 年 3 月 31 日；山東省平陰畜牧局。 方法 增菌培養(yǎng)：將大腸埃希菌接種于 LB 培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng) 24h。經(jīng)活菌計(jì)數(shù)，每毫升含細(xì)菌數(shù) 2*109個(gè)。 攻毒及攻毒劑量的測(cè)定：取實(shí)驗(yàn)雞 20 只，隨機(jī)分為 4 組，分別經(jīng)肌肉注射已計(jì)數(shù)的培養(yǎng)菌，第 1 組為 ml/只 (含活菌約 億個(gè)) ，第 2 組為 ml/只( 含活菌約 億個(gè))，第 3組為 ml/只( 含活菌約 億個(gè)), 第 4 組為 ml/只(含活菌約 億個(gè))。攻毒 24h 后，第 1 組未見死亡，第 2 組死亡 1 只（死亡率 20%） ，第 3 組死亡 2 只29（死亡率 40%） ，第 4 組死亡 3 只（死亡率 60%） 。所以將攻毒劑量定為 ml/只。 試驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)分為 6 組，每組 40 只雛雞（0—6 周齡） ，設(shè) 2 個(gè)重復(fù)。具體分組為：1 組：1 日齡開始 %復(fù)合酪酸菌制劑飲水； 2 組：空白對(duì)照； 3 組：1 日齡開始 %復(fù)合酪酸菌制劑飲水，10 天后攻毒； 4 組：只在 10 天后攻毒； 5 組：先攻毒，再以 %復(fù)合酪酸菌制劑飲水； 6 組：只攻毒。 各組雞只按正常免疫程序進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)組飼養(yǎng)管理?xiàng)l件完全一致。實(shí)驗(yàn)過程中,每天觀察各組雞的采食量、精神狀況、糞便等，記錄各組死亡雞只數(shù)，同時(shí)剖檢病死雞只，判定病因。 增重測(cè)定：各實(shí)驗(yàn)組分別于 14 日齡、35 日齡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束，稱取每組雞只的體重，記錄采食量。 臨床觀察：攻毒后連續(xù)觀察 2 周，每天觀察臨床癥狀，剖檢病死雞只，實(shí)驗(yàn)結(jié)束稱取各組雞只體重，計(jì)算平均增重，然后分別剖檢存活雞只，觀察病變程度，同時(shí)進(jìn)行 X2 檢驗(yàn)，計(jì)算該制劑的有效率和治愈率。 結(jié)果與分析 對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響結(jié)果見表 31結(jié)果表明,平均增重比對(duì)照組提高了 %；料肉比對(duì)照組降低了 %。經(jīng) t 檢驗(yàn)差異極顯著（P ＜ ） ，說明復(fù)合酪酸菌制劑能明顯促進(jìn)肉仔雞的生長(zhǎng)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高飼料轉(zhuǎn)化率。表 31：復(fù)合酪酸菌制劑對(duì) 1—49 日齡肉仔雞生產(chǎn)性能的影響日齡組別1 14 35 49平均增重（g/只）平均耗料（g/只）料肉比 Ⅰ Ⅱ 預(yù)防實(shí)驗(yàn)結(jié)果先以復(fù)合酪酸菌制劑按 %比例給雞飲水 10 天，后用大腸埃希氏菌液 ml 攻毒，雞群未出現(xiàn)明顯的精神不振、食欲下降、下痢等癥狀，攻毒 20 天后，30剖檢所有實(shí)驗(yàn)雞只，實(shí)驗(yàn)雞只均未見典型的大腸桿菌病變。而攻毒對(duì)照組，在攻毒 24h 后，有些雞只就出現(xiàn)精神不振、食欲下降等癥狀，繼而拉稀便，糞便帶有惡臭，3 天后雞只出現(xiàn)死亡，到 20 天時(shí)死亡 23 只，剖檢病死雞，可見明顯的肝臟腫大，邊緣有出血點(diǎn)，有些可見肝包炎，氣囊混濁并伴有心包炎。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 32表 32 預(yù)防實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別 數(shù)量（只） 死亡數(shù)（只）存活數(shù)（只）死亡率（%）有效率（%）20 1 19 5% 95%Ⅲ20 0 20 0 100%20 8 12 40%Ⅳ20 9 11 45%由此可見，復(fù)合酪酸菌制劑對(duì)肉仔雞的大腸桿菌病有很好的預(yù)防作用，有效率達(dá) %，而與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜ ＝。 治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果：先用 大腸埃希氏菌在 10 日齡給雛雞攻毒,然后用復(fù)合酪酸菌制劑 %飲水。雛雞攻毒后，出現(xiàn)怕冷、扎堆、精神不振、食欲下降或廢絕，排灰白色、黃白色稀便等癥狀。24h 出現(xiàn)部分死亡。對(duì)病死雞只進(jìn)行剖檢，可見肝臟腫大，邊緣有出血點(diǎn)，肝被膜增厚，嚴(yán)重者伴有心包炎。14 天后剖檢所有實(shí)驗(yàn)雞只，觀察心臟、肝臟的恢復(fù)情況，結(jié)果見表 33。表 33 攻毒后的治療情況組別 實(shí)驗(yàn)數(shù)（只）死亡數(shù)（只）存活數(shù)（只）死亡率（%）有效率（%）20 3 17 15% 85%Ⅴ20 4 16 20% 80%20 9 11 45%Ⅵ20 9 11 45% 由此可見，復(fù)合酪酸菌制劑對(duì)肉仔雞的大腸桿菌病的治療效果不錯(cuò)，有效率達(dá) 80%以上，與對(duì)照組相比較，死亡率降低 %。 小結(jié)通過以上實(shí)驗(yàn)，復(fù)合酪酸菌制劑不僅能夠促進(jìn)肉仔雞的生長(zhǎng)、發(fā)育，降低料肉比，提高飼料報(bào)酬，而且對(duì)肉仔雞的腸道疾病有很好的預(yù)防和治療效果。2. 復(fù)合酪酸菌制劑對(duì)肉雞生產(chǎn)性能和腸道菌群的影響試驗(yàn) 材料與方法31 試驗(yàn)材料(1) 復(fù)合酪酸菌液體制劑：山東省平陰縣畜牧局提供。(2) 基礎(chǔ)日糧：由淄博六和集團(tuán)提供肉雞前期、中期、后期的全價(jià)顆粒料。(3) 實(shí)驗(yàn)雞群： AA 雞，3 日齡，5000 只。(4) 改良 MRS 培養(yǎng)計(jì)，麥康凱培養(yǎng)基。 時(shí)間與地點(diǎn)實(shí)驗(yàn)于 2022 年 4 月 20 日—2022 年 6 月 12 日，在平陰普財(cái)種雞場(chǎng)進(jìn)行。 試驗(yàn)方法： 分組：試驗(yàn)在兩棟雞舍進(jìn)行，每棟雞舍 2500 只，因此分成二組，一組為試驗(yàn)組，在飲水中以 %比例添加復(fù)合酪酸菌制劑，另一組為對(duì)照組，不添加微生態(tài)制劑。 飼養(yǎng)管理：采用室內(nèi)平養(yǎng)，免疫程序正常進(jìn)行。 測(cè)定的項(xiàng)目和方法分別記錄兩組肉雞的初始重、出欄重、飼料消耗、死亡淘汰情況；計(jì)算飼料報(bào)酬、增重效果、死淘率。觀察兩組雞群的精神狀態(tài)、糞便狀態(tài)、雞群整齊度等以及用藥情況、病死雞只的剖檢診斷等。 糞便中微生物的測(cè)定分別于 14 日齡和 35 日齡，每組隨機(jī)選 10 只雞，采用擠壓肛門法，無菌收集糞便 — 置已稱重的玻璃珠的干燥滅菌小試管中,再稱重、計(jì)算出糞便重量，并加滅菌生理鹽水，稀釋 10 倍，振蕩 1 分鐘，再依次 10 倍系列稀釋，選擇合適的稀釋度，分別接種選擇性培養(yǎng)基上。雙歧桿菌用改良 MRS 培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng) 48h，大腸桿菌用麥康凱培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng) 24h。 結(jié)果與分析 觀察記錄：試驗(yàn)組與對(duì)照組比較，在 15 天后，試驗(yàn)組雞群精神狀態(tài)很好，食欲旺盛、糞便正常，雞屁股較干凈，雞群大小整齊，對(duì)照組雞群不太整齊，有些雞只糞便粘到屁股上。在 7 日齡新城疫滴鼻免疫后，21 日齡 ND 二免后，為了預(yù)防呼吸道病，投用抗生素 2 天來預(yù)防。 對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響結(jié)果見表 34：表 34 對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響結(jié)果組別 數(shù)量（只）死淘數(shù)（只）平均始重（g）平均末重（kg）均耗料（kg）平均增重（kg）料肉比死淘率%試驗(yàn) 2500 21 32組對(duì)照組2500 60 可以看出，在試驗(yàn)期內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組平均增重提高了 %，料肉比降低了 %，死淘率降低了 65%，經(jīng) t 檢驗(yàn)差異極顯著（P＜） 。說明復(fù)合酪酸菌制劑能夠明顯促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)提高飼料報(bào)酬，降低死淘率。 對(duì)腸道菌群的影響，細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果見表 35：表 35 酪酸菌制劑對(duì)鮮雞糞中雙歧桿菌和大腸桿菌的影響（logCFU，X177。SD ，n=10）日齡 組別 雙歧桿菌（*10 9CFU/g）大腸桿菌（ *108CFU/g）試驗(yàn)組（T）177。* 177。對(duì)照組（C ）177。 177。試驗(yàn)組（T）177。* 177。對(duì)照組（C ）177。 177。 * 與對(duì)照組比較 P≤ Δ 與試驗(yàn)組比較 P≤結(jié)果表明，14 日齡時(shí)，服用復(fù)合酪酸菌制劑的雞群腸道內(nèi)的雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加,大腸桿菌數(shù)量減少,差異有極顯著性(P≤)，而對(duì)照組大腸桿菌數(shù)量明顯增加，比試驗(yàn)組相比，差異極顯著(P≤)。35 日齡時(shí)，試驗(yàn)組雞的腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量明顯增加，大腸桿菌數(shù)量減少，差異有極顯著性(P≤)，對(duì)照組腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(P≤)。14 日齡時(shí)和 35 日齡時(shí)相比，雞腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量，差異不顯著(P≤)。說明復(fù)合酪酸菌制劑能夠促進(jìn)腸道中雙歧桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。 小結(jié)通過以上實(shí)驗(yàn)，復(fù)合酪酸菌制劑不僅能夠明顯促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，提高飼料報(bào)酬，降低死淘率，而且能夠促進(jìn)腸道中雙歧桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，減少腸道疾病的發(fā)生。 材料與方法 試驗(yàn)材料(1) 復(fù)合酪酸菌液體制劑：山東省平陰縣畜牧局提供。33(2) 基礎(chǔ)日糧：參照中國(guó)蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，日糧中不含抗生素，由淄博六合集團(tuán)飼料廠提供。(3) 實(shí)驗(yàn)雞群：同一雞群中 280 日齡海蘭白商品代蛋雞 600 只 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)：2022 年 9 月 10 日——2022 年 12 月 8 日在平陰普財(cái)養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行。 試驗(yàn)方法： 試驗(yàn)分組：將雞隨機(jī)分為兩組，每組 300 只，一組為試驗(yàn)組，在飲水中以 %比例添加復(fù)合酪酸菌制劑，另一組為對(duì)照組，不添加微生態(tài)制劑。 飼養(yǎng)管理：采用室內(nèi)籠養(yǎng)，相同的環(huán)境條件，每天喂料 3 次，自由采食，自由飲水，按正常程序?qū)﹄u只免疫。 試驗(yàn)記錄 固定專人每天記錄兩組雞的采食量、產(chǎn)蛋枚數(shù)、蛋重、破損蛋數(shù)(包括軟皮蛋、破碎蛋)，并且觀察雞的健康、發(fā)病、死亡情況（腸道病發(fā)病率、死亡率統(tǒng)計(jì)以觀察到肛門周圍被糞便污染、精神不佳為準(zhǔn)，健康雞采食、精神、排糞正常） 。試驗(yàn)結(jié)束后，計(jì)算各組產(chǎn)蛋率、平均蛋重、死淘率和料蛋比，進(jìn)行經(jīng)濟(jì)效益分析。 結(jié)果與分析 試驗(yàn)組與對(duì)照組生產(chǎn)性能比較見表 36。表 36 生產(chǎn)性能比較組別只數(shù)試驗(yàn)天數(shù)產(chǎn)蛋總數(shù)(枚)總蛋重(kg)平均蛋重(g)產(chǎn)蛋率(％)死亡數(shù)(只)死淘率( ％)總耗料(kg)料蛋比試驗(yàn)組300 91 19929 10 3012 ：1對(duì)照組300 91 16926 31 2946 ：l試驗(yàn)期內(nèi)，兩組間飼料消耗量有些差異，主要是其死亡數(shù)不同的緣故。由表 36 可知：試驗(yàn)組的料蛋比比對(duì)照組降低了 ％，經(jīng)方差分析，差異極顯著(P)；產(chǎn)蛋率比對(duì)照組提高了 ％，差異顯著 (P)；產(chǎn)蛋總重量比對(duì)照組提高了 231kg：平均蛋重提高了 ％；死淘率比對(duì)照組降低了68％，差異極顯著(P) 。34 試驗(yàn)組與對(duì)照組經(jīng)濟(jì)效益分析見表 37表 37 經(jīng)濟(jì)效益分析產(chǎn) 蛋 收 入 飼 料 費(fèi) 用組別 只數(shù) 總重量