【文章內容簡介】 得甜菊糖基轉移酶基因片段 。 ? 根據獲得的基因片段設計引物 GSTr 和GSTf ， 分別與 cDNA文庫的 T3 和 T7 通用引物擴增獲得全長核苷酸序列的甜菊糖基轉移酶基因。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY The level of expression of plant glycosyltransferases TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY Transgenic pigs with GnTIII TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY Rebinant plant glycosyltransferases reported recently (2022–2022) TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 葡糖基轉移酶多肽疫苗 HDS免疫大鼠的實驗研究 ? 葡糖基轉移酶 是致 齲 菌的重要致病因素之一 ， 具有利用 蔗糖 合成細胞外葡聚 糖 的催化活性和 結合 葡聚糖的活性 ， 在細菌附著和菌斑形成的過程中起著重要作用 。 ? 抑制 GTF活性 ， 減少葡聚糖的產生是控制菌震斑預防 齲 病的重要手段之一 。 ? 目的： 動物體內研究葡糖基轉移酶多肽疫苗 HDS 免疫原性和防齲效果。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 葡糖基轉移酶多肽疫苗 HDS免疫大鼠的實驗研究 ? 方法： 構建大鼠人工齲模型，分別用人工抗原HDSKLH， 多肽抗原 HDS， 葡糖基轉移酶(GTF)免疫大鼠，酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠血清和唾液中抗 HDS、 GTF抗體；體視顯微鏡下觀察各組大鼠磨牙齲壞情況，并用Keyes計分法計分。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 葡糖基轉移酶多肽疫苗 HDS免疫大鼠的實驗研究 ? 結果： ? HDSKLH免疫組大鼠唾液、血清中抗 HDS IgG和 IgA 水平均高于對照組 (P )；HDSKLH， HDS， GTF免疫組大鼠齲Keyes 計分均低于對照組 ( P 0101)， 光滑面防齲效果最為顯著。 ? 結論： ? 人工抗原 HDSKLH 能刺激機體產生針對GTF 的保護性免疫 ， 并減少實驗大鼠齲齒發(fā)生。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 葡糖基轉移酶抗體的制備與研究 ? 以葡糖基轉移酶免疫產蛋母雞。 ? 應用酶聯(lián)免疫吸附測定法測定雞蛋黃中免疫球蛋白的活性。 ? 經葡糖基轉移酶免疫后可以得到高效價的蛋黃抗體，其抗遠援鏈球菌的效價約為一般IgY的 16倍。 ? 體外模擬實驗表明經遠援鏈球菌免疫的蛋黃抗體確實有抗牙菌斑形成的能力，從而具備防齲齒的功效。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 第二節(jié) 糖苷酶 ? 糖 苷 酶 (G1ycosidase)是一大類催化糖 苷 鍵水 解 的酶 類。 ? 其主要分布在動物、植物、微生物體內，擔負著水解各種 糖 苷 、寡 糖 、多 糖 、復雜多糖以供機體 利 用的生物學功能 。 ? 大多數糖苷酶水解典型 O糖苷鍵 ，也有部分水解 N糖苷鍵 ，有一些糖苷酶水解 S糖苷鍵 。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 一、 糖苷酶的分類 ? 按照酶的作用方式和水解產物可把糖苷酶分為兩大類： ? 外切糖苷酶類（ Exoglycosidases)： 它們的作用方式是從糖鏈的非還原端開始，逐步將糖苷鍵切斷，所得到的水解產物為單糖或雙糖； ? 內切糖苷酶類（ Endoglycosidases)： 它們從糖鏈的中間打斷糖苷鍵，水解產物為分子量小于原來底物的寡糖。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY Exo14BetaDGlycanase TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 二、 糖苷酶的分布 ? 糖苷酶在自然界有廣泛分布，幾乎所有動物、植物和微生物體內都能找到糖苷鍵。 ? 在哺乳動物中，血清、血細胞、體液、各種組織器官中都有存在。 ? 許多軟體動物也是糖苷酶的良好來源。 ? 植物種子里有豐富的糖苷酶。 ? 一些細菌、酵母、霉菌的糖苷酶已有相當的研究報道。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 三、 糖苷酶的命名 ? 糖苷酶的命名與它的底物專一性密切相關。 ? 底物專一性包含： ? 糖基一側的專一性； ? 糖苷鍵的 ??異頭專一性； ? 糖苷配基一側的專一性。 ? 糖苷酶的命名是根據糖基一側的專一性和糖苷鍵的 ??異頭專一性來命名的。 ? ?葡萄糖苷酶、 ?葡萄糖苷酶、 ?半乳糖苷酶、 ?甘露 糖苷酶等。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1)糖基一側的專一性 (2)糖苷鍵的 ??異頭專一性 (3)糖基配基一側的專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 四、 糖苷酶的生物學功能 (1)分泌到細胞外的糖苷酶，參與營養(yǎng)物質的胞外消化吸收過程。 (2)細胞內的糖苷酶，如動物細胞內的溶酶體中有一系列糖苷酶，它們的功能是降解胞內的糖復合物。 (3)參與糖鏈的合成，如在糖蛋白生物合成過程中，參加 N型糖鏈的“剪枝”， “修剪”成較短分支 (Man3GlcNAcAsn)結構，然后再由糖基轉移酶加上新的糖基，形成不同結構的糖鏈。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY Biological Roles of Nglycanase in Cells TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 五、一些常見的 糖苷酶 ? ?D甘露糖苷酶 ? ?D甘露糖苷酶 ? ? D木糖苷酶 ? ?,?鼠李糖苷酶 ? ? D葡萄糖苷酶 ? ?D葡萄糖苷酶： 海藻糖酶、淀粉葡萄糖苷酶、葡聚糖蔗糖酶、淀粉麥芽糖酶。 ? 唾液酸酶 (神經氨酸酶類 )。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 一些常見的 糖苷酶 ? ?D半乳糖苷酶 ? ? D半乳糖苷酶 ? ?DN乙酰半乳糖胺酶 ? ? DN乙酰己糖胺酶 ? ? DN乙酰葡糖胺酶 ? ?DN乙酰半乳糖胺酶 ? ? D巖澡塘苷酶 ? ?L巖澡塘苷酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 水解不同類型糖苷鍵的糖苷酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 六、 糖苷酶的制備方法 ? 黃芪皂苷糖苷酶產生菌的篩選 ? 將篩選用 菌株 Absida sp. A9r 、 A84r 、A9r 、 A8r 、 A38r 、 Arr進行培養(yǎng)制備酶液 ? 以黃芪總皂苷為底物進行誘導 ? 薄層層析法 檢測水解結果 。 ? 結果： A bsida sp. A3r 菌所產酶液能較好的水解黃芪總皂苷中糖基較多的皂苷 ， 進而生成糖基較少的皂苷。 TOOLS FOR GLY