氨基酸與蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)(編輯修改稿)
2025-06-03 18:01 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 G l nC H 3N 端 C 端肽鍵? 在多肽鏈中， 氨基酸殘基按一定的順序排列，這種排列順序稱為氨基酸順序。 ? 方向性： 一條多肽鏈有兩個末端，自由 ?氨基，稱為氨基端或 N端； 游離 ?羧基，稱為羧基端或 C端。 ? 氨基酸的順序： N端 → C端 ? 如上述五肽可表示為： SerValTyrAspGlu ? 絲氨 酰 纈氨 酰 酪氨 酰 天冬氨 酰 谷氨 酸 肽單位 主鏈： 側(cè)鏈 二、肽的理化性質(zhì) 1. 熔點高。 這說明它和氨基酸一樣，是以偶極離子形式形成離子晶格而存在的。 2. 具有酸堿兩性性質(zhì)和等電點。 肽的酸堿性質(zhì)主要來自游離末端 ?NH2和游離末端 ?COOH以及側(cè)鏈 R上可解離的基團(tuán)。每一種肽都有其相應(yīng)的等電點。 末端 ?NH2,? COOH比游離氨基酸的酸堿度降低。 3. 具有旋光性。 這是由于肽中有不對稱 C原子存在。 （三肽以上） 。 ? 雙縮脲（ H2NCONHCONH2） 是兩分子的尿素經(jīng)加熱失去一分子 NH3而得到的產(chǎn)物。 肽和蛋白特有，氨基酸無。 一般含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物與 CuSO4堿性溶液都能發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成紫紅色或藍(lán)紫色的復(fù)合物。 用途：測定肽或蛋白質(zhì)含量。 三、天然存在的重要多肽 ? 在生物體中，多肽最重要的存在形式是作為蛋白質(zhì)的亞單位。 ? 但是，也有許多分子量比較小的多肽以游離狀態(tài)存在。這類多肽通常都具有特殊的生理功能，常稱為活性肽。 ? 如：腦啡肽；激素類多肽；抗生素類多肽； 谷胱甘肽 ；蛇毒多肽等。 ? 部分肽中含有 D氨基酸。 ? CONHCHCONHCH2COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH CH2 SH ? ? ? 保護(hù)巰基酶或含 Cys的蛋白質(zhì)中 SH的還原性 防止氧化物積累 GSH+GSHGSSG 第四節(jié)、蛋白的分離 根據(jù)： 所要提取的蛋白（目的蛋白）與其它蛋白（雜蛋白）的不同進(jìn)行分離。 ■ 溶解度不同 : 反相柱層析； 鹽析 ■ 分子量不同 : 透析； 凝膠過濾法 ■ 所帶電荷不同 : 電泳；離子交換層析 特有的親和力： 親和層析 一）鹽析法： 溶解度不同 ?不同的蛋白質(zhì)溶解度不同。且溶解度隨外界條件如鹽濃度， pH值，溫度等而變。 ■ 鹽對蛋白質(zhì)濃度的影響 ● 鹽溶 Saltingin: 加 少量 鹽 使 蛋白質(zhì)溶解度變大 ● 鹽析 Saltingout: 加 大量 鹽 使 蛋白質(zhì) 由溶液中 沉淀 出來 ■ 蛋白質(zhì) 溶解度 和 pH值及鹽濃度有關(guān) [NaCl](mol/L) pI pH 溶 解 度 蛋白的穩(wěn)定因素： （ 1）帶電層 （ 2）水化層 加入少量鹽：增加帶電層，促進(jìn)溶解。 鹽溶 Aggregate 蛋白質(zhì) 分子表面的疏水性 區(qū)域 ，聚集許多水分子，當(dāng) 加入 鹽時 ，這些水分子被抽出，暴露出來的疏水性 區(qū)域 互相 結(jié)合 ，形成 沉淀 。 ■ 鹽析 Saltingout ： Ionic strength 溶 解 度 Ammonium sulfate Sodium sulfate A little saltingin effect NH4 + SO4 2 = hydrophobic 不同蛋白的溶解度曲線 硫酸銨分級沉淀 二）凝膠過濾法： 分子量不同 ? 又稱為分子篩層析。依蛋白質(zhì)分子量的差異，通過具有 分子篩性質(zhì)的凝膠 而分離。 ? 葡聚糖凝膠 G10G200 ? 瓊脂糖凝膠 2B,4B,6B ? 聚丙烯酰胺凝膠 S100－ S600 ■ 凝膠顆粒 小分子進(jìn)入凝膠分子內(nèi)，被滯留 大分子在凝膠顆粒間移動，較快流出 溶劑流動方向 按分子量從大到小依次流出 問 題 ： 已知下列蛋白的分子量。問以凝膠過濾法洗脫時蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？（凝膠分級范圍為 5000～ 400， 000） 蛋白質(zhì) 分子量 肌紅蛋白 16， 900 過氧化氫酶 247， 500 細(xì)胞色素 C 13， 300 肌球蛋白 524， 800 血清蛋白 68， 500 ④ ② ⑤ ① ③ 三）親和層析法： 特定親和力 ? 如兩分子間有 專一性親和力 （ 特別的結(jié)合和識別能力
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