【文章內(nèi)容簡介】 分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 9 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 接受標(biāo)準(zhǔn) 含量和溶出度分析 ： 在預(yù)定的穩(wěn)定性期間內(nèi)，被測試的對照品或樣品溶液的含量與初始溶液相比 應(yīng) 在 %~%范圍內(nèi)。 有關(guān)物質(zhì)分析 ： 在預(yù)定的穩(wěn)定性期間內(nèi)，被測試的對照品 中已知物質(zhì) 的含量與初始溶液相比應(yīng) %~%范圍內(nèi)。 在預(yù)定的穩(wěn)定性期間內(nèi)，被測試的樣品溶液應(yīng)在下述幾方面與 0 天相似 ： a. RRT 可辨認(rèn)各已知雜質(zhì)； b. 含量在最小檢測量 （報告限） 以上的各雜質(zhì)峰數(shù)一致，且增長量不得大于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的 20%； c. 雜質(zhì)之和的絕對偏差不得超過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的 50%。 濾膜影響試驗 制劑中有涉及輔料的需要進(jìn)行過濾膜研究，應(yīng)對工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品溶液和稀釋液進(jìn)行過濾膜研究。 實驗 方法 過濾膜研究應(yīng)選取方法中指定的過濾膜進(jìn)行，不去 除 初濾液并連續(xù)收集一定體積的濾液，與控制樣品（未過濾的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和離心的樣品溶液）相比較。 接受標(biāo)準(zhǔn) 含量分析 ： 與控制溶液樣品比較，過濾樣品溶液的含量值應(yīng)在 %%之間，并由此決定初濾液應(yīng)該棄去的體積。 溶出度分析 ： 與控制溶液樣品比較，過濾樣品溶液的含量值應(yīng)在 98%102%之間，并由此決定初濾液應(yīng)該棄去的體積。 有關(guān)物質(zhì)分析 ： 與控制溶液樣品比較，過濾樣品溶液的含量值應(yīng)在 95%105%之間，并由此決定初濾液應(yīng)該棄去的體積 。 專屬性 在鑒別試驗、 雜質(zhì)檢查和含量測定的驗證期間，應(yīng)該進(jìn)行專屬性的研究。對于一些特定的被測組分不可能總是有一種專屬的分析方法。如果使用一個非專屬的分析方法，應(yīng)該用其它輔助的分析方法保證完全的專屬性。例如，當(dāng)原料藥放行采用滴定法來測定含量時，專屬性研究可以結(jié)合使用雜質(zhì)的測定方法。 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 10 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 鑒別試驗的專屬性 鑒別試驗應(yīng)該能區(qū)分有可能存在的結(jié)構(gòu)相似或結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的化合物。含有被分析物的樣品鑒別試驗成陽性，不含有被分析物的樣品鑒別試驗成陰性，應(yīng)充分排除潛在干擾物的影響，這樣才能確保一種方法的專屬性。 含量測定和雜質(zhì)測定的專屬性 實驗方法 對色 譜法來說， 要充分考慮兩個最相近組分的分離度，并用有代表性的色譜圖來證明專屬性。色譜圖應(yīng)該是清晰的，有組分標(biāo)示的，且應(yīng)該顯示出時間和時間范圍。其他的分析方法也同樣要有代表性的證明。 峰的保留時間和純度試驗可以證明被分析的色譜峰是否是單一組分。可以進(jìn)行峰純度試驗的分析技術(shù)包括： DAD(光電二極管陣列 )檢測器、 PDA（圖像光電二極管陣列）檢測器和 MS（質(zhì)譜）檢測器。 如果雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料是已知的并可得到的，則可通過在原料藥、制劑中加入一定量的雜質(zhì)、降解產(chǎn)物和 /或輔料來證明方法的專屬性 （選擇性及干擾）。 當(dāng)雜質(zhì) 或降解產(chǎn)物沒被鑒別或不能得到時，專屬性 可以通過 將 含有 一定量的 雜質(zhì) 或 降解產(chǎn)物的樣品測定 結(jié)果，與另一種成熟的方法 測定結(jié)果進(jìn)行比較 ，如藥典方法或經(jīng)論證的其他方法（與該方法不相關(guān)的方法）進(jìn)行比較來證實。 強(qiáng)制降解實驗 1） 對色譜法來說，樣品應(yīng)進(jìn)行強(qiáng)降解試驗并證明被分析物 HPLC 峰不被干擾。強(qiáng)制降解指將樣品置于相關(guān)的苛刻條件下進(jìn)行降解：光、高溫、高濕、酸 /堿水解和氧化。專屬性一般不做高濕試驗。 一般的強(qiáng)制降解條件如下表 （ 每類降解條件均需要一個控制樣品進(jìn)行核對 ） ，如有必要，可在方案中設(shè)置具體條件 ： 類型 條件 高溫 60℃ 下放置 7 天 高濕 25℃ ,90%RH，放置 7 天 強(qiáng)白光 * 總照度不低于 106Luxhr 紫外光 * 能量不低于 200whr/m2 酸 1N HCl中 60℃ 放置 2h 堿 1N NaOH 中 60℃ 放置 2h 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 11 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 氧化 ※ 10%雙氧水中常溫放置 20min *：可用同時具有強(qiáng)白光和紫外光強(qiáng)制降解條件的儀器 下 放置的樣品 ， 代替 分別 在強(qiáng)白光強(qiáng)制降解條件的儀器下放置 和紫外光強(qiáng)制降解條件的儀器下放置的樣品。 若雙重條件下降解過快，需要重新分開進(jìn)行實驗。 ：對于 API，在酸、堿條件下， 可 加強(qiáng) 反應(yīng) 至 24 小時 。 ※ ： 若有特殊的要求，可增加還原降解條件，即： 1mg/ml 硼氫化鈉水溶液中常溫放置20min。 如果在上述條件下 未觀察到明顯變化 ，說明此物質(zhì)穩(wěn)定，如果物質(zhì)變化太多的話，應(yīng)該重新調(diào)節(jié)實驗條件，降解范圍控制在 5~15%內(nèi)，采用稀釋后的各種降解樣品或控制樣品考察主峰的純度。 2） 所需數(shù)據(jù) ： 降解百分比、新出現(xiàn)的雜質(zhì)峰，如可以鑒定檢測到的峰，則應(yīng)和理論上可能的干擾物和降解產(chǎn)物進(jìn)行比較討論。降解前和降解后空白、樣品的色譜圖。 需要 總結(jié)強(qiáng)制降解的研究結(jié)果 。 3） 強(qiáng)制降解得到的 雜質(zhì)峰可以用來評估穩(wěn)定性指示能力。 用于穩(wěn)定性研究的含量分析方法和雜質(zhì)分析方法應(yīng)具有穩(wěn)定性指示的作用。穩(wěn)定性指示的測定方法應(yīng)能準(zhǔn)確地測定活性成分，而不被降解產(chǎn)物、工藝過程中雜質(zhì)、輔料或其它潛在雜質(zhì)所干擾。若放行的分析方法不適用于穩(wěn)定性指示分析方法，則需要補充一個適合穩(wěn)定性的分析方法。 4） 此外，也可以進(jìn)行加速和長期穩(wěn)定性試驗。一些降解途徑可能是復(fù)雜的，在強(qiáng)制降解條件下得到的降解產(chǎn)物和在加速或長期試驗中得到的降解產(chǎn)物可能不同。這些可能有助于開發(fā)和驗證合適的分析方法，但如果在加速和長期穩(wěn)定性試驗中沒有特定降解產(chǎn)物產(chǎn)生，這些信息對檢測特定產(chǎn)物并不總是必 要的。 一個分析方法缺少專屬性可由另一個分析方法來補充。從長期穩(wěn)定性試驗中得到的原化合物和雜質(zhì)、降解產(chǎn)物的穩(wěn)定的數(shù)據(jù)也能證明和支持專屬性。 接受標(biāo)準(zhǔn) 選擇性及干擾 a. 稀釋液和空白輔料色譜峰：在主峰出峰處無明顯干擾。 b. 已知雜質(zhì)對主峰無干擾，相鄰兩峰之間可以明顯分離，如無特殊規(guī)定，一般分離度應(yīng)不小于 ，或者 p/v≥10。 穩(wěn)定性指示特征 （強(qiáng)制降解實驗） 在所有強(qiáng)制降解的條件下的降解產(chǎn)物的峰應(yīng)該與主峰分離，即：主峰與臨近的雜質(zhì)峰 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 12 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 可以容易的積成兩個色譜峰。 含量項下含量濃度的樣品溶液的主峰應(yīng)該是純的 （ 光譜純 ， 僅適用于 HPLC） ；有關(guān)物質(zhì)項下 樣品溶液 各 已知雜質(zhì)峰 應(yīng)該是純的 （ 光譜純 ， 僅適用于 HPLC）。 檢測限 (LOD) 實驗 方法 根據(jù)分析方法是采用非儀器分析還是儀器分析，可用幾 種方法 確定最低檢測限（ LOD） 。除了下面的方法，其它方法也是可以接受的。 直觀評價 直觀評價 可應(yīng)用于非儀器方法， 也可以用于儀器方法。檢測限可以通過 對一系列 含 已知濃度被分析物 的樣品 進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確測得被分析物的 最小濃度來確定。 信噪比 (SN) 本 方法只可應(yīng)用于顯示基線噪音的分析 方法 。對比 已知濃度 被分析物的信號與空白樣品的信號，確 立分析物可被 準(zhǔn)確地 檢測到的濃度。信噪比為 3:1 或 2:1 可以用來評估最低檢測限。 響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率 檢測限度（ LOD） = σ：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn) 差（通過空白樣品測背景響應(yīng)值或 y軸 標(biāo)準(zhǔn)偏差估算 ） S：校正曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得） 所需數(shù)據(jù) 1） 確定 主藥成份和主要 雜質(zhì) /降解產(chǎn)物的檢測限，最低檢測限表示為被分析物在樣品中的濃度（例如百分比， ppb）。 2） 檢測限度的測定方法 。 3） 如果檢測限度是由直觀評價或信噪比得來，則需要提供相關(guān)的色譜圖；如果檢測限度是由計 算或外推法得來的估計值，則應(yīng)專門對一些已知接近或等于限度的樣品進(jìn)行分析 。 接受