【文章內(nèi)容簡介】 ,得到濃度為 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)液 ,將 mg /L 的標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋 , 分別配制濃度為 、 、 、 、 、 、 、 mg/L 的梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，以蒸餾水為調(diào)零液，分光光度法測定 OD284處吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立標(biāo)準(zhǔn) 曲線 回歸方程 [11]。 經(jīng)測量不同濃度梯度的 5羥甲基糠醛糠醛相對應(yīng)的 OD 值如圖 22 圖 22 5羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)曲線 從該標(biāo)準(zhǔn)曲線可以看出， 5羥甲基糠醛濃度在 ～ mg/L 之間對應(yīng)的吸光度基本呈線性相關(guān)，則得到 5羥甲基 糠醛標(biāo)準(zhǔn) 曲線回歸 方程為： y = + ； R = ，式中： y 為吸光度， x 為 5羥甲基糠醛濃度。 樣品測定方法：吸取樣品 1 mg/L 樣品，用蒸餾水稀釋（稀釋后 5羥甲基糠醛含量在~ mg/L 之間） ,分光光度法測定 OD284處吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線方程計算出樣品中 5羥甲基糠醛糠醛含量。 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與測定方法 蘋果酸的檢測利用的是 Goodban 法 [12]。 2,7 – 萘二酚溶液：取 1 g 2,7 – 萘二酚溶解在 100 mL 98%濃硫酸中。此溶液可在 4℃下保存數(shù)月 [13]。 y = + R178。 = 0120 5 10 15 20OD284 5羥甲基糠醛（ mg/L） 合肥師范學(xué)院 2021 屆本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 5 準(zhǔn)確稱取蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)樣品 mg， 用蒸餾水定容于 100 mL 容量瓶 ， 所得到濃度為 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)液。將 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)液稀釋 ， 分別配制濃度為 、 、 、 、 mg/L 的 梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。將上述各標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別移入到 已編號的試管 中 各 1 mL，眼試管壁緩慢 加入 mL 濃硫酸，并加入 mL 2,7 – 萘二酚溶液 ，然后在 100℃ 的沸水中水浴 20 min，待溶液冷卻到室溫， 分光光度法測定 OD390處吸光值 ，空白對照采用蒸餾水，按以上方法相同處理。根據(jù)所測吸光值繪制蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線方程。 經(jīng)測量不同濃度梯度的蘋果酸相對應(yīng)的 OD 值如圖 23 圖 23 蘋果酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線 從該標(biāo)準(zhǔn)曲線可以看出，蘋果酸濃度在 ～ mg/L 之間對應(yīng)的吸光度基本呈線性相關(guān)，得到蘋果酸 標(biāo)準(zhǔn)回歸方程為： y = + ； R = ，其中 y 為吸光度， x 為蘋果酸濃度。 樣品測定方法： 吸取樣品溶液 mL（蘋果酸濃度控制在 ～ mg/L）于干凈試管中， 取 mL 分析純的濃硫酸，沿管壁緩慢加入，再加入 mL 2,7 萘二酚試劑，放入 100℃水浴鍋中加熱 20 min，冷卻至室溫后， 分光光度法測定 OD390處吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)回歸方程計算出樣品中蘋果酸含量。 小麥麩皮酸解液中糠醛與 5羥甲基糠醛含量測定 小麥麩皮粉碎并過 30 目篩，在 80℃ 烘干后室溫保存。對上述處理后的 小麥麩皮進行酸解，按照下列濃度配置酸解液：硫酸濃度為 %，底物即小麥麩皮纖維濃度為 67 g/L。然后將配置好的酸解液在 100℃ 下，酸解 3 個小時 [4]。 將酸解后的小麥麩皮溶液在 3000 r/min 下離心 10 min，取上清液分別稀釋 200 倍、 300倍和 400 倍，以 50%乙醇為調(diào)零液，分光光度法測定 OD276處吸光值，根據(jù)糠醛的標(biāo)準(zhǔn)回歸 方程 計算出糠醛含量，并計算出平均值；再次取上述稀釋后的上清液，以蒸餾水為調(diào)零y = + R178。 = 010 20 40 60 80 100OD390 蘋果酸（ mg/L） 合肥師范學(xué)院 2021 屆本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 6 液，分光光度法測定 OD284 處吸光值，根據(jù) 5羥甲基糠醛的標(biāo)準(zhǔn)回歸 方程 計算出 5羥甲基糠醛 含量，并計算出平均值。 小麥麩皮酸解液的脫毒條件優(yōu)化 使用活性炭吸附法脫毒，研究活性炭濃度、溫度和時間對酸解液中糠醛、 5羥基糠醛脫毒處理效果。脫毒優(yōu)化條件如表 21 表 21 脫毒優(yōu)化條件 分組 分組 優(yōu)化參數(shù) 1 2 3 4 5 活性炭濃度（ %） 1 2 \ 溫度（ ℃ ） 30 40 50 60 \ 時間（ min） 20 30 40 50 60 根據(jù)表 21 的方案 對小麥麩皮酸解液脫毒，并 測出脫毒后酸解液中糠醛與 5羥甲基糠醛的含量，制作出糠醛與 5羥甲基糠醛的活性炭吸附性曲線。做三次平行組，結(jié)果取平均值，并進行單因素方差分析 [14]。 探究 糠醛與 5羥甲基糠醛對蘋果酸發(fā)酵抑制的耐受性 寄生曲霉發(fā)酵蘋果酸周期的探究 本實驗發(fā)酵所用的菌種為寄生曲霉。培養(yǎng)基配制方法：將土豆切成小塊，取 100 g土豆放入 1 L水中在 100℃煮沸 30 min，過濾出濾液；在濾液中分別加入 30 g的葡萄糖和 18 g左右的瓊脂，溶解，滅菌。在超凈工作臺上，用劃線分離法在培養(yǎng)皿中分離出寄生曲霉，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。三天之后取出培養(yǎng)基，在斜面培養(yǎng)基中接種單個的菌落，得到純種菌落，并制作種子培養(yǎng)液。 按照以下配方配制蘋果酸發(fā)酵液：葡萄糖 100 g/L、 (NH4)2SO4 g/L、 KH2PO4 g/L、K2HPO4 g/L、 MgSO47H2O g/L、 CaCl22H2O g/L、 FeSO47H2O g/L、 MnSO4 g/L、 NaCl g/L[15]。 將配置好的發(fā)酵液分別等量加入到 4瓶 250 mL的錐形瓶中，滅菌后分別在超凈工作臺上接入 2 mL的寄生曲霉種子培養(yǎng)液，放入恒溫搖床中 200 r/min， 30℃下培養(yǎng)。然后根據(jù)蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線每隔 24小時測得培養(yǎng)液中蘋果酸的含量，做出蘋果酸發(fā)酵產(chǎn)量的周期曲線，確定寄生曲霉發(fā)酵蘋果酸的周期。 糠醛與 5羥甲基糠醛對蘋果酸發(fā)酵的影響 利用單因素法探究糠醛與 5羥甲基糠醛對蘋果酸發(fā)酵的影響，在相同的發(fā)酵液中分別添加等梯度 濃度 的糠醛 或 5羥甲基糠醛，在 恒溫搖床中 以 200 r/min， 30℃ 條件 下發(fā)酵相同時間 。 在 發(fā)酵培養(yǎng)液 中 分別添加 的 糠醛 或 5羥甲基糠醛 含量 ，如表 22 合肥師范學(xué)院 2021 屆本科生畢業(yè)論文（設(shè)計） 7 表 22 糠醛、 5羥甲基糠醛添加量 分組 添加物 1 2 3 4 5 糠醛（ mg/L） 100 300 500 700 900 5羥甲基糠醛（ mg/L） 100 300 500 700 900 以上發(fā)酵液中除添加物以外，其發(fā)酵液成分，體積，接種量，發(fā)酵條件等條件均為一致，除此之外，每組發(fā)酵液都有空白對照組。發(fā)酵周期后，測出含有不