【文章內(nèi)容簡介】 床號和病人姓名，無誤后再抽血。 血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對、無誤后再將血液注入。 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 采血者要在申請單和 標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時）在病人輸液時采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 17 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 非急診病人輸血前，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。 標(biāo)本儲存 待測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時間為 72小時 ，已檢測標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫 運(yùn)輸 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 。 6 試劑 試劑名稱： DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 試劑生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達(dá)亞美 ） 試劑說明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個微孔管組成 ： IDCentrifuge 12SⅡ離心機(jī) 孵育器： IDIncubator 37SI臺式保溫箱 生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達(dá)亞美 ） 8. 操作步 驟 預(yù)備 取 DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 ，將有條形碼的一邊面向?qū)嶒炚?；并在此面?biāo)記病人標(biāo)本及獻(xiàn)血員的編號。（約定：第 1管為主側(cè)，第 2管為次側(cè)，以此類推） ： 受血者紅細(xì)胞：用 40uL加樣槍取 40uL 受血者積壓紅細(xì)胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細(xì)胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細(xì)胞懸液加入次側(cè)管中。 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞：用 40uL加樣槍取 40uL 獻(xiàn)血者積壓紅細(xì)胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細(xì)胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細(xì)胞懸液加入主側(cè)管中。 ： 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 18 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 40uL加樣槍取 40uL受血者血清加入主側(cè)管； 40uL加樣槍取 40uL獻(xiàn)血員血清加入次側(cè)管 10分鐘； 5分鐘 ，記錄。 9. 結(jié)果判斷模式 如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗陰性 ，供受者血液相合； 如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集， 即 凝集實(shí)驗陽性 ，供受者血液不相合 。 10. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 測試結(jié)果安全可靠：對不完全抗體不會漏檢，在交叉配血過程中不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果，可預(yù)防因 IgG類抗體引起的輸血反應(yīng)。 結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高 陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實(shí)驗室的不同而變化。大多數(shù)傳統(tǒng)測試法仍然依賴于對液體環(huán)境下凝集反應(yīng)的解釋，由于缺乏客觀性的反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)果的判讀準(zhǔn)確性因人而易。即使自動化判讀機(jī)也很難將微弱的血細(xì)胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 靈敏度 高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測結(jié)果可較長時間保存 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。 11 注意事項 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結(jié)果； 因為儲運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)微管的頂部存 在 小水珠或 氣 泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn) DiaMed卡封口損壞，或者 管內(nèi)膠量不足或干裂 ，請不要 使用 ； 用 非達(dá)亞美 2號 稀釋液來配制紅血球懸液可能會導(dǎo)致不良結(jié)果 ， 所用的紅血球的懸液濃度 與 建議使用的濃度 應(yīng)相 符 。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 19 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣充分離心。 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集 。 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。 12 參考文獻(xiàn) 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定 型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 20 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗體篩查試驗（微柱凝膠法） ： 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體 ,避免因 ABO 以外的血型不合引起的輸血反應(yīng) ,以 保證患者用血安全 ： 輸血前檢查 產(chǎn)前檢查 新生兒溶血癥（ HDN） ：輸血科主任負(fù)責(zé)對該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 不完全抗體即 ABO 系統(tǒng)以外其它系統(tǒng)的抗體 ,也稱為免疫抗體 .多為 IgG,單倍體抗體，長度約 24nm ，多經(jīng)妊娠或輸血后免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì) 中可以與相應(yīng)紅細(xì)胞反應(yīng)，但不能發(fā)生凝集，必須通過特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。 抗體篩查就是利用 3瓶抗體篩選細(xì)胞與待檢（患者）血清反應(yīng)，如果待檢（患者）血清中存在抗體，則應(yīng)該可以和這 3瓶抗體篩選細(xì)胞中至少 1瓶顯示反應(yīng)。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離游離紅細(xì)胞和凝集紅細(xì)胞的目的。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上 部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗陽性。 5 標(biāo)本 ：新抽取的抗凝血 標(biāo)本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 ，一定要認(rèn)真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 ，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對、無誤后再將血液注入 。 、科別、床號、編號完全一致。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 21 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，寫清采血時間，及時送檢。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時）在病人輸液時采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 ，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。 待 測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時間為 48小時 室溫保存 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 。 6. 試劑 試劑名稱： DiaMed凝膠卡、 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)抗體篩查細(xì)胞（ %） 、達(dá)亞美 2號稀釋液（ Dil2） 試劑生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達(dá)亞美 ） 試劑說明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個微孔管 (兩人份 )組成 DiaMedID Micro Typing System 離心機(jī)： IDCentrifuge 12 SⅡ 孵育器： IDIncubator 37 SⅠ 生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達(dá)亞美 ） 8. 操作步驟 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)抗體篩查細(xì)胞（ %） ， 2 號稀釋液室溫平衡。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記達(dá)亞美卡。 三管中分別加入抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細(xì)胞 50ul 三管中均加入 25ul待檢樣本血漿或血清 37℃孵育 15分鐘 離心 10分鐘，判斷結(jié)果，記錄。 9. 結(jié)果判斷模式 1+至 4+為抗體篩查陽性結(jié)果（抗人球法），表 示樣本含 ABO系統(tǒng)以外抗體，需要進(jìn)一步做抗體鑒定（ ）為陰性結(jié)果。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 22 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 10. 臨床意義 ： 在交叉配血試驗前或輸血前，提前進(jìn)行抗體篩選和鑒定檢測，可發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的不規(guī)則抗體，提醒臨床醫(yī)生需提前備血，以防緊急用血時找不到相容的獻(xiàn)血員； 抗篩可以縮短交叉配血時間，快速獲得相容的供血 通過抗體篩選 /鑒定試驗，可以提高不相容性檢出率（ %）。也就是說在 1萬例交叉配血試驗中，如果沒有抗體篩選 /鑒定檢測，可能會有一例漏檢。而如果常規(guī)作抗體篩選 /鑒定和交叉配血，則可避免漏檢，達(dá)到 100%的準(zhǔn)確性。 11. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 結(jié)果判斷客觀性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高 ,陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實(shí)驗室的不同而變化。大多數(shù)傳統(tǒng)測試法仍然依賴于對液體環(huán)境下凝集反應(yīng)的解釋，由于缺乏客觀性的反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)果的判讀準(zhǔn)確性因人而易。即使自動化判讀機(jī)也很難將微弱的血細(xì)胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測結(jié)果可較長時間保存 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。 12. 注意事項 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結(jié)果； 因為儲運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)微管的頂部存 在 小水珠或 氣 泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn) DiaMed卡封口損壞，或者 管內(nèi)膠量不足或干裂，請不要 使用 ； 使用 非達(dá)亞美 2 號 稀釋液來配制紅血球懸液可能會導(dǎo)致不良結(jié)果 ， 所用的紅血球的懸液濃度 與 建議使用的濃度 應(yīng)相 符 。 纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣充分離心。 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集 。 加樣時先加紅細(xì)胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。 13. 參考文獻(xiàn) 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 23 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗血清效價測定 生效日期： 20210211 第 24 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗血清效價測定 抗體效價測定是一種半定量檢測抗體濃度的方法。把效價視為抗體的含量，在臨床輸血檢驗中用于鑒定標(biāo)