【文章內容簡介】 床號和病人姓名，無誤后再抽血。 血標本容器要清潔干燥并事先貼好標簽，加血標本前要認真核對、無誤后再將血液注入。 血標本標簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 采血者要在申請單和 標本標簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強抽血時）在病人輸液時采集標本，必須從未輸液的一側肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 17 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 非急診病人輸血前，應事先采取血標本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標簽、采取血標本送檢。 標本儲存 待測標本在 28℃ 下的保存時間為 72小時 ，已檢測標本 28℃ 冰箱保存 7天。 標本運輸 室溫 運輸 標本拒收標準 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 。 6 試劑 試劑名稱： DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 試劑生產廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 試劑說明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個微孔管組成 ： IDCentrifuge 12SⅡ離心機 孵育器： IDIncubator 37SI臺式保溫箱 生產廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 8. 操作步 驟 預備 取 DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 ，將有條形碼的一邊面向實驗者；并在此面標記病人標本及獻血員的編號。（約定：第 1管為主側，第 2管為次側，以此類推） ： 受血者紅細胞：用 40uL加樣槍取 40uL 受血者積壓紅細胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細胞懸液加入次側管中。 獻血者紅細胞：用 40uL加樣槍取 40uL 獻血者積壓紅細胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細胞懸液加入主側管中。 ： 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 18 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 40uL加樣槍取 40uL受血者血清加入主側管； 40uL加樣槍取 40uL獻血員血清加入次側管 10分鐘； 5分鐘 ，記錄。 9. 結果判斷模式 如果紅細胞沉積在凝膠管底部，表明紅細胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性 ，供受者血液相合； 如果紅細胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細胞發(fā)生凝集， 即 凝集實驗陽性 ，供受者血液不相合 。 10. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 測試結果安全可靠：對不完全抗體不會漏檢，在交叉配血過程中不會出現(xiàn)假陰性結果，可預防因 IgG類抗體引起的輸血反應。 結果判斷客觀性強、準確性高 陰性、陽性、弱陽性的結果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。大多數(shù)傳統(tǒng)測試法仍然依賴于對液體環(huán)境下凝集反應的解釋，由于缺乏客觀性的反應終點，反應結果的判讀準確性因人而易。即使自動化判讀機也很難將微弱的血細胞凝集與陰性反應區(qū)別開來。 靈敏度 高、特異性高、重復度好； 客觀性好，避免主觀判讀結果的影響； 檢測結果可較長時間保存 加樣時先加紅細胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結果。 11 注意事項 變質的或受到細菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結果； 因為儲運不當?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)微管的頂部存 在 小水珠或 氣 泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn) DiaMed卡封口損壞，或者 管內膠量不足或干裂 ，請不要 使用 ； 用 非達亞美 2號 稀釋液來配制紅血球懸液可能會導致不良結果 ， 所用的紅血球的懸液濃度 與 建議使用的濃度 應相 符 。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 19 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應將血樣充分離心。 嚴格按照標準操作程序可以檢出弱抗原抗體反應，弱凝集 。 加樣時先加紅細胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結果。 12 參考文獻 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學檢驗新技術與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定 型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 20 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗體篩查試驗（微柱凝膠法） ： 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體 ,避免因 ABO 以外的血型不合引起的輸血反應 ,以 保證患者用血安全 ： 輸血前檢查 產前檢查 新生兒溶血癥（ HDN） ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 不完全抗體即 ABO 系統(tǒng)以外其它系統(tǒng)的抗體 ,也稱為免疫抗體 .多為 IgG,單倍體抗體，長度約 24nm ，多經妊娠或輸血后免疫產生。在鹽水介質 中可以與相應紅細胞反應，但不能發(fā)生凝集，必須通過特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏紅細胞發(fā)生凝集。 抗體篩查就是利用 3瓶抗體篩選細胞與待檢（患者）血清反應，如果待檢（患者）血清中存在抗體，則應該可以和這 3瓶抗體篩選細胞中至少 1瓶顯示反應。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術和免疫學抗原抗體反應相結合的產物，通過調節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細胞通過，從而達到分離游離紅細胞和凝集紅細胞的目的。如果紅細胞沉積在凝膠管底部，表明紅細胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性；如果紅細胞聚集在凝膠上 部或中部，表明紅細胞發(fā)生凝集，即凝集實驗陽性。 5 標本 ：新抽取的抗凝血 標本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉速必須大于 3500轉 /分，時間必須大于 15分鐘 ，一定要認真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 ，加血標本前要認真核對、無誤后再將血液注入 。 、科別、床號、編號完全一致。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 21 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，寫清采血時間，及時送檢。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強抽血時）在病人輸液時采集標本，必須從未輸液的一側肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 ，應事先采取血標本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標簽、采取血標本送檢。 待 測標本在 28℃ 下的保存時間為 48小時 室溫保存 標本拒收標準 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 。 6. 試劑 試劑名稱： DiaMed凝膠卡、 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標準抗體篩查細胞（ %） 、達亞美 2號稀釋液（ Dil2） 試劑生產廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 試劑說明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個微孔管 (兩人份 )組成 DiaMedID Micro Typing System 離心機： IDCentrifuge 12 SⅡ 孵育器： IDIncubator 37 SⅠ 生產廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 8. 操作步驟 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標準抗體篩查細胞（ %） ， 2 號稀釋液室溫平衡。準備樣本，標記達亞美卡。 三管中分別加入抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細胞 50ul 三管中均加入 25ul待檢樣本血漿或血清 37℃孵育 15分鐘 離心 10分鐘，判斷結果，記錄。 9. 結果判斷模式 1+至 4+為抗體篩查陽性結果（抗人球法），表 示樣本含 ABO系統(tǒng)以外抗體，需要進一步做抗體鑒定（ ）為陰性結果。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 22 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 10. 臨床意義 ： 在交叉配血試驗前或輸血前，提前進行抗體篩選和鑒定檢測，可發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的不規(guī)則抗體，提醒臨床醫(yī)生需提前備血，以防緊急用血時找不到相容的獻血員； 抗篩可以縮短交叉配血時間，快速獲得相容的供血 通過抗體篩選 /鑒定試驗，可以提高不相容性檢出率（ %）。也就是說在 1萬例交叉配血試驗中，如果沒有抗體篩選 /鑒定檢測，可能會有一例漏檢。而如果常規(guī)作抗體篩選 /鑒定和交叉配血，則可避免漏檢，達到 100%的準確性。 11. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 結果判斷客觀性強、準確性高 ,陰性、陽性、弱陽性的結果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。大多數(shù)傳統(tǒng)測試法仍然依賴于對液體環(huán)境下凝集反應的解釋，由于缺乏客觀性的反應終點，反應結果的判讀準確性因人而易。即使自動化判讀機也很難將微弱的血細胞凝集與陰性反應區(qū)別開來。 靈敏度高、特異性高、重復度好； 客觀性好，避免主觀判讀結果的影響； 檢測結果可較長時間保存 加樣時先加紅細胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結果。 12. 注意事項 變質的或受到細菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結果； 因為儲運不當?shù)脑颍袝r會發(fā)現(xiàn)微管的頂部存 在 小水珠或 氣 泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn) DiaMed卡封口損壞，或者 管內膠量不足或干裂，請不要 使用 ； 使用 非達亞美 2 號 稀釋液來配制紅血球懸液可能會導致不良結果 ， 所用的紅血球的懸液濃度 與 建議使用的濃度 應相 符 。 纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應將血樣充分離心。 嚴格按照標準操作程序可以檢出弱抗原抗體反應，弱凝集 。 加樣時先加紅細胞后加血清。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結果。 13. 參考文獻 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 23 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學檢驗新技術與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術手冊 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 抗血清效價測定 生效日期： 20210211 第 24 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗血清效價測定 抗體效價測定是一種半定量檢測抗體濃度的方法。把效價視為抗體的含量，在臨床輸血檢驗中用于鑒定標