【正文】 抗血清效價測定 生效日期： 20210211 第 24 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗血清效價測定 抗體效價測定是一種半定量檢測抗體濃度的方法。 加樣時先加紅細胞后加血清。 纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應(yīng)將血樣充分離心。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。即使自動化判讀機也很難將微弱的血細胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 11. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 結(jié)果判斷客觀性強、準確性高 ,陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。也就是說在 1萬例交叉配血試驗中，如果沒有抗體篩選 /鑒定檢測，可能會有一例漏檢。 9. 結(jié)果判斷模式 1+至 4+為抗體篩查陽性結(jié)果（抗人球法），表 示樣本含 ABO系統(tǒng)以外抗體，需要進一步做抗體鑒定（ ）為陰性結(jié)果。準備樣本，標記達亞美卡。 。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標簽、采取血標本送檢。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強抽血時）在病人輸液時采集標本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 、科別、床號、編號完全一致。 5 標本 ：新抽取的抗凝血 標本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 ，一定要認真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細胞通過，從而達到分離游離紅細胞和凝集紅細胞的目的。在鹽水介質(zhì) 中可以與相應(yīng)紅細胞反應(yīng)，但不能發(fā)生凝集，必須通過特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏紅細胞發(fā)生凝集。 12 參考文獻 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定 型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 20 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗體篩查試驗（微柱凝膠法） ： 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體 ,避免因 ABO 以外的血型不合引起的輸血反應(yīng) ,以 保證患者用血安全 ： 輸血前檢查 產(chǎn)前檢查 新生兒溶血癥（ HDN） ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 加樣時先加紅細胞后加血清。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 19 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應(yīng)將血樣充分離心。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。即使自動化判讀機也很難將微弱的血細胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 結(jié)果判斷客觀性強、準確性高 陰性、陽性、弱陽性的結(jié)果判斷都有明確的界定，不依操作者與實驗室的不同而變化。 9. 結(jié)果判斷模式 如果紅細胞沉積在凝膠管底部，表明紅細胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性 ，供受者血液相合； 如果紅細胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細胞發(fā)生凝集， 即 凝集實驗陽性 ，供受者血液不相合 。 獻血者紅細胞：用 40uL加樣槍取 40uL 獻血者積壓紅細胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細胞懸液加入主側(cè)管中。 6 試劑 試劑名稱： DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 試劑生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 試劑說明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個微孔管組成 ： IDCentrifuge 12SⅡ離心機 孵育器： IDIncubator 37SI臺式保溫箱 生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 8. 操作步 驟 預備 取 DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 ，將有條形碼的一邊面向?qū)嶒炚?；并在此面標記病人標本及獻血員的編號。 標本運輸 室溫 運輸 標本拒收標準 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標簽、采取血標本送檢。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強抽血時）在病人輸液時采集標本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 血標本標簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 標本種類：新抽取的抗凝血 ： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 標本采集要求 采血時，一定要認真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細胞通過，從而達到分離游離紅細胞和凝集紅細胞的目的。 ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 ： 所有申請輸用全血及紅細胞懸液的標本。 ，若患者血液標 本中含有肝素，需多加幾滴凝聚胺溶液以中和肝素。此時可在最后加懸浮液時，將試管立即放入 37℃水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動試管，并在 30秒內(nèi)觀察結(jié)果。 ，因為配血試管中發(fā)生溶血現(xiàn)象，表明有抗原抗體反應(yīng)，同時還有補體參與，是配血結(jié)果的嚴重情況。 如果主側(cè)管和次側(cè)管或單獨一側(cè)管內(nèi)紅細胞凝集不散開，則為 抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，表示配血結(jié)果不相合，禁忌輸用。如反應(yīng)可疑，可進一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。如果在 301min內(nèi)凝集散開，表示凝聚胺引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合 。如有凝集，則進行下一步。 3400r/min離心 15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓試管底殘留 。 2支小試管，標明主側(cè)和次側(cè)，主側(cè)管加患者血清（血漿） 2滴，加供著 5%紅細胞生理鹽水懸液（洗滌或不洗滌均可） 1滴，次側(cè)管反之。 。 . 標本儲存 待測標本在 28℃ 下的保存時間為 72 小時 ，已檢測標本 28℃ 冰箱保存 7天。 ，應(yīng)事先采取血標本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 14 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 對。 采血者要在申請單和標本標簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 血標本容 器要清潔干燥并事先貼好標簽，加血標本前要認真核對、無誤后再將血液注入。當血清中存在 IgM或 IgG類血型抗體時，在上述條件下，與紅細胞緊密結(jié)合，出現(xiàn)特異性的凝集，此時加入枸櫞酸鹽解聚液（懸浮液）以消除凝聚胺的 正電荷，由 IgM或 IgG類血型抗體與紅細胞產(chǎn)生的凝集不會散開，如血清中不存在 IgM或 IgG類血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集解散。 ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 ： 所有申請輸用全血及紅細胞懸液的標本。 ，保證水溫正確。 7 注意事項 ：注意經(jīng)常清洗解凍箱，以確保箱體內(nèi) 部到清潔，采用自動進水清洗。用量程準確的 050度分辨率為 ，經(jīng)觀察若顯示溫度與測量溫度不一致，可按溫度“ +， ”鍵若干次直至兩者溫度相同。 溫度效正：定時對水箱溫度進行檢測，如發(fā)現(xiàn)實測溫度與顯示溫度相差 ，應(yīng)對解凍箱進行校正。此時應(yīng)接好進水管和出水管，儀器清洗過程如下，先排空加熱箱中的水，再注入清水，開始循環(huán)，然后排空水，清洗完成時，儀器自動返回到初始狀態(tài)，可根據(jù)用戶水質(zhì)的好壞，一般 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ03 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 冰凍血漿解融操作規(guī)程 生效日期： 20210211 第 12 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 每周清洗 1至 2次。 6 保養(yǎng) 清洗：使用自來水自動進水的用戶，應(yīng)經(jīng)常清洗解凍箱，以確保箱體內(nèi)部清潔。 ： 時間設(shè)定，一 般設(shè)定 18 分鐘，通過按“ +”或“ ”來調(diào)整設(shè)定時間，在解凍中可調(diào)整。由于加熱箱與解凍槽的分離，加熱管與周圍高溫不會破壞血漿的有效成分。 2 范圍 使用于本院輸血科 3 職責 發(fā)血、值班崗位完成 4 原理 KHR1型冰凍血漿解凍箱采用加熱箱、解凍箱、循環(huán)管路、儀器箱等組成的全自動循環(huán)冰凍血漿系統(tǒng)，水在加熱箱內(nèi)被加熱至設(shè)定溫度，然后由循環(huán)泵送入解凍槽，冰凍血漿袋放在專用的不銹鋼解凍架中，水的流體靜壓力包住血漿袋，與冰凍血漿進行熱交 換后再循環(huán)金加熱箱內(nèi)加熱。 、記錄，避免筆誤。 ，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。 ，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細菌污 染。 11注意事項 ，血清中有很多天然抗體存在，故不需作反定型試驗。 5%為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當，反應(yīng)不明顯易誤判。 9 操作性能 快速簡便，特異性強，重復性好。 ：凝集這為陽性反應(yīng)，反之為陰性反應(yīng)。 32003400r/min離心 1530秒。 法 1滴抗 D試劑。受檢者紅細胞 Rh（ D） 血型：陽性或陰性。 — 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。 +/ = 鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞。 2 + = 紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。 4 + = 紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 D試劑。 7 儀器 ： 802上海手術(shù)器械廠 ：上海醫(yī)療器械廠 ： OLYMPUS(日本 ) 8 操作步驟及結(jié)果判斷 1滴抗 D試劑。 6 試劑 ： RhD(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體） ：德國 。 4 標本運輸 ：室溫運輸。標本應(yīng)無溶血，標簽填寫內(nèi)容齊全，無涂改。 2 標本采集： 標本種類：采集靜脈血 34ml 待凝固后分離血清，將紅細胞用 %生理鹽水配成 5%紅細胞懸液。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版） .南京：東南大學出版社， 1997， P89 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ02 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 Rh（ D）血型鑒定 （鹽 水法） 生效日期： 20210211 第 8 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital Rh（ D）血型鑒定（鹽水法） 1 原理： 一般臨床上根據(jù)紅細胞表面 D抗原的有無，將 Rh血型分為 RH陰性和陽性。 、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 IgM抗 A 和抗 B 與相應(yīng)紅細胞的反應(yīng)溫度以 4oC 為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍再室溫（ 20~24oC）內(nèi)進行試驗， 37oC可使反應(yīng)減弱。 試劑紅細胞以 3 個健康者同型新鮮紅細胞混合，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。 11注意事項 ，用畢后應(yīng)放置冰箱保存， 以免細菌污染。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 7 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ⑷通常不與自身的血清凝集。 ⑵能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。 ，應(yīng)考慮由遺