【正文】 室溫 運輸 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強抽血時）在病人輸液時 采集標本，必須從未輸液的一側肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 標本種類：新抽取的抗凝血 標本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 5ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻 ） 離心要求：轉速必須大于 3500轉 /分，時間必須大于 15分鐘 標本采集要求 采血時，一定要認真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 正反定型結果不一致原因 自身免疫性溶血性貧血引起的紅細胞被自身抗體包被； 紅細胞 A或 B抗原的弱化； 紅細胞懸液濃度過濃或過淡； 紅細胞抗原位點過少或抗原性減弱； 病人感染細菌或病毒后，細菌或病毒產生的酶使紅細胞上掩蔽的 T抗原暴露激活，由于正常人血漿中都含有抗 T抗體，因此可于正常人血漿中產生凝集反應，正定型實驗假陽 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 36 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 性； 嚴重感染的病人，其血漿中白細胞過多，堵塞凝膠篩間隙，影響紅細胞的沉降，引起假陽性。 11. 操作性 能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 操作簡 單方便。 1+反應 大部分凝集的紅細胞停留在微柱的 下半部分。 4+反應 紅細胞在柱的上面凝集，并形成一個環(huán)形帶。 質控柱： 如果在質控柱中觀察到任何程度的陽性反應性，則無法正確判定血型。 用 40ul加樣槍吸 40ul病人壓積紅細胞（ RBC） 加入備好 1ml生理鹽水的凹槽中或試管中（編號須對應），混勻；制成 4%的紅細胞懸液； 取下吸頭，換上 10ul加樣槍，分別吸 10ul4%的紅細胞懸液加入第 4管中 離心 5分鐘，判讀結果，記錄。 。 采血者要在申請單和標本標簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。在添加紅細胞并隨后離心試劑卡之后， 凝集的紅細胞被玻璃珠阻擋在微柱上端，而未凝集的紅細胞則穿過玻璃珠到達微柱底部?？?D是一種能夠導致紅細胞損壞的具有重大臨床意義的抗體，可能會引起新生兒溶血?。?HDN） 和輸血反應。 要確定紅細胞是否包含或缺少 A 和 /或 B血型抗原，須使用抗 A 和抗 B試劑進行檢測。 13 方法局限性： 變質的或受到細菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結果； 因為儲運不當?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)在微管的頂部存有小水珠或在膠泡，在使用類似的凝膠卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn)有管內膠量不足或干裂，請不要 使用 ； 如果所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的 濃度不符，可能會引起錯誤結果； 使用非原廠的稀釋液來配制紅血球懸液可能會導致不良結果； 質控結果必須 是 陰性，如果是陽性，檢測無效，用生理鹽水清洗紅細胞并重新配制懸液重新檢測，如果得到陰性質控結果，則可以判讀結果； 為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，實驗在室溫 25℃ 中進行。 可節(jié)省樣品紅細胞和血漿； 靈敏度高、特異性高、重復度好； 客觀性好，避免主觀判讀結果的影響； 檢測結果可較長時間保存； 操作者更少接觸血液標本。 9. 結果 判斷模式 正定管 ABD,4+為陽性結果，（ ）為陰性結果。 5%樣本紅細胞制備：壓積紅細胞 25ul或 50ul全血懸浮于 2號稀釋液中 ； 50ulA1,B標準反定細胞加入 A1,B管中， 50ul血清或血漿加入 A1,B管中 10u5%樣本紅細胞加入 Ctl， A,B,D管中。 . 標本運輸 室溫保存 . 標本拒收標準 溶血 、 受 污染，或者含有凝塊的樣品。 血標本標簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術和免疫學抗原抗體反應相結合的產物，通過調節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細胞通過，從而達到分離游離紅細胞和凝集紅細胞的目的。 ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 結果失控后的處理 ，排除人為誤差 ，以查明質控品是否過期或變質； ，可以進行儀器維護后再測失控項目，可排除儀器問題引起的失控。 IgG組陰性質控品：主側次側均不出現(xiàn)凝集。 （微柱凝膠法） 質控品來源： IgM組：成都市血液中心的三個獻血員的紅細胞懸液合血辮子，其中三個標本的 ABO血型互不相同并其中一個作為受者另外兩個作為供者。（質控品采用微柱凝膠法和玻片法兩種方法進行定標。 結果分析： IgG 類抗體陽性質控出現(xiàn)相應的凝集強度， IgG 類抗體陰性質控不出現(xiàn)凝集， IgM類抗體質控反應結果與預期一致。 ：每新一批次，同批次新開瓶，每日開始試驗時。 ：抗 D血清效價≥ 64，陽性質控出現(xiàn)紅細胞凝集 4+，陰性質控紅細胞不出現(xiàn)凝集，在有效期內，外觀合格，否則視為失控。O細胞無凝集。以及外觀，有效期的檢查。 7 參考文獻 《陜西省醫(yī)療機構臨床輸血技術與質量管理手冊 》 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ08 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 室內質量控制 生效日期： 20210211 第 26 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 室內質量控制 1 目的 制度本制度，為了選擇適當?shù)膶嶒灧椒ê筒襟E，連續(xù)評價本實驗室檢測工作的可靠性程度，監(jiān)測和控制本實驗室檢測工作的精密度，提高常規(guī)工作中批內、批間樣本檢測的一致性，以確定測定結果是否可靠，以保證輸血的安全可靠性。 A血清效價應該 128,抗 B血清效價應 64。 以 3000r/min 離心 1 分鐘，以出現(xiàn)（ +）凝集強度試管的血清稀釋倍數(shù)的倒數(shù)為該 抗血清的效價。 A或 B及 O細胞用生理鹽水稀釋為 2%濃度。以抗體稀釋后仍能與抗原紅細胞出現(xiàn)肉眼明顯可見凝聚的最高血清稀釋倍數(shù)來表示抗體的效價。把效價視為抗體的含量，在臨床輸血檢驗中用于鑒定標準血清效價的測定，以檢測抗血清試劑的質量。 嚴格按照標準操作程序可以檢出弱抗原抗體反應，弱凝集 。 靈敏度高、特異性高、重復度好； 客觀性好，避免主觀判讀結果的影響； 檢測結果可較長時間保存 加樣時先加紅細胞后加血清。而如果常規(guī)作抗體篩選 /鑒定和交叉配血，則可避免漏檢，達到 100%的準確性。 三管中分別加入抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細胞 50ul 三管中均加入 25ul待檢樣本血漿或血清 37℃孵育 15分鐘 離心 10分鐘，判斷結果，記錄。 待 測標本在 28℃ 下的保存時間為 48小時 室溫保存 標本拒收標準 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 21 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，寫清采血時間，及時送檢。如果紅細胞沉積在凝膠管底部，表明紅細胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性；如果紅細胞聚集在凝膠上 部或中部，表明紅細胞發(fā)生凝集，即凝集實驗陽性。 不完全抗體即 ABO 系統(tǒng)以外其它系統(tǒng)的抗體 ,也稱為免疫抗體 .多為 IgG,單倍體抗體，長度約 24nm ，多經(jīng)妊娠或輸血后免疫產生。 嚴格按照標準操作程序可以檢出弱抗原抗體反應，弱凝集 。 靈敏度 高、特異性高、重復度好； 客觀性好，避免主觀判讀結果的影響； 檢測結果可較長時間保存 加樣時先加紅細胞后加血清。 10. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 測試結果安全可靠：對不完全抗體不會漏檢，在交叉配血過程中不會出現(xiàn)假陰性結果，可預防因 IgG類抗體引起的輸血反應。（約定：第 1管為主側，第 2管為次側，以此類推） ： 受血者紅細胞：用 40uL加樣槍取 40uL 受血者積壓紅細胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍，取 10uL 此4%的紅細胞懸液加入次側管中。 標本儲存 待測標本在 28℃ 下的保存時間為 72小時 ，已檢測標本 28℃ 冰箱保存 7天。 采血者要在申請單和 標本標簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。如果紅細胞沉積在凝膠管底部，表明紅細胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性；如果紅細胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細胞發(fā)生凝集，即凝集實驗陽性。 申請輸用手工血小板的標本。 ，應盡快觀察結果，以免反應減弱或消失。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 15 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 7 注意事項 若受血者用血量大，需要 10個以上獻血員時，獻血員間也要進行交叉配血。如果凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結合的特異性反應，配血結果不相合。 ，目測紅細胞有無凝集，如無凝集，必須重做 。 . 試劑 試劑名稱： 凝聚胺介質試劑 試劑生產廠家： 珠海貝索生物技術有限公司 試劑 組成 ： 低離子溶液，凝聚胺溶液，懸浮液 器 ： 802上海手術器械廠 ，以 3000r/min離心 3分鐘，分離上層受、供著血清或血漿，并在壓積紅細胞制成 5%受、供著紅細胞生理鹽水懸液。急診搶救輸血，未能事先采 血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標簽、采取血標本送檢。 血標本標簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 原理 凝聚胺是帶有高價陽離子的多聚季銨鹽 ,溶解后能產生大量正電荷，可以大量中和紅細胞表面的負電荷，減弱紅細胞之間的排斥力，使紅細胞彼此之間的距離縮小，出現(xiàn)正常紅細胞可逆性的非特異性凝集：低離子強度溶液降低了紅細胞的 Zeta 電位，進一步增強抗原抗體間的引力，增強了血型抗體凝集紅細胞的能力。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版） .南京：東南大學出版社， 1997， 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號 ： B/0 主題內容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 13 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 交叉配血（凝聚胺法） ： 在臨床用血前將患者血清和血細胞分別與獻血員血細胞和血清進行交叉配血試驗，以排除各種因素引起的輸血反應（如凝集或溶血），保證用血安全。最后按一次“確定”鍵確認即完成效正。使用蒸餾水的用戶也必須每周清洗換水。 ：將冰凍血漿裝入袋內，再掛在解凍架上放妥當，并用架上壓桿壓住，按確定。循環(huán)的水流既能加快冰凍血漿與水的熱交換，又能使冰凍血漿快速安全的溶解至適合人體輸入的溫度。 、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體。報告方式同玻片法。 1滴滴 2%5%紅細胞生理鹽水懸液于上述試管中，混勻。 。 1 + = 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞。 。28℃避光保存，有效期為 1年，在效期內用。 3 標本儲存 ：操作完標本 4℃冰箱保存 7天。如果紅細胞表面有 D抗原，與細胞株 BS226細胞產生的單克隆抗體發(fā)生特異性反應，使紅細胞發(fā)生凝集，為 RH陽性，如不發(fā)生凝集，表明紅細胞表明沒有 D抗原，為 RH陰 性。 ，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結果。 、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 ⑶不被臍帶血清凝集。 （ 4） 核對患者的診斷，類 B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關。 A型血而疑為有類 B抗原時，可用下列方法進行鑒別： （ 1） 觀察細胞與抗 A及抗 B的凝集強度，與抗 A的反應要比與抗 B的反應強。 A抗原或 B抗原減弱，則可將受檢紅細胞與抗 A或抗 B血清作吸收及放射試驗以及受檢者唾液作 A、 B、 H血型物質測定