【正文】 。 標(biāo)本儲(chǔ)存 待測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時(shí)間為 72小時(shí) ，已檢測標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。 ，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫在輸血申請(qǐng)單上，以便核對(duì)。 采血者要在申請(qǐng)單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時(shí)間，及時(shí)送檢。 血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對(duì)、無誤后再將血液注入。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ11 版本 /修訂號(hào) ： A/0 主題內(nèi)容 疑難配血操作程序 生效日期： 20210808 第 37 頁 共 2 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 疑難配血操作程序 ： 規(guī)范疑難配血操作流程 ,保證配血安全 . ： 適合血庫所有工作人員及值班人員 . ：輸血科主任負(fù)責(zé)對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 13 方法局限性： 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會(huì)帶來錯(cuò)誤的陰或陽性結(jié)果； 因?yàn)閮?chǔ)運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)在微管的頂部存有小水珠或在膠泡，在使用類似的玻珠 卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請(qǐng)棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn)有管內(nèi) 夜體 量不足或干裂，請(qǐng)不要 使用 ； 如果所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的濃度不符，可能會(huì)引起錯(cuò)誤結(jié)果； 使用非原廠的稀釋液來配制紅血球懸液可能會(huì)導(dǎo)致不良結(jié)果； 質(zhì)控結(jié)果必須 是 陰性，如果是陽性，檢測無效，用生理鹽水清洗紅細(xì)胞并重新配制懸液重新檢測，如果得到陰性質(zhì)控結(jié)果，則可以判讀結(jié)果； 為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，實(shí)驗(yàn)在室溫 25℃ 中進(jìn)行。用 3740℃ 生理 鹽水洗滌紅細(xì)胞可去除紅細(xì)胞表面附著的導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集的冷凝集素，可獲得可靠的正定型。 可節(jié)省樣品紅細(xì)胞和血漿； 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好， 避免主觀判讀結(jié)果的影響； ； 操作者更少接觸血液標(biāo)本。 10. 臨床意義 ： ABO、 Rh血型鑒定不合出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)。柱的底部也可看到一些紅細(xì)胞 +反應(yīng) 大部分凝集的紅細(xì)胞穿過玻璃珠的縫隙，在微柱的底部形成一個(gè)粗糙（而非平整）到紅細(xì)胞聚集帶。柱的地步也可看到少量紅細(xì)胞。 3+反應(yīng) 發(fā)生凝集的大部分紅細(xì)胞停留在玻璃珠的上半部分。部分溶血時(shí)，有可能出現(xiàn)（或不出現(xiàn)）凝集。用戶需要進(jìn)一步檢查以確定質(zhì)控反應(yīng)性的血清學(xué)基礎(chǔ)。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 35 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 陰性結(jié)果（ ）：紅細(xì)胞未凝集或無 溶血為陰性結(jié)果，表明紅細(xì)胞表明不存在相應(yīng)抗原。 9. 結(jié)果判斷模式 陽性結(jié)果（ +）：紅細(xì)胞凝集為陽性結(jié)果，表明紅細(xì)胞存在相應(yīng)的抗原。 (一卡 1人 ) 用 10ul加樣槍在第 6管中分別加 10ulA1,B標(biāo)準(zhǔn)反定細(xì)胞； 用 40ul加樣槍，分別吸40ul病人血清加入第 6管。 6. 試劑 試劑名稱： ORTho BioVue血型診斷試劑 卡、 （ 3 %） 試劑生產(chǎn)廠家： ORThoClinical Diagnostics,Inc。 . 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫保存 . 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 34 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 采血時(shí)要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時(shí)）在病人輸液時(shí)采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫必須與申請(qǐng)單上的病人姓名、科別、床號(hào)、編號(hào)完全一致。 5 標(biāo)本 ：新抽取的抗凝血 ： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 3ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時(shí)間必須大于 15分鐘 標(biāo)本采集要求 采血時(shí)，一定要認(rèn)真核對(duì)病室、床號(hào)和病人姓名，無誤后再抽血。 ORTho BioVue血型診斷系統(tǒng)采用柱凝集技術(shù)，柱內(nèi)有玻璃珠和試劑。因此，在進(jìn)行輸血和抗 D免疫球蛋白治療中選擇血液時(shí)，通常會(huì)抗慮 D抗原測定 使用這些試劑的操作步驟基于柱凝集原理。 D抗原能夠在缺乏 D抗原的人體內(nèi)刺激產(chǎn)生抗 D抗體。紅細(xì)胞中缺少 A 和 /或 B 血型抗原的正常成人個(gè)體，通常在其血清中含有相應(yīng)的抗體。 ：輸血科主任負(fù)責(zé)對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 14 參考文獻(xiàn) 《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ09 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒定 （微柱凝膠法 DiMed） 生效日期： 20210211 第 32 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊(cè) 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 33 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 血型鑒定（微柱法 ORTho） ：為了進(jìn)一步提高 ABO和 RH血型鑒定的檢測水平，以最大程度保障臨床輸血的安全性。 正反定型結(jié)果不一致原因 自身免疫性溶血性貧血引起的紅細(xì)胞被自身抗體包被； 紅細(xì)胞 A或 B抗原的弱化； 紅細(xì)胞懸液濃度過濃或過淡； 紅細(xì)胞抗原位點(diǎn)過少或抗原性減弱； 病人感染細(xì)菌或病毒后，細(xì)菌或病毒產(chǎn)生的酶使紅細(xì)胞上掩蔽的 T抗原暴露激活，由于正常人血漿中 都含有抗 T抗體，因此可于正常人血漿中產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型實(shí)驗(yàn)假陽性； 嚴(yán)重感染的病人，其血漿中白細(xì)胞過多，堵塞凝膠篩間隙，影響紅細(xì)胞的沉降，引起假陽性。 12. 超出范圍結(jié)果處理 紅細(xì)胞自凝：冷凝集素增高是最為常見的原因。 11. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ09 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒定 （微柱凝膠法 DiMed） 生效日期： 20210211 第 31 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 操作簡 單方便。 1+至 3+時(shí)需進(jìn)一步分析，可能為亞型或弱化抗原；反定管 1+至 4+均為陽性結(jié)果。 記錄。 在 DiaMed離心機(jī)中離心 10min。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記達(dá)亞美血型卡。 。 . 標(biāo)本儲(chǔ)存 待測標(biāo)本在 28℃ 下的保存時(shí)間為 72 小時(shí) ，已檢測標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。 采血者要在申請(qǐng)單和標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫清采血時(shí)間，及時(shí)送檢。 血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核 對(duì)、無誤后再將血液注入。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陰性；如果紅 細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陽性。 Rh 血型系統(tǒng)有 5 種抗血清，即抗 C 、抗 C 、抗 D 、抗 E 、抗 e，可以檢出 18 種不同的型別，但由于臨床實(shí)驗(yàn)室很難得到這 5 種抗血清，況且在 Rh抗原中，抗原性最強(qiáng)，出現(xiàn)頻率最高，臨床上影響最大的是 D 抗原，所以臨床上一般只作 D 抗原的鑒定，受檢者紅細(xì)胞能與抗 D 血清凝集者為 Rh 陽性，不凝集者為陰性。 4 原理 ABO血型系統(tǒng)的紅細(xì)胞遺傳表型是根據(jù)每個(gè)人紅細(xì)胞上是否存在 A和 /或 B抗原以及血清中相應(yīng)的抗體來決定的，將人分為四種血型： A型、 B型、 AB型和 O型。 ：適用于目前輸血科所有血型檢測標(biāo)本。 經(jīng)上述處理以后仍然失控，應(yīng)停止相關(guān)失控檢測項(xiàng)目（可使用替代檢測方法），立即與試劑或儀器廠家溝通，尋求技術(shù)上的支持。 SOP常規(guī)操作 ：陽性質(zhì)控出現(xiàn)相應(yīng)的強(qiáng)度的凝集，陰性質(zhì)控不出現(xiàn)凝集，否則為失控。否則為失控。 結(jié)果分析： IgM 類抗體質(zhì)控反應(yīng)結(jié)果與預(yù)期一致， IgG 組陽性質(zhì)控主側(cè)凝集，次側(cè)不凝。 IgG組陽性質(zhì)控品：衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)中選擇 1個(gè)含有不規(guī)則抗體（ IgG）的質(zhì)控標(biāo)本作為受者，一個(gè)含有與該受者不規(guī)則抗體反應(yīng)的抗原并且與該手指 ABO同型的質(zhì)控標(biāo)本作為供者； IgG組陰性質(zhì)控品：衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)中選擇 1個(gè)含有不規(guī)則抗體（ IgG）的質(zhì)控標(biāo)本作為受者，一個(gè)不含有與該受者不規(guī)則抗體反應(yīng)的抗原并且與該手者 ABO同型的質(zhì)控標(biāo)本作為供者。 ：每次檢測出血型結(jié)果必須是一致并與質(zhì)控品原來血型一致，凝集強(qiáng)度正鑒定無誤差，否則為失控。陽性結(jié)果均為 4+）。 、 RhD血型鑒定質(zhì)控 質(zhì)控品來源：本實(shí)驗(yàn)室 內(nèi)檢測出的 A型 Rh陰性 EDTA抗凝血全血標(biāo)本及 B 型 Rh陽性 EDTA抗凝血全血標(biāo)本。在有效期內(nèi)，外觀合格。詳細(xì)操作見凝聚胺法交叉配血 SOP。 ： IgG 類抗體陽性質(zhì)控：標(biāo)化后的 IgG 抗 D 與 O 型 RhD 陽性紅細(xì)胞進(jìn)行合血； IgG類抗體陰性質(zhì)控： AB型血清（經(jīng)確認(rèn)無不規(guī)則抗體）與 O型 RhD陽性紅細(xì)胞進(jìn)行合血。 IgM類抗體質(zhì)控品 :3個(gè) ABO血型互不相同的 EDTA抗凝血全血標(biāo)本，其中一個(gè)作為受者，另外 2個(gè)作為供者。 ：有效期，外觀， IgG類抗體陰性、陽性質(zhì)控， IgM類抗體質(zhì)控。 ：每新一批次，同批次新開瓶時(shí)檢測效價(jià)；每日開始試驗(yàn)時(shí)按常規(guī)操作檢測陰陽質(zhì)控。效價(jià)：抗 A血清效價(jià)≥ 256,抗 B血清效價(jià) ≥ ：凝集開始時(shí)間15s,3min凝集塊 1mm2,外觀合格，并在有效期內(nèi)才合格，否則失控。 ：特異性：抗 A只能和 A細(xì)胞發(fā)生凝集，抗 B只能凝集 B細(xì)胞，凝集強(qiáng)度4+。 ：每新一批次，同批次新開瓶，每日開始試驗(yàn)時(shí)采用相互驗(yàn)證的方法檢測ABO細(xì)胞和抗 A、 B血清的凝集強(qiáng)度，特異性。 4 具體程序 ：抗 A抗 B 血清試劑要進(jìn)行抗體效價(jià)、特異性、親和 力的測定， ABO 紅細(xì)胞懸液要進(jìn)行特異性檢測。 2 范圍 適用于本院輸血科工作人員室內(nèi)質(zhì)量控制。如果可能，可以增大稀釋稀釋容量。 6 注意事項(xiàng) ，避免稀釋不勻出現(xiàn)“跳管”現(xiàn)象。 1份血清重復(fù)測定，結(jié)果可能不一樣，如果只有一個(gè)稀釋度的差別，是正常誤差范圍。 5 結(jié)果判斷 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 抗血清效價(jià)測定 生效日期： 20210211 第 25 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，或置室溫 1小時(shí)觀察結(jié)果。 15分鐘。 2%A或 2%B型紅細(xì)胞生理鹽水懸液 ，混勻。同樣操作，再配制以上濃度 10支小試管，已作對(duì)照操作。 10支小試管，用加樣器每管中加生理鹽水 ，在第一管中加入 A或抗 B血清，混勻后吸取 ，以此類推，至第 10管，最 后棄去 。 將被檢抗血清用生理鹽水作倍比稀釋后，加入一定量的抗原紅細(xì)胞，觀察凝聚強(qiáng)度。 ： Ⅰ Ⅰ名稱： ABO血型定型試劑（人血清） Ⅰ生產(chǎn)廠家：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所、四川協(xié)和生物技術(shù)有限責(zé)任公司 Ⅰ組成 試劑 A血清，效價(jià) 256， 28℃避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用。 13. 參考文獻(xiàn) 《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗(yàn) （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 23 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊(cè) 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容