肌肉蛋白質(zhì)來識別肉的種類以及加熱肉品終點溫度的確定(ppt58)-食品飲料(編輯修改稿)
2024-09-19 17:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 料庫下載 抗原的選擇 ? 大多數(shù)對于原料肉種類的免疫檢測方法都采用多克隆方法來處理整個血 清或血清蛋白。因為血清蛋白的存在可能是必須的，肌肉組織中殘余的血漿成分會發(fā)生變化，那么便意味著肌肉組織的存在，進而可以得出結(jié)論：用這些多克隆技術(shù)來定量的估計攙雜物的量是不可靠的。肌肉蛋白質(zhì)的存在是顯著的 ,預(yù)示了雞肉 來自 料庫下載 ? 組織存在的可能性比血清蛋白存在的可能性要大。對于肉種類的多克隆技術(shù)已用于可溶性粗蛋白的分析中或凈化肌肉 成分，例如肌鈣蛋白和肌紅蛋白。這些 檢測方法的優(yōu)點在于容易獲得提取樣品，更重要的一點在于對傳統(tǒng)檢測方法的改進與發(fā)展。不溶性肌肉蛋白如連接蛋白 也可以用于單抗體的分析方法中，來確認(rèn)原料禽肉的種類。然而不溶性蛋白的 提取需要特殊的步驟。這些方法毫無疑 問的可以應(yīng)用于法律事件的檢測中，但 來自 料庫下載 ? 不適用于常規(guī)檢驗分析或產(chǎn)地檢驗。 因為通過加熱處理后，大多的蛋白質(zhì)變性并且成為不可溶的， 所以使用抗體來處置本源蛋白質(zhì)的方法 不可以用于加熱處理過的肉類。 對于加熱的肉類的確認(rèn)也應(yīng)用熱穩(wěn)定蛋白。 在解決特定種類熱穩(wěn)定性組成方面已做了 十分大的努力。用 IEF方法， Jones和 Mortiner(1985)說明了 來自腎上腺和肌肉組織的 BE抗原蛋白具有熱穩(wěn)定性。 但是不同類型 BE抗原的特性是顯著不同的， Sherikar使用 SDS聚 來自 料庫下載 ? 丙稀酰胺凝膠電泳的方法檢測了不 同種類的 BE抗原，并且得出結(jié)論在 BE蛋白中肌鈣蛋白 T 屬 于特定種類蛋白部分。 沒有 經(jīng) 過加熱處理 的從 肌肉組織中分離的具有抗熱性 的 糖蛋白應(yīng)用于多克隆抗體技術(shù)中。這些抗體已應(yīng)用于夾心 ELISA中用于鑒別加熱和罐裝肉類食物中 。這些方法在商業(yè)檢測中是十分有效的， 并且也應(yīng)用于 USDA對加熱肉品種類確認(rèn)的調(diào)查中。大多對于加熱肉品種類的 確認(rèn)中大都使用多克隆抗體技術(shù)方法 .最近在 來自 料庫下載 我們 實驗室中對單克隆抗體技術(shù)確認(rèn)加熱肉種類的研究中也取得了 一 定的進 展。用于加熱處理肉類蛋白鑒別的單克隆抗體技術(shù)也可用于原料肉的鑒 別 中，因為在準(zhǔn)備檢測樣品時這些原料肉可以十分容易的被加熱處理。 來自 料庫下載 3 單克隆抗體技術(shù)用于加熱處理肌肉蛋白的確認(rèn) 單克隆抗體介紹 ? 用于熱穩(wěn)定性或抗熱性蛋白的不同抗原已經(jīng)用于發(fā)展抗體技術(shù)來確認(rèn)加熱肉品的種類。熱穩(wěn)定性這一個詞在字典中被十分清晰的定義，大多情況下，它指經(jīng)過加熱處理的肉類浸提物中保持可溶性 和抗原性的完整蛋白或蛋白碎 片。如果一種特定分析蛋白已知應(yīng)用于一種特定的種類確認(rèn) ,那么在免疫分析技術(shù)中 來自 料庫下載 ? 使用提純蛋白可以增加對于特定種類抗原決定基的免疫反應(yīng)機會。然而對于雜交瘤的分泌物并不一定完全需要提純蛋白作為抗原，由于在挑選適宜特定種類蛋白主要方面缺少足夠多的知識技術(shù)， ? 所以在單克隆抗體技術(shù)中我們使用加熱處理過的可溶性粗肌肉蛋白作為免疫源。在加熱之后，純的肉類蛋白質(zhì)顯著減少，這樣在提取物中只有熱穩(wěn)定性或熱抗性的部分蛋白質(zhì)仍保持可溶性。對期望的特性應(yīng)用 MABS（單克隆抗體技術(shù)）檢測 來自 料庫下載 ? 時應(yīng)選擇雜交克隆分泌物，而且必須要經(jīng)過仔細(xì)的鏡檢和亞克隆。對于準(zhǔn)備抗原有兩種方法 :1)用蒸餾水或鹽水對粗瘦肉進行攪拌，過濾物可以作為免疫原。 ? 2）瘦肉混于 ，沸水加熱并且離心 .上層液 121℃ 30分鐘高溫滅菌過濾，用 90﹪ 乙醇進行萃取，沉淀，干燥物溶于鹽溶液中備用。來自免疫老鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后可作為雜交產(chǎn)物。在我們的實驗室中， 遵 守由 Kohler 和 Milstern描述的一般程序，那便是在隨后 來自 料庫下載 ? 的步驟中要進行必要的修飾。 ELISA鏡檢是用于經(jīng)過選擇實驗的與抗 原 對應(yīng)的克隆體，同時用異種的浸提物和 別的食物蛋白通過交叉反應(yīng)來穩(wěn)定雜交 物。雜交產(chǎn)物具有我們所期望的特性 ， 之后通過限定性稀釋程序?qū)χ寺≈? 少兩次以獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞鏈。 SDSPAGE和 免疫點技術(shù)用于確 認(rèn) 每種單克 隆肉類浸提物種抗原的成分。 來自 料庫下載 單克隆抗體的特點 ? 目前為止，五種免疫球蛋白單克隆抗體技術(shù)在實驗中已用于摻雜肉種類的 檢測。單克隆抗體 2F8同五種經(jīng)過加熱的哺乳動物肉發(fā)生 十分強烈的反應(yīng) ，但不同任何加熱的禽肉發(fā)生反應(yīng)。 3E12同禽肉 反應(yīng)，5D2主要用于雞和火雞的鑒別中。 9C6只特定于雞， 5H9只用于豬肉。 第一 組 四種單克隆抗體技術(shù)用于經(jīng)水或鹽水浸 提過的經(jīng)過加熱處理的肌肉蛋白，它 們 同 來自 料庫下載 ? 特別的加熱肉提取物發(fā)生了強烈的反應(yīng)，但不同原料肉和加熱處理后的肉相作用。免疫印跡結(jié)果表明所有的單克隆抗體同加熱處理肉提取物中兩條或更多條蛋白帶發(fā)生反應(yīng)，除了 5H9以外，但它可檢 測豬肉浸提物 中單一帶。 5H9也同原料豬肉浸提物的三個蛋白帶發(fā)生反應(yīng)，帶有 24KD的蛋白質(zhì)可以被確認(rèn) 為豬 肉
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