【正文】 氯羥吡啶的殘留量超標,要求我國政府銷毀所有產(chǎn)品,給我國造成很大經(jīng)濟損失。 此外,我國出口的畜禽產(chǎn)品還多次出現(xiàn)安眠酮類、雌性激素、抗生素等藥物殘留超標而被取消出口的事件。目前,我國肉、蛋、奶的出口形勢仍相當(dāng)嚴峻。,第二十九頁，共一百二十一頁。,樣品前處理是指樣品的制備和對樣品中的待測組分進行(j236。 不同樣品前處理方法的選擇，需要根據(jù)樣品中危害殘留物質(zhì)的特點。,第三十一頁，共一百二十一頁。 肌漿蛋白(肌紅蛋白、糖解酶)可溶于水,肌原蛋白(肌球蛋白、肌動蛋白)溶于濃鹽水,膠原蛋白和彈性蛋白(結(jié)締組織)在上述溶劑中均不溶。同樣的方法提取豬肌肉樣品,回收率僅為10%,改用25%乙腈提取時回收率明顯提高,推測呋喃唑酮與豬肉中某種蛋白質(zhì)結(jié)合較強。它是一種良好的細菌培養(yǎng)基,因而需立即冷藏或防腐處理。zh236。,在所有體液樣品(y224。 尿樣pH變化范圍大,分析前需調(diào)節(jié)到一致的pH值。)液體稱為血清(serum)。ngzh236。,第三十七頁，共一百二十一頁。 全血樣品放置或自貯存處取出解凍之后,可明顯分為上、下兩層,上層為血漿,下層為血細胞,但輕微搖動(y225。因為從抗凝血制備血漿的速度較快,并且分離出的血漿量比血清多,所以應(yīng)用血漿比較方便。ng)程度的結(jié)合,一些藥物甚至蛋白結(jié)合率可達90%以上。 nǎi)的含水量約87%,蛋白質(zhì)(以酪蛋白為主)為3.3%,脂肪(甘油三酯)為3.7%,糖類(乳糖)為4.7%,以及一些無機鹽、維生素和酶類(過氧化物酶、脂肪酶等)。,第四十一頁，共一百二十一頁。ul237。 蛋黃的含水量約50%、蛋白質(zhì)16.5%、脂肪33%、糖類0.2%,以及一些無機鹽、維生素和酶類(淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶和過氧化氫酶) 蛋清含水量達88%,蛋白質(zhì)10.5%和極少量的碳水化合物和脂肪。,第四十三頁，共一百二十一頁。 與尿液類似,蛋成分的pH變化范圍大,分析前需調(diào)節(jié)pH值。i)和貯存,樣品的制備方法，依據(jù)(yīj249。 如對于肉類有的國家法枧規(guī)定要以脂肪計算食品安全危害物的量,有的要求以全樣來計算。n jiānɡ)后進行縮分。c,第四十七頁，共一百二十一頁。i s249。,第四十八頁，共一百二十一頁。而塑料容器常含有高沸點的增塑劑,可能釋放到樣品中造成污染,而且還會吸留某些藥物,引起分析誤差。ngpǐn)均勻化,對于血漿、奶、尿液樣品,可置渦旋混合器上混勻,以免造成測定誤差。ngsh237。nb225。蛋白質(zhì)還會污染儀器或惡化測定條件,如直接進樣用液相色譜分析含蛋白質(zhì)的體液樣品時,蛋白質(zhì)會沉積在色譜柱上,這不僅影響柱效,而且大大縮短色譜柱的使用壽命。 通常除蛋白的方法是在含蛋白樣品中加入適當(dāng)(sh236。,有機溶劑沉淀(ch233。 乙腈與蛋白形成致密沉淀,易離心除去,沉淀效率較甲醇高。,酸性(suān x236。j237。 其次應(yīng)注意,當(dāng)上(dānɡ sh224。,無機鹽沉淀(ch233。 常用的重金屬鹽類有汞鹽、銅鹽和鋅鹽等,它們能與蛋白質(zhì)形成不溶鹽而沉淀析出。,第五十六頁，共一百二十一頁。,第五十七頁，共一百二十一頁。 如果待測物易被某種酶分解,那么超濾除去該酶后就避免了待測物的分解。,五、冷凍干燥,冷凍干燥是貯存和預(yù)處理某些生物樣品的有效方法,適合于處理量大的樣品。)下?lián)]發(fā)去有機溶劑后再進行衍生化,則在加熱過程中會導(dǎo)致藥物分解或隨溶劑一起揮發(fā),因此也宜將這些樣品經(jīng)凍干處理后再行衍生化。jiē)升華,和其他揮發(fā)性雜質(zhì)一起被除去,使樣品干燥。,六、結(jié)合物水解(shuǐjiě),以結(jié)合狀態(tài)存在的藥物大多存在于尿中,但也存在于肝臟和血液中。ng)。,(2)酶水解(shuǐjiě),酶水解是專一性很強的水解結(jié)合物的方法。 尿液中通常存在以上兩種結(jié)合物,因此混合酶水解法具有實用價值。,第六十三頁，共一百二十一頁。 ②操作簡單快速、經(jīng)濟實用。ng)同類組分的萃取。,液液萃取的溶劑(r243。n)易溶于極性溶劑,反之亦然,應(yīng)根據(jù)被測組分的極性選擇相似極性的溶劑。 ③溶劑的毒性，使用對人體有害的溶劑萃取時,應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進行。,第六十六頁，共一百二十一頁。)混入水分的方法是加入無水Na2SO4脫水,減少混入的水溶性雜質(zhì)量。,萃取溶劑(r243。 另外,萃取時若往水相中加入少量比重大的有機溶劑(如氯仿),而該溶劑對藥物的溶解度又比較大,則可將藥物從水相中濃集于小體積的有機相中,若萃取時使用的是尖底試管,則富含藥物的有機相沉積于管尖部位,可直接取樣(qǔy224。zǐ)對試劑,一些酸性或堿性(jiǎn x236。,第六十九頁，共一百二十一頁。 X表示,X可為酸根或氫氧基,R為烷基。,注意事項：,液液提取有時會發(fā)生乳化現(xiàn)象以及被測組分損失。除對萃取所用的器具進行硅烷化處理以外,還常在萃取劑中加入異戊醇。,固相萃取(cu236。 固相分離有兩種實現(xiàn)樣品純化的途徑。,優(yōu)點(yōudiǎn)：,與經(jīng)典的液液萃取法相比,固相萃取的優(yōu)點有: ①快速,一般l~2min即可完成(w225。 ③精密度比較好。nli224。,第七十四頁，共一百二十一頁。 鍵合硅膠固相提取的一般操作步驟如下: ① 以適當(dāng)強溶劑濕潤固相萃取柱使其溶劑化。 ③將溶于弱溶劑常是緩沖溶液中的樣品加到固相提取柱上。,選擇(xuǎnz233。 （1）溶質(zhì)的極性： 分析物的極性與固定相極性非常相似時得到分析物的最佳保留。,第七十七頁，共一百二十一頁。yuē)。,第七十八頁，共一百二十一頁。,基質(zhì)(jī zh236。,MSPD是一種在SPE的基礎(chǔ)上改進后的樣品處理(chǔlǐ)方法，相對于SPE法，它的優(yōu)點在于： 依靠機械剪切力、C18鍵合相的去垢效應(yīng)和巨大的表面積，使樣品結(jié)構(gòu)破碎并且在填料表面均勻分散，濃縮了傳統(tǒng)的樣品前處理中所需的樣品勻化、組織細胞裂解、提取、凈化等過程，避免了樣品勻化、轉(zhuǎn)溶、乳化、濃縮造成的待測物損失，而且固定相處理樣品的比容量大，提取凈化的效率較高。n)技術(shù),柱切換技術(shù)是色譜分析中處理復(fù)雜樣品的方法之一。此法常用一種長3~5cm，填以粒徑25~40181。,第八十二頁，共一百二十一頁。nb249。tǐ)萃?。⊿FE）,超臨界流體萃取是一種較新的樣品預(yù)處理技術(shù)，以超臨界流體（常用二氧化碳）作為提取溶劑。密度越低,其性質(zhì)越接近氣體。r yǎng hu224。ng)填料的吸收管內(nèi),最后被收集瓶收集。 壓力的變化可以改變超臨界流體對物質(zhì)的溶解度,因此采用程序升壓就可以把溶解度從大到小的物質(zhì)先后從樣品中分離出來。 靜態(tài)法是將樣品在流體中浸泡一段時間后,再使被萃取物從樣品中分離出來。qǔ)（SPME）,固相微萃取的原理與SPE不同，是建立在待測物在固定(g249。 固相微萃取采用熔融石英光導(dǎo)纖維為固相吸附劑,將其浸泡在樣品溶液中時,樣品中的有機物被吸附在光導(dǎo)纖維的表面。)光導(dǎo)纖維不被折斷的作用。,第八十八頁，共一百二十一頁。 已有大量的應(yīng)用文獻報道。noafinity chromatograplly, IAC)是以抗原抗體的特異性、可逆性免疫結(jié)合反應(yīng)為原理的色譜技術(shù),其基本過程為將抗體與惰性基質(zhì)(如珠狀瓊脂糖、鍵合相硅膠)偶聯(lián)制成固定相,裝柱。 IAC的最顯著優(yōu)點在于對待測物的高效、高選擇性保留能力,特別適用于復(fù)雜樣品痕量組分的凈化與富集。)技術(shù),第三節(jié) 樣品衍生(yǎn shēnɡ)化技術(shù),第九十二頁，共一百二十一頁。 ③適合進一步做化合物的結(jié)構(gòu)(ji233。,第九十三頁，共一百二十一頁。d236。,(2)柱后衍生(yǎn shēnɡ)化,柱后衍生(yǎn shēnɡ)化是樣品經(jīng)色譜分離后,使衍生化試劑與色譜流出組分在系統(tǒng)內(nèi)進行反應(yīng),然后檢測衍生物。,實現(xiàn)(sh237。 ③衍生化試劑與色譜柱流出液的速度要匹配,混合迅速且均勻,以免產(chǎn)生噪聲。,二、HPLC柱后衍生(yǎn shēnɡ)化,(1)柱后衍生化裝置 柱后衍生化使色譜柱至檢測器之間增加(zēngjiā)了混合器與反應(yīng)器及多個連接部件,這些都將產(chǎn)生柱外效應(yīng),導(dǎo)致峰展寬。 zi)內(nèi)就是一個固相衍生化器。 大分子只能與擔(dān)體表面的試劑作用,而小分子可以進入擔(dān)體的所有反應(yīng)部位,因此當(dāng)有大分子干擾物存在時,只有痕量大分子發(fā)生衍生化,不干擾小分子待測物的檢測。 ②過量衍生化試劑不會進入檢測器,降低了檢測(jiǎn c232。 ⑤不需額外的混合器、管線、接頭等,減少了峰展寬因素。 優(yōu)點：酶反應(yīng)的專一性很強,因此方法的選擇性很高。 如果溶劑及其pH不合適,就可能使酶迅速失去活性。)器檢測(jiǎn c232。 檢測器：紫外可見檢測器、熒光檢測器或電化學(xué)檢測器。 ②色譜洗脫液對上述波長的光應(yīng)該透明。,第一百零二頁，共一百二十一頁。 ③在恒流條件下,有恒定和重現(xiàn)的動力學(xué)參數(shù)。柱后裂解能對色譜峰進行化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定,這一點與MS的作用(zu242。 濃集器主要有四類,即噴射分離器、燒結(jié)玻璃分離器、多孔膜和高聚膜。 氫反應(yīng)器能使色譜峰中含有鹵素或氮的組分還原成氫鹵酸和氨,然后進行庫侖檢測或電導(dǎo)檢測。 pǔ)的化學(xué)衍生化,須滿足的要求： ①反應(yīng)能迅速、定量地進行,而且對反應(yīng)條件要求不苛刻。,第一百零六頁，共一百二十一頁。 其次還要考慮樣品基質(zhì)和可能存在的干擾物質(zhì)的影響,有時可能要進行適當(dāng)?shù)姆蛛x或凈化后才能進行衍生化反應(yīng)。,可見(kěji224。n),衍生化試劑：高度共軛的芳香化合物,第一百零八頁，共一百二十一頁。 最常用的衍生化試劑是苯甲酰甲基溴和萘甲酰甲基溴。 羥基化合物很容易(r243。,D、羰基(tānɡ jī)化合物的衍生化,2,4二硝基苯肼(2,4DNPH)是較早應(yīng)用于酮、醛、羰基甾體和糖等羰基化合物的可見紫外衍生(yǎn shēnɡ)化試劑,產(chǎn)物為苯腙化合物,其反應(yīng)式為:,第一百一十一頁，共一百二十一頁。 熒光衍生物的激發(fā)波長和發(fā)射波長往往與試劑本身不同,因此熒光衍生化反應(yīng)既可在柱前也可在柱后進行。ngguāng)衍生化試劑,(1)磺酰氯類試劑 (2)氯甲酸酯類試劑 (3)異硫氰酸酯 (4)熒光胺 (5)含有(h225。ngguāng)衍生化,D、羰基化合物的熒光衍生化,(1)肼類試劑：丹磺酰肼 (2)鄰苯二胺及其類似試劑,7甲氧基香豆素3碳酰疊氮+伯醇/仲醇,第一百一十四頁，共一百二十一頁。 氧化電化學(xué)檢測法是優(yōu)先考慮的方法,因此具有(或能生成)前兩類基團的衍生化試劑更為常用。,五、用于氣相色譜的衍生(yǎn shēnɡ)化反應(yīng),GC柱前衍生化主要是將難揮發(fā)或熱不穩(wěn)定化合物通過化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變成易揮發(fā)和穩(wěn)定的化合物,然后再進行GC分析。,第一百一十七頁，共一百二十一頁。,第一百一十八頁，共一百二十一頁。jiē)分析羧酸。ng),?；芙档土u基、氨基、巰基的極性,改善這些化合物的色譜性能,?；€能增加氨基酸、糖類等化合物的揮發(fā)性,也能使兒茶酚胺等易于氧化的化合物的穩(wěn)定性增強。,內(nèi)容(n232。以結(jié)合狀態(tài)(zhu224