【正文】 SPE)是近十幾年迅速(x249。異戊醇能減少玻璃壁的吸附,還可減少萃取過程中乳化的形成。為了防止乳化,可應(yīng)用較大體積的有機溶劑,避免猛烈振搖或加入適當?shù)脑噭└淖?gǎibi224。 烷基碳鏈長度常用C4~C12,甚至可選用C20,碳鏈越長，則生成的離子對絡(luò)合物脂溶性越高。,陰離子藥物(y224。nɡ)較強的有機藥物在體液中呈離解狀態(tài),成為親水性極強的帶電荷離子,即使控制pH也不能抑制它們的電離,不能用有機溶劑將其自體液中提取出來。ng)分析,或?qū)⑵浞蛛x出來。ngj236。 萃取時于水相中加入有機相后,一般只萃取一次。,④溶劑與水的互溶性 有的溶劑如乙醚,萃取后可混入大約1.2%的水分,因此伴隨帶入一些水溶性雜質(zhì)。 在常用溶劑中,乙酸乙酯既安全又無毒,對不同(b249。 實際萃取被測組分時,還常于萃取溶劑中加人第二種溶劑,以調(diào)整極性,使達到選擇性萃取。ngj236。,提取→凈化(j236。 ③可將萃取液蒸發(fā),使組分富集。,七、樣品提取(t237。,第六十二頁，共一百二十一頁。 通常使用的水解酶是β葡糖苷酸酶或芳基硫酸酯酶,前者可專門水解藥物的葡萄糖醛酸苷,后者水解藥物的硫酸(li 水解后的樣品呈強酸性,必要時可用堿液調(diào)整pH后再進行萃取。常用的結(jié)合物水解的方法有: (1)酸水解 酸水解通常使用無機酸,如尿樣中結(jié)合物水解可加入適量的鹽酸液。 凍干后的樣品通?？芍苯蛹尤胗袡C溶劑萃取。,第五十九頁，共一百二十一頁。 例如,一些樣品中所含藥物水溶性很強(不容易被有機溶劑萃取),可凍干后再進行液固萃取。在殘留分析中超濾法常用于牛奶、血液中游離藥物濃度和藥物血漿蛋白結(jié)合率的測定。,超濾法,超濾法是另一種除去樣品中蛋白和其他大分子的方法,也是一種薄膜分離技術(shù)。,透析法,透析法與超濾法也是除去樣品中蛋白的方法。 如可用HgCl2作為蛋白沉淀劑處理血漿樣品,離心后用比色法測定上清液中的水楊酸濃度。ndi224。nɡ)清液再用乙醚等有機溶劑萃取時,三氯醋酸則連同溶入其內(nèi)的雜質(zhì)會進入有機相,也可能干擾藥物的分析。)形成白色沉淀(必要時可加熱使沉淀完全),離心后可得到澄明的上清液。nɡ)沉淀,常用的酸性沉淀劑有三氯醋酸和高氯酸,其他還有鎢酸、鉬酸、磷鎢酸、磷鉬酸和苦味酸等。 使用時應(yīng)加入足量的沉淀劑,通常加入量為樣品(y224。ndi224。d224。 目前已有很多去蛋白方法可供使用,但使用各種方法之前應(yīng)了解該方法是否會導(dǎo)致生物樣品中的藥物發(fā)生分解或影響藥物的提取等。i)處理,生物樣品如肝臟、腎臟、血漿等含有大量的蛋白質(zhì),它們能結(jié)合藥物,因此對于某些藥物的測定,必須先將與蛋白結(jié)合的藥物游離之后(zhīh242。)還應(yīng)注意取樣的代表性問題。 對于肌肉、組織、糞便等半固體樣品都存在均勻化這一問題。 某些藥物特別是堿性藥物還會被玻璃容器表面吸附,影響樣品中藥物的定量回收,因此,必要時應(yīng)將玻璃容器進行硅烷化處理。,冷凍時,若使用玻璃容器(r243。)冷凍、微波照射、勻漿及沉淀、加入酶活性阻斷劑(通常加入氟化鈉)等。,對于一些易代謝的藥物,如磺胺類、聚醚類、同化激素,它們的肝和腎臟樣品不宜長期存放,理想的冷凍溫度應(yīng)為40℃~80℃ 。n),冷凍保存是最常用的方法,一般冷凍溫度為20℃,此時生物樣品如血漿、尿液和組織樣品均被凍凝,可以終止樣品中酶的活性,又可以貯存樣品。 生物樣品采樣后除立即分析外,都需要在適當條件下保存,目的是避免被測組分發(fā)生分解或產(chǎn)生其他化學(xué)變化。,第四十五頁，共一百二十一頁。)法規(guī)要求的不同和食品本身特性的差異而不同。,第四十四頁，共一百二十一頁。,如果需要分別測定蛋黃和蛋清中的殘留,最好將剛產(chǎn)出后的蛋分離蛋黃和蛋清,避免藥物(y224。 與蛋清相比較,蛋黃基本上為疏水性環(huán)境,低極性藥物(y224。)出來。,非解離性的或極性較低的藥物易由血漿向奶中擴散,導(dǎo)致奶中殘留。 奶是一種復(fù)雜的非均相體系。因此在萃取之前,必須將結(jié)合態(tài)的藥物游離出來。若血漿中含有抗凝劑對測定有影響,則應(yīng)使用血清樣品。o d242。,第三十八頁，共一百二十一頁。)后血細胞會緩緩沉降,1~2h沉降完全,上層的黃色液體稱為血漿(plasma)。 分離血清時,可將凝結(jié)后的血液置離心機中離心,將上層血清轉(zhuǎn)入另外容器中保存,得到的血清,一般可占全血量的40%左右。,第三十五頁，共一百二十一頁。ngpǐn)中,尿樣最容易獲得,并且樣品量多,內(nèi)含藥物(母體藥物及代謝物)濃度高。)細菌的繁殖。 冷藏條件一般可置4℃ 冰箱內(nèi)。 肝或腎組織為代謝或排泄器官,殘留物濃度高,消除緩慢,因此常被作為殘留檢測的靶組織。,第三十二頁，共一百二十一頁。,一、生物(shēngw249。 殘留分析中的樣品主要是各種食用組織(肌肉、脂肪、肝、腎、皮、血液、蛋、奶及其加工食品)。nx237。,第六章 獸藥殘留檢測(jiǎn c232。 我國已開始重視動物性食品中的獸藥殘留問題,制訂了各種(ɡ232。,第二十七頁，共一百二十一頁。 出口到德國的蜂蜜由于農(nóng)藥“殺蟲脒”殘留超標而被退貨,接著歐共體、美國、日本也相繼拒絕進口我國蜂蜜,使我國蜂蜜在世界市場上的銷售發(fā)生嚴重因難。)的現(xiàn)狀與法規(guī),獸藥殘留主要是由于不合理使用藥物治療動物疾病和作為飼料(s236。這是動物屠宰前或其乳和蛋上市前停止用藥時間長短的一種反映。)大多數(shù)抗微生物藥來說,藥物從動物體內(nèi)消除屬一級動力學(xué),而大多數(shù)組織中藥物殘留抗微生物活性的喪失是一個零級動力學(xué)過程。 烹調(diào)和貯藏溫度亦影響殘留藥物在組織中的穩(wěn)定性。 組織中藥物殘留隨藥物種類(zhǒngl232。i)主要包括: 抗生素類、合成抗菌素類、抗寄生蟲類藥、生長促進劑和殺蟲劑等。 第二類是共價結(jié)合代謝物,因其從機體排出相對較慢,它們的存在對于靶動物有潛在的毒性作用,而對于消費者,由于結(jié)合殘留在人體內(nèi)不可能再活化,其生物(shēngw249。,第二十二頁，共一百二十一頁。ngq236。 ④ 以未經(jīng)批準(pī zhǔn)藥物作為添加劑飼喂動物。nliw249。 gāo)動物的繁殖和加快生長發(fā)育速度, 使用于動物的激素有性激素和皮質(zhì)激素。,第十八頁，共一百二十一頁。,4. 抗寄生蟲類藥物,主要用于驅(qū)蟲或殺蟲, 如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。,3. 硝基(xiāo jī)呋喃類藥物,主用于抗菌消炎, 如呋喃唑酮、呋喃西林(fūn225。ow249。i)與危害 1. 抗生素類藥物,多為天然發(fā)酵產(chǎn)物(chǎnw249。 (5)鎮(zhèn)靜劑和β腎上腺素阻斷劑 為了控制被運輸及等待屠宰的動物的緊張,有些畜牧業(yè)會非法使用鎮(zhèn)靜劑和腎上腺素阻滯劑。,第十三頁，共一百二十一頁。 (2)生長激素 是由動物腦垂體分泌的天然蛋白質(zhì)激素,主要通過促進蛋白質(zhì)合成和脂肪分解來促進動物生長,增加瘦肉率,提高飼料(s236。 (3)殺蟲藥： 有機磷化合物、擬除蟲菊酯類化合物等。)作用的特點，抗寄生蟲藥可分為:,(1)抗蠕蟲藥： 苯并咪唑(mī zu242。 某些人畜共患寄生蟲病,還能直接威脅人類的健康和生命安全。 畜禽寄生蟲病的危害性極大,會給國民經(jīng)濟造成無法估量的巨大(j249。 (10)硝基(xiāo jī)呋喃類：呋喃西林、呋喃他酮、呋喃要因、呋喃唑酮等。 (7)多肽類： 桿菌肽、黏菌素等。 (3)四環(huán)素類： 土霉素、金霉素、多西環(huán)素等。,根據(jù)(gēnj249。),生長促進劑,抗菌藥：磺胺藥、呋喃類藥、喹諾酮類,抗病毒藥：干擾素,抗蠕蟲藥,抗原蟲藥,殺蟲藥,抗生素：青霉素、鏈霉素、氯霉素,第七頁，共一百二十一頁。n)獸藥,按用途(y242。按制訂世界或地區(qū)性法規(guī)標準 (Codex Standart)的8個步驟,制定動物組織及產(chǎn)品中獸藥最高殘留限量(MRL)法規(guī)及休藥期法規(guī)。 CCRVDF的主要宗旨是:為控制食品中的獸藥殘留,篩選并建立適用(sh236。i),引起(yǐnqǐ)過敏、致畸、致突變及致癌等不良反應(yīng)。)重要原因。nling)情況,據(jù)1966~1974年統(tǒng)計,美國大約(d224。ng)獸藥的目的,防治食品動物(d242。)檢測技術(shù),第一節(jié) 獸藥殘留(c225。nli,使用(shǐy242。,獸藥的使用(shǐy242。,獸藥的殘留(c225。 獸藥殘留主要是由于各種正常用藥和藥物濫用造成的,另外,休藥期過短, 是造成動物性食品獸藥殘留過量的另一個(yī ɡ232。,獸藥的危害(wēih224。 fǎ),為防止動物性食品中可能出現(xiàn)的藥物殘留損害人體健康,1984年在CAC的倡導(dǎo)下由聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)聯(lián)合發(fā)起組織了食品中獸藥殘留立法委員會(CCRVDF)。對獸藥殘留進行毒理學(xué)評價。nɡ ji224。ow249。,第八頁，共一百二十一頁。 (2) β內(nèi)酰胺類： 青霉素、頭孢菌素等。 (6)林可胺類： 林可霉素、克林霉素。 (9)磺胺類及抗菌增效劑： 磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺異唑、磺胺甲基異唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶等。,抗寄生蟲藥,抗寄生蟲藥是指能殺滅或驅(qū)除動物體內(nèi)外寄生蟲的藥物。 寄生蟲病不僅引起大批畜禽死亡,而且嚴重影響動物生長率,使乳、肉、蛋、毛、革等畜產(chǎn)品質(zhì)量下降,數(shù)量減少。ow249。 (2)抗原蟲藥： 聚醚類離子載體抗生素、三嗪類、二硝基類、氯羥吡啶。tā)生長促進劑,(1)性激素 動物生產(chǎn)中使用的性激素,包括雌性激素(如:雌二醇、己烯雌酚(己烷雌酚、甲地孕酮、雌烯酮等)和雄性激素(如:甲基睪丸酮、丙酸睪酮、氯睪酮)。目前在畜牧業(yè)生產(chǎn)中使用的主要有牛生長激素(BST)和豬生長激素(PST)。與抗生素一樣,伴隨著激素活性物質(zhì)在畜禽生產(chǎn)中的使用種類和數(shù)量的不斷增加,反對使用的呼聲也越來越高。,二、常見獸藥殘留的種類(zhǒngl232。,2. 磺胺類藥物(y224。,第十六頁，共一百二十一頁。,第十七頁，共一百二十一頁。nɡ)的苯并咪唑類抗寄生蟲藥物有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。),主要用于提高(t237。,二、食物(sh237。,(2)獸藥殘留(c225。 ③屠宰前用藥掩飾臨床癥狀,以逃避屠宰前檢查。 ⑥飼料粉碎設(shè)備受污染或?qū)⑹⑦^抗菌藥物的容器(r243。 ⑧任意以抗生素藥渣喂豬或其他食品動物等濫用抗生素,是出現(xiàn)抗生素殘留的主要原因。但這些物質(zhì)可能具有毒性作用,而且被人攝入后在體內(nèi)可生成高度活化的中間產(chǎn)物(親電子基團、自由基等),因而對消費者具有潛在的危害性。,殘留毒理學(xué)意義較大的獸藥按其用途分類(fēn l232。,(4)影響食品動物組織(zǔzhī)中藥物殘留的因素,經(jīng)內(nèi)服或注射給藥的動物,其組織中存在的藥物及其代謝物或降解產(chǎn)物的殘留。 屠宰后胴體加工過程也是影響藥物殘留檢出率的因素之一。y 實際上,存在于家禽食用組織、牛肉、羊肉、乳和蛋中的藥物殘留的種類和發(fā)生率差異較大。nli 1990年出口日本的1萬噸肉雞,由于檢測出抗球蟲藥