【正文】 (zh236。 舉例：樣品的溶劑是正己烷時(shí)，反相柱就不合適，因?yàn)檎和槭菑?qiáng)溶劑，分析物不會(huì)有保留；當(dāng)樣品溶劑是水時(shí)，可以用反相柱，因?yàn)樗侨跞軇?，不影響分析物的保留?第七十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,第八十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,柱切換(qiē hu224。n)樣品凈化、組分富集等目的。然后按預(yù)先設(shè)定的程序改變切換閥的流路，將流動(dòng)相Ⅱ引入預(yù)柱中，流動(dòng)相Ⅱ洗脫出的被測(cè)組分隨即進(jìn)入分析柱，經(jīng)分離后進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)。 ③適于不穩(wěn)定樣品，如易光解、熱不穩(wěn)定樣品的分析，全部(qu225。,超臨界流體(li 密度越高,其性質(zhì)越接近液體。,超臨界二氧化碳(232。萃取物隨流體通過(guò)限流管降溫后進(jìn)入有少量(shǎoli224。,對(duì)于極性較大或者離子型化合物,可選擇氨等萃取劑。 動(dòng)態(tài)法是讓流體一次通過(guò)樣品,這種方法適合溶解度較大的樣品。,固相微萃取(cu236。其樣品的前處理和操作也有很大的差異。,光導(dǎo)纖維是裝在類似于微量注射器的固相微萃取的針頭內(nèi),針頭起著導(dǎo)向和保護(hù)(bǎoh249。因此固相微萃取是一種簡(jiǎn)便、快速、無(wú)溶劑的前處理技術(shù)。包括固態(tài)(如沉積物、土壤等)、液態(tài)(地下水、地表水、飲用水、廢水)及氣態(tài)(空氣及廢氣)中的鹵代烴(包括鹵代芳烴)、有機(jī)氨農(nóng)藥、多環(huán)芳烴、胺類化合物以及石油類等。)親和色譜IAC,免疫親和色譜(Imm181。)的樣本雜質(zhì)則不受阻礙地流出IAC柱,經(jīng)洗滌除去雜質(zhì)后將抗原抗體復(fù)合物解離,待測(cè)物被洗脫,樣品得到凈化。,第六章 獸藥殘留檢測(cè)(jiǎn c232。 ②改變化合物的色譜性能,改善分離效果。 ④擴(kuò)大色譜分析的應(yīng)用范圍。 缺點(diǎn)：操作比較繁雜費(fèi)時(shí),容易引起誤差,影響測(cè)定(c232。,第九十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,第九十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。 ②衍生化試劑溶液與色譜流動(dòng)相能互相混溶,混合后不產(chǎn)生沉淀或分層,而且色譜流動(dòng)相適宜作衍生化反應(yīng)的介質(zhì)。,第九十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,(2)固相衍生(yǎn shēnɡ)化,將固體微粒(硅膠或高分子微球)填充于內(nèi)徑5~6mm、長(zhǎng)度25~30cm的柱子(zh249。 樣品通過(guò)時(shí)與反應(yīng)劑發(fā)生衍生化反應(yīng),這是一種非均勻體系的反應(yīng)。diǎn)：,①反應(yīng)試劑的局部濃度很高,有利于反應(yīng)進(jìn)行完全。 ④反應(yīng)受色譜流動(dòng)相的影響小。 現(xiàn)代的固定化酶反應(yīng)器都是將酶固定在擔(dān)體上,這實(shí)際上是一種特殊的催化劑型固相衍生化試劑。)穩(wěn)定性受擔(dān)體、溫度、溶劑、pH和酶抑制劑的影響。,(4)光化學(xué)衍生(yǎn shēnɡ)化,光化學(xué)衍生化是使色譜柱流出的組分在光照射下發(fā)生某種反應(yīng),所產(chǎn)生的衍生物再被檢測(cè)(jiǎn c232。 光源：高強(qiáng)度紫外燈、激光 反應(yīng)管可以纏繞在光源上, 或者編織成套直接套在光電管上。xū)符合下列條件:,①待測(cè)組分能夠吸收適宜波長(zhǎng)的光,可以想象它們應(yīng)該是芳香(fāngxiāng)或共軛不飽和化合物。 ⑤反應(yīng)產(chǎn)物足夠穩(wěn)定,而且能用上述檢測(cè)器之一進(jìn)行檢測(cè)。 ②設(shè)備簡(jiǎn)單(jiǎndān),不需額外儀器(泵等),也不需要任何衍生化試劑,減少了污染。,三、GC柱后衍生(yǎn shēnɡ)化,(1)柱后裂解器 裂解器是一個(gè)石英或金線圈或者是一個(gè)氧化還原器,在反應(yīng)器后檢測(cè)分析各色譜組分裂解產(chǎn)生的C、H、O和N元素。 (2)柱后濃集器 柱后濃集器主要用于GCMS,但是也能改善其他檢測(cè)器的信噪比。除去水后,以熱導(dǎo)池檢測(cè)甲烷。,四、用于液相色譜(s232。 ④衍生化試劑方便易得。)要考慮的因素,首先要考慮的是待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì),根據(jù)這一點(diǎn)可以找出可能合適的衍生化反應(yīng)及相應(yīng)的分離和檢測(cè)方法。,第一百零七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。 化學(xué)反應(yīng)式：,引入發(fā)色基團(tuán)(jī tu225。)。,C、羥基(qiǎngjī)化合物的衍生化,羥基化合物包括類固醇和氨基糖苷類抗生素,還有醇和酚。 (1)酰氯類試劑：苯甲酰氯及其衍生物 (2)異氰酸苯酯(PIC),第一百一十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。 但是大多數(shù)藥物及生命重要物質(zhì)如氨基酸、生物胺、甾體和脂肪酸等本身都不具有熒光,因此(yīncǐ)必須與熒光衍生化試劑反應(yīng)接上能產(chǎn)生熒光的基團(tuán)后才能進(jìn)行熒光檢測(cè)。,熒光(y237。,B、羧酸(suō suān)的熒光衍生化,(1)香豆素類試劑：4溴甲基7甲氧基香豆素 (2)芳胺和醇作為衍生(yǎn shēnɡ)化試劑：9,10二氨基菲(DAP),C、羥基化合物的熒光(y237。 常見(jiàn)的電化學(xué)活性基團(tuán)包括氧化法檢測(cè)的酚和芳胺及能用還原法檢測(cè)的硝基苯。tā)電化學(xué)衍生化試劑 (2)羧酸的電化學(xué)衍生化 (3)羰基化合物的電化學(xué)衍生化,第一百一十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。 由于利用了這些衍生化反應(yīng),使GC在分析不穩(wěn)定生物活性物質(zhì)和藥物方面取得了重大成就。n)的化合物與硅烷化試劑反應(yīng)形成揮發(fā)性的硅烷衍生物,一般反應(yīng)式為: R3Si—X+H— R′—— R3Si—R′ +HX 最常用的硅烷化試劑是三甲基硅烷(TMS) 即R為一CH3。羧酸的揮發(fā)性也差,由于締合作用,其揮發(fā)性比按分子量大小預(yù)計(jì)的還要弱,因此難于用GC直接(zh237。,?；磻?yīng)(fǎny236。,第一百二十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。此外,還有一些生物樣品中的藥物需進(jìn)行衍生化,若采用常規(guī)的液液萃取,在一定溫度下?lián)]發(fā)去有機(jī)溶劑后再進(jìn)行衍生化,則在加熱過(guò)程中會(huì)導(dǎo)致藥物分解或隨溶劑一起揮發(fā),因此也宜將這些樣品經(jīng)凍干處理后再行衍生化。水解后的樣品呈強(qiáng)酸性,必要時(shí)可用堿液調(diào)整pH后再進(jìn)行萃取,第一百二十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。ngt224。ir243。 電子捕獲檢測(cè)器(ECD)是GC的最靈敏檢測(cè)器,適合于低濃度分析,如果通過(guò)?；磻?yīng)引入含有鹵原子的?；湍苓M(jìn)一步提高ECD檢測(cè)的靈敏度。 而羧酸酯的極性較弱,揮發(fā)性也強(qiáng),很符合GC的要求,所以許多羧酸在GC測(cè)定之前都要衍生化成相應(yīng)的酯,最常用的是甲基酯。,酯化反應(yīng)(fǎny236。,硅烷化反應(yīng)(fǎny236。 硅烷化是最典型的衍生化反應(yīng)(fǎny236。,第一百一十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,電化學(xué)衍生(yǎn shēnɡ)化,電化學(xué)衍生化是使樣品組分與衍生化試劑反應(yīng),生成具有電化學(xué)活性的衍生物,以便對(duì)電化學(xué)檢測(cè)有較靈敏的響應(yīng)(xiǎngy236。n yǒu)羰基的試劑 鄰苯二甲醛(OPA) (6)鹵代硝基苯并2惡1,3二唑類試劑 (7)氨基甲酸酯類試劑,A、胺類和氨基酸的熒光(y237。 熒光衍生物都有紫外吸收,因此也可用紫外檢測(cè),但紫外檢測(cè)靈敏度比熒光檢測(cè)低1~3個(gè)數(shù)量級(jí)。,熒光(y237。ngy236。 羧酸還可以先轉(zhuǎn)化成酰鹵再與芳香胺反應(yīng)生成可進(jìn)行紫外檢測(cè)的酰胺。,B、羧酸(suō suān)的衍生化,羧酸類化合物包括有重要生物活性的脂肪酸、前列腺素、膽汁酸和有機(jī)酸藥物(y224。n)紫外衍生化,A、胺類和氨基酸的衍生化 例如：許多藥物和內(nèi)源性生物活性物質(zhì)都含有氨基,其典型代表是氨基酸。 最后還要考慮將要采用(cǎiy242。,選擇衍生化試劑(sh236。 ②反應(yīng)的選擇性高,最好只與待分析組分發(fā)生(fāshēng)反應(yīng)。 另一種氫反應(yīng)器將含氮化合物轉(zhuǎn)變成氨后,再流進(jìn)一個(gè)裝置與鄰苯二甲醛(OPA)和巰基乙醇反應(yīng),并進(jìn)行熒光檢測(cè)。,第一百零四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。y242。 因此,使反應(yīng)不完全甚至未達(dá)平衡,能進(jìn)行定量測(cè)定。,光化學(xué)衍生化的主要(zhǔy224。 ③光源在上述波長(zhǎng)處有足夠的光通量(光強(qiáng))。,柱后衍生(yǎn shēnɡ)化的一種形式,第一百零一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。)。HPLC流動(dòng)相中的固體微粒、細(xì)菌、某些金屬離子等都有可能使酶失去活性,應(yīng)當(dāng)除去。固定化后,酶的穩(wěn)定性大大提高,而且可以重復(fù)使用。,第九十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。)本底,提高靈敏度。,柱后衍生(yǎn shēnɡ)化的一種形式,第九十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。 固體微粒的表面通常經(jīng)過(guò)處理連接有反應(yīng)基團(tuán),叫作固相反應(yīng)劑。 連接部件產(chǎn)生的峰展寬決定于所用的材料、長(zhǎng)度和內(nèi)徑,需要仔細(xì)選擇。 ④衍生化反應(yīng)必須(b236。xi224。 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好,色譜分離相衍生化連續(xù)自動(dòng)進(jìn)行,而且衍生化不影響組分的色譜分離。ng)的準(zhǔn)確度。,(1)柱前衍生(yǎn shēnɡ)化,柱前衍生化是在色譜分離前,預(yù)先將樣品制成適當(dāng)?shù)难苌?然后進(jìn)行分離和檢測(cè)。g242。,一、衍生(yǎn shēnɡ)化,衍生化是將樣品中的待測(cè)組分制成衍生物,使其更適合于特定的分析方法。,第九十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。 當(dāng)含有待測(cè)組分的樣品通過(guò)IAC柱時(shí),固定抗體選擇性地結(jié)合待測(cè)物,其他不被識(shí)別(sh237。,第八十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,固相微萃取(cu236。 萃取時(shí)將針頭浸入被萃取液中,吸附平衡后再插入氣相色譜的進(jìn)樣口。吸附平衡后通過(guò)加熱可使被吸附的物質(zhì)解吸,被解吸的物質(zhì)可隨著載氣流入氣相色譜儀進(jìn)行分離測(cè)定。d236。 循環(huán)法是讓一定量的流體循環(huán)多次通過(guò)樣品,循環(huán)法既可以萃取難溶物質(zhì)同時(shí)又比靜態(tài)法萃取速度快。 根據(jù)(gēnj249。 超臨界流體萃取過(guò)程大致可分為下面三步: ①待測(cè)物質(zhì)從樣品基質(zhì)中釋放出來(lái)并擴(kuò)散、溶解進(jìn)入超臨界流體中； ②待測(cè)物質(zhì)從萃取器轉(zhuǎn)移至收集系統(tǒng)； ③降低超臨界流體的壓力，有效地收集被萃取的待測(cè)物。 t224。 超臨界流體既能溶解各種氣體不溶解的物質(zhì),又有氣體黏度小、滲透力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),可以快速、高效地將被測(cè)物從樣品中萃取出來(lái)。 超臨界流體的性質(zhì)如密度、粘度和擴(kuò)散性等處于氣體(q236。)過(guò)程在封閉狀態(tài)下進(jìn)行，避免了分離、濃縮等操作； ④富集作用，提高了檢測(cè)靈敏度，尤其是極性較大的組分，無(wú)法用液液萃取時(shí)，柱切換技術(shù)特別奏效。,柱切換(qiē hu224。m填料（類型取決于待測(cè)物的保留能力）的預(yù)柱，通過(guò)切換閥與分析柱連接。 利用切換閥改變不同的色譜系統(tǒng)，達(dá)到在線(z224。 MSPD處理樣品耗時(shí)短、節(jié)省溶劑、樣品用量少，該方法已被用于近40種的獸藥殘留分析。)固相分散技術(shù)（MSPD）,基本操作： 將樣品 (固態(tài)或液態(tài))直接與適量反相鍵合硅膠一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒的表面，制成半固態(tài)裝柱，然后后采用類似于SPE的操作進(jìn)行洗脫。,（3）其他(q237。 樣品溶劑強(qiáng)度相對(duì)該固定相應(yīng)該較弱溶劑會(huì)增強(qiáng)分析物在吸附劑上的保留。,（2）溶劑(r243。 兩者極性越相似保留越好以要盡量選擇極性相似的固定相。)SPE柱,選擇SPE固定相時(shí),主要依據(jù)兩個(gè)因素:需要提取的溶質(zhì)(r243。 ④以強(qiáng)度適當(dāng)?shù)娜跞軇?如含有少量甲醇的水或緩沖溶液洗滌、除去基質(zhì)或干擾組分。 ②以弱溶劑通常是水或緩沖溶液洗滌固定相,使其達(dá)到良好的分離狀態(tài)(zhu224。,固相萃取(cu236。o)(固相提取劑),自制的固相萃取柱填充疏松,溶劑能自然流出。 ④樣品用量少,有一定的選擇性,無(wú)乳化現(xiàn)象等。n ch233。一種是保留雜質(zhì),待測(cè)組分不被保留而自然流出或者被洗脫。qǔ)(SPE),固相萃取法(Solid phase extraction,