《基因工程final》ppt課件-全文預覽
【正文】 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ * * * * * * * * * * * * * * * * * * 磷酸化 磷酸化 磷酸化 退火 連接 退火 連接 退火 連接 粘性末端 粘性末端 合成的全基因 DNA 目的基因化學合成全片段酶促法連接示意圖 目的基因與運載體結合 形成重組 DNA 提取質粒并用限制酶切割 用 連接酶將目的基因和質粒連接 用限制酶切割目的基因和用 相同的限制酶 切割質粒使之出現一個切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的 黏性末端 與切口上的 黏性末端 互補配對后，在 DNA連接酶的作用下連接形成 重組 DNA分子 ? 基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和 動植物細胞 等。 變性，退火，和延伸。能將外源基因送入細胞的工具就是 運載體 條件： ② 含有限制性內切酶的位點 ① 能自我復制 ③ 含有篩選標記，一般為抗性基因或報告基因 ④ 能啟動外源目的基因的轉錄和翻譯 ⑤ 能在宿主細胞內復制并穩(wěn)定地保存 種類 質粒、噬菌體、病毒、不同 DNA片段組合載體 運載體 基因克隆載體 質粒是能自主復制的 雙鏈環(huán)狀 DNA分子 質粒克隆載體 大腸桿菌質粒載體 可以克隆10kb以下的片段 細菌人工染色體克隆載體 一般在 10kb以下，能承載 40kb左右的外源片段。 單酶切法 雙酶切法 部分酶切 DNA分子片段化 天然 DNA或化學合成的DNA常需酶切成可連接重組的 DNA片段，即DNA分子的片段化 。 Bam HⅠ BglⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 同尾酶和同裂酶 ② 同裂酶 （ isoschizomer） 有一些來源不同的限制酶識別的是同樣的核苷酸靶序列 ， 這類酶特稱為 同裂酶 。 ?旋轉對稱或左右互補對稱結構。 ?類型 ? Ⅰ 型限制酶 ? Ⅱ 型限制酶 ? III型限制酶 不同限制酶能專一地識別不同的特異核苷酸序列 第一個字母取自產生該酶的細菌屬名，用大寫；第二、第三個字母是該細菌的種名，用小寫；第四個字母代表株；用羅馬數字表示發(fā)現的先后次序。 重組 DNA操作一般步驟 生物材料 mRNA DNA RNA cDNA 文庫 基因組文庫 人工合成 目的基因 克隆載體 受體細胞 重組 DNA 克隆子 轉基因生物 基因工程操作的工具 限制性核酸內切酶 1. 將目的基因片斷從受體細胞內提取 ， 需要基因的剪刀 — 限制性核酸內切酶 。 Herbert W. Boyer, . 基因工程的誕生與發(fā)展 1975，發(fā)現 分子克隆工具酶 利用限制性內切酶（ Restriction endonuclease）切割產生特殊 DNA片段的能力使得純化那些 DNA片段成為可能 基因工程的誕生與發(fā)展 1978年，重組胰島素 1979年，人類生長激素 基因工程的誕生與發(fā)展 First transgenic animal, the golden carp, is cloned by Chinese scientists in 1981. Canada‘s first biotechnology pany, Allelix, is formed in 1995. ? Today Biotechnology has made a great impact in agriculture ,medicine ,food and many other products. 基因工程的誕生與發(fā)展 什么是基因 ? 編碼蛋白質或 RNA等具有特定功能產物的遺傳信息的基本單位，是染色體或基因組的一段 DNA序列。 ? 基因操作 (gene manipulation)。 利用 DNA體外重組或 PCR擴增技術從某
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