《基因工程載體》ppt課件 (2)-全文預(yù)覽
【正文】 性噬菌體溶菌生長的基本過程： 吸附 吸附到位于感染細(xì)胞表面的特殊接受器上 注入 噬菌體 DNA穿過細(xì)胞壁注入寄主細(xì)胞 轉(zhuǎn)變 被感染的細(xì)胞成為制造噬菌體顆粒的場所 合成 大量合成噬菌體特有的核酸和蛋白質(zhì) 組裝 包裝了 DNA頭部和尾部組裝成噬菌體的顆粒 釋放 合成的子代噬菌體顆粒從寄主細(xì)胞內(nèi)釋放出來 一種典型的烈性噬菌體的生命周期 （ 2） .噬菌體的溶原生命周期 溶原生長周期： 是指在感染過程中沒有產(chǎn) 生出子代 噬菌體顆粒，噬菌體的 DNA是整 合到寄主細(xì)胞染色體 DNA上，成 為它的一 個(gè)組成部分。 有些噬菌體的 DNA堿基不是由標(biāo)準(zhǔn)的A/T/C/G組成的。 ④ 測序方便 第二節(jié) 噬菌體載體 （ Bacteriophage，簡稱 phage） T4 Bacteriophage 一、 噬菌體的一般生物特性 可脫離寄主細(xì)胞生存，但不能進(jìn)行復(fù)制。且有抗菌素抗性 在含抗菌素和 Xgal的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 有藍(lán)色菌斑生長 帶外源 DNA插入的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的受體菌 載體產(chǎn)物失活，不能互補(bǔ) ?半乳糖苷酶的缺失。 但載體 MCS上插入外源 DNA后，仍然不能產(chǎn)生 ?肽！ IPTG 通過看培養(yǎng)皿上的菌斑的顏色就能直接知道是否有 DNA插入。不 能互補(bǔ)。 受體菌株： JM系列 、 TG TG XL1blue、 XS12 XS10 KK218MV118 DH5a pUC質(zhì)粒載體上的 lacZ’ 編碼 ?肽與這個(gè)缺失突變的 ?半乳糖苷酶“互補(bǔ)”，使它能形成 4聚體。 pUC18/19 Ampicillin 抗性 和 lacZ的 ?肽互補(bǔ) （藍(lán)白斑）相結(jié)合。 pUC pUC pUC pUCpUC1 pUC1 pUC19 ① 復(fù)制起點(diǎn) pBR322的 ori 但其上失去了克隆位點(diǎn)。 （ 5） pBR322的優(yōu)點(diǎn) ① 雙抗菌素抗性選擇標(biāo)記 插入失活，分兩次先后選擇： 沒有獲得載體的寄主細(xì)胞 ? 在 Amp或 Tet中 都 死亡。 ① 復(fù)制起點(diǎn) ori pMB1系列（來源于 ColE1）的 高拷貝 型復(fù)制起點(diǎn) ② Ampr基因 ③ Tetr基因 pSC101的 Tetr 基因。 （ 2）長度 kb。 當(dāng)帶有 抗菌素抗性基因 的 載體 進(jìn)入受體菌后，受體菌才能生長。理想的載體應(yīng)該有兩種抗菌素抗性基因。 如： pBR322： p表示一種質(zhì)粒，而“ BR”則是分別取自該質(zhì)粒的兩位主要構(gòu)建者 F. Bolivar和 R. L. Rodriguez， 322為編號。 三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建 第一階段（ 1977年前）：天然質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的利用，如 pSC101, colE1, pCR, pBR313和 pBR322。 帶有控制 大腸桿菌素（ colicin） 合成的基因。 1. 接合型質(zhì)粒： 不符合基因工程的安全要求。 1. 質(zhì)粒的一般生物學(xué)特性 （ 4）質(zhì)粒的空間構(gòu)型： ① 共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA（ cccDNA) 呈超螺旋（ SC）（ super coil） Covalent close circular DNA ③ 線形 DNA （ linear ， lDNA） 一條鏈上有一至數(shù)個(gè)缺口。 （ 1）分子量?。? 1— 200 kb （ 2） 編碼基因少： 2— 3個(gè)中等大小的蛋白質(zhì)。 按功能 : 克隆載體和表達(dá)載體。 （ 3）有一段多克隆位點(diǎn)。第二章 基因工程載體 vectors 1. 基因工程載體的概念 把一個(gè)有用的基因（目的基因 —— 研究或應(yīng)用基因）通過基因工程手段送到生物細(xì)胞（受體細(xì)胞），需要運(yùn)載工具（交通工具）攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，這種運(yùn)載工具就叫載體。 （ 2）有選擇性標(biāo)記。 3. 載體的種類 按工作方式 : 質(zhì)粒載體、噬菌體載體。 存在于細(xì)菌、霉菌、藍(lán)藻、酵母等細(xì)胞中。 如抗菌素抗性、代謝特
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