《fx基因工程》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 NA序列被 擴(kuò)增 而特意設(shè)計(jì)的載體 。 裸露、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立， 自我復(fù)制、雙鏈環(huán)狀， DNA分子 1． 2 基因工程的基本操作程序 （基因工程的操作步驟） 必修 II： 選修： 提取目的基因 與運(yùn)載體結(jié)合 導(dǎo)入受體細(xì)胞 目的基因表達(dá)與檢測(cè) 獲取目的基因 構(gòu)建表達(dá)載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 目的基因檢測(cè)與鑒定 提取目的基因的方法： ⑴ 直接分離基因 —— 鳥(niǎo)槍法 用限制酶切斷成許多片段 缺點(diǎn)：盲目性大，工作量大，成功率低。 （ 2）特點(diǎn)：（ 運(yùn)載體必備的條件 ） ①能在宿主細(xì)胞內(nèi) 并 ； ②具有多個(gè) ， 便于外源基因 連接 ； ③具有某些 ， 便于 進(jìn)行 篩選 。將 DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接，不需要模板。 原核生物 雙鏈 DNA的特定核苷酸序列 6 （兩個(gè)核苷酸之間的）磷酸二酯鍵 限制性 （特異性） 回文序列 平末端和黏性末端 ① 識(shí)別 ， ② 切割 ， ③ 一種 限制酶只能作用 。 限制性核酸內(nèi)切酶 GAATTC CTTAAG EcoRⅠ G CTTAA AATTC G 黏性末端 CCC GGG CCCGGG GGGCCC GGG CCC 限制性核酸內(nèi)切酶 平末端 SmaⅠ 限制酶的作用： 與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng)，限制外源 DNA， 保護(hù)自身 DNA。 基因拼接技術(shù) DNA重組技術(shù) 人的意愿 基因 修飾改造 細(xì)胞 遺傳性狀 基因工程的探索之路 基礎(chǔ)理論 的突破： （ 1） 的證明 —— 1944，艾弗里，肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) （ 2） 的確立 —— 1953，沃森和克里克， DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型 （ 3） 的破譯 —— 1963，尼倫伯格和馬太，破譯編碼氨基酸的遺傳密碼 DNA是遺傳物質(zhì) DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則 遺傳密碼 技術(shù)發(fā)明 使其實(shí)施成為可能： （ 1） 的發(fā)現(xiàn) —— 1967，羅思和海林斯基，質(zhì)粒能自我復(fù)制并可轉(zhuǎn)移 （ 2） 的發(fā)明 —— 1970，阿爾伯、內(nèi)森斯和史密斯，第一個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶 （ 3） 技術(shù)的發(fā)明 —— 1965，桑格，氨基酸序列分析技術(shù)； 1977， DNA序列分析 （ 4） 的實(shí)現(xiàn) —— 1972，伯格，構(gòu)建第一個(gè)體外重組 DNA分子 （ 5） 實(shí)驗(yàn)的成功 —— 1973，博耶和科恩，質(zhì)粒和 DNA片段重組 （ 6） 動(dòng)物問(wèn)世 —— 1980，第一個(gè)轉(zhuǎn)基因小鼠 （ 7） 技術(shù)的發(fā)明 —— 1988，穆里斯 基因工程的探索之路 基因轉(zhuǎn)移載體 工具酶 DNA合成和測(cè)序 DNA體外重組 重組 DNA表達(dá) 第一例轉(zhuǎn)基因 PCR基因工程的探索之路 基礎(chǔ)理論 的突破： （ 1） 的證明 （ 2） 的確立 （ 3） 的破譯 DNA是遺傳物質(zhì) DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則 遺傳密碼 技術(shù)發(fā)明 使其實(shí)施成為可能： （ 1） 的發(fā)現(xiàn) （ 2） 的發(fā)明 （ 3） 技術(shù)的發(fā)明 （ 4） 的實(shí)現(xiàn) （ 5） 實(shí)驗(yàn)的成功 （ 6） 動(dòng)物問(wèn)世 （ 7） 技術(shù)的發(fā)明 基因轉(zhuǎn)移載體 工具酶 DNA合成和測(cè)序 DNA體外重組 重組 DNA表達(dá) 第一例轉(zhuǎn)基因 PCR必修 II： —— 運(yùn)載體 —— DNA連接酶 選修： (限制性核酸內(nèi)切酶 ) 1． 1 DNA重組技術(shù)的基本工具 （基因工程的專(zhuān)用工具） 分子手術(shù)刀 分子縫合針 分子運(yùn)輸車(chē) —— 限制酶 基因的剪刀 基因的針線(xiàn) 基因的運(yùn)輸工具 1． 1 DNA重組技術(shù)的基本工具 （基因工程的專(zhuān)用工具） 限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶） （ 1）主要從 中分離純化出來(lái)。Geic Engineering 基因工程 指 按照 ，進(jìn)行 ，并通過(guò) 和 等技術(shù)，賦予生物以 ，從而 創(chuàng)造 出更符合人們需要的 和 。通俗地說(shuō)，就是按照 ，把 一種 生物的某種 提取出來(lái)，加以 ，然后放到 另一種 生物的 里， 定向 地 改造 生物的 。 原核生物 雙鏈 DNA的特定核苷酸序列 6 （兩個(gè)核苷酸之間的）磷酸二酯鍵 EcoRI限制酶 形成 2個(gè) “ 黏性末端 ” （反向互補(bǔ)）。 （ 3）切割 。 DNA連接酶： 兩個(gè) DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。 相同 單個(gè)的核苷酸 兩條 DNA片段 DNA模板 模板 都形成磷酸二酯鍵 都是蛋白質(zhì) 1． 1
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